區(qū)分沙門氏菌和金黃色葡萄球菌

1、區(qū)分沙門氏菌和金黃色葡萄球菌1目的：用革蘭氏染色法區(qū)分金黃色葡萄球和沙門氏菌2原理： 通過結(jié)晶紫初染和碘液媒染后，在細(xì)胞壁內(nèi)形成了不溶于水的結(jié)晶紫與碘的復(fù)合物，革蘭氏陽性菌由于其細(xì)胞壁較厚、肽聚糖網(wǎng)層次較多且交聯(lián)致密，故遇乙醇或丙酮脫色處理時(shí)，因失水反而使網(wǎng)孔縮小，再加上它不含類脂，故乙醇處理不會(huì)出現(xiàn)縫隙，因此能把結(jié)晶紫與碘復(fù)合物牢牢留在壁內(nèi)，使其仍呈紫色；而革蘭氏陰性菌因其細(xì)胞壁薄、外膜層類脂含量高、肽聚糖層薄且交聯(lián)度差，在遇脫色劑后，以類脂為主的外膜迅速溶解，薄而松散的肽聚糖網(wǎng)不能阻擋結(jié)晶紫與碘復(fù)合物的溶出，因此通過乙醇脫色后仍呈無色，再經(jīng)沙黃等紅色染料復(fù)染，就使革蘭氏陰性菌呈紅色。3藥品

2、：金黃色葡萄球菌，沙門氏菌；草酸銨結(jié)晶紫，番紅水溶液，碘液，95%乙醇， 儀器： 載玻片，接種環(huán)，酒精燈，打火機(jī)，吸水紙，顯微鏡，香柏油，擦鏡紙，廢水缸4操作步驟：1）涂片：取滅過菌的載玻片于實(shí)驗(yàn)臺(tái)上，把沙門氏菌和金黃色葡萄球菌分別涂在兩個(gè)載玻片的中央，用燒紅冷卻后的接種環(huán)將液滴涂布成一均勻的薄層，涂布面不宜過大52）干燥：將標(biāo)本面向上，手持載玻片一端的兩側(cè)，小心地在酒精燈上高處微微加熱，使水分蒸發(fā)，但切勿緊靠火焰或加熱時(shí)間過長(zhǎng)，以防標(biāo)本烤枯而變形63） 固定：固定常常利用高溫，手持載玻片的一端，標(biāo)本向上，在酒精燈火焰處盡快的來回通過2-3次，共約2-3秒種，并不時(shí)以載玻片背面加熱觸及皮膚，不

3、覺過燙為宜（不超過60），放置待冷后，進(jìn)行染色。74） 初染：在涂片薄膜上滴加草酸銨結(jié)晶紫1-2滴，使染色液覆蓋涂片，流水沖洗媒染：將碘液滴在涂片薄膜上，使染色液覆蓋涂片，流水沖洗吸 脫色：斜置載玻片，滴加95%乙醇脫色，至流出的乙醇不現(xiàn)紫色為止，大約需時(shí)20-30S，隨即水洗8 復(fù)染：在涂片薄膜上滴加沙黃染液1-2滴，使染色液覆蓋涂片，染色約1min。 水洗：斜置載玻片，在自來水龍頭下用小股水流沖洗，直至洗下的水呈無色為止9 5）干燥、觀察：用吸水紙吸掉水滴，待標(biāo)本片干后置顯微鏡下，用低倍鏡觀察，發(fā)現(xiàn)目的物后滴一滴浸油在玻片上，用油鏡觀察沙門氏菌和金黃色葡萄球的形態(tài)及顏色。10結(jié)果：金黃色葡萄球菌被染成紫色為革蘭陽性菌，沙門氏菌被染成紅色為革蘭陰性菌11注意事項(xiàng)：1選用活躍生長(zhǎng)期菌種染色，老齡的革蘭氏陽性細(xì)菌會(huì)被染成紅色而造成假陰性。2.涂片不宜過厚，