藥物分析維生素類藥物的分析[1]

1、藥物分析維生素類藥物的分析1 第九章 維生素類藥物的分析 (Analysis of Vitamin)1.前言(Preface) 維生素是人們生活中必需的營養(yǎng)要素，是一些具有調(diào)節(jié)和管制新陳代謝過程的生物活性物質(zhì)。中國藥典2005年版收載了維生素A、B1、B6、B12、C、D2、D3、E、K1、葉酸、煙酸、煙酰胺。ABCDEKF 水溶性 脂溶性藥物分析維生素類藥物的分析1 公元前一千年我國周漢時代古書記載瘺厥、緩風(fēng)、濕癢、腫等腳氣病的綜合癥狀，到晉代取名為腳氣。1911年從米糠中分離出抗腳氣病因子，將此成分命名為維生素(Vitamin)。此后，分離出各種營養(yǎng)因子，統(tǒng)稱為維生素，發(fā)展至今，已有60多

2、種。干眼癥、夜盲癥缺Vitamin A佝僂病、軟骨化癥缺Vitamin D藥物分析維生素類藥物的分析1Vitamin E 有還原性，可作抗氧劑 存在于豆類、 蔬菜、麥胚油中與生育有關(guān)，防治習(xí)慣性流產(chǎn)、不育癥、牙周炎等；也用于心血管疾患、脂肪肝，新生兒硬腫癥的輔助治療。Vitamin K存在于綠色植物中凝血作用，新生兒出血癥的防治藥物分析維生素類藥物的分析1Vitamin B1治療腳氣病、多發(fā)性神經(jīng)炎和胃腸道疾病 存在于米糠、麥麩和酵母中Vitamin C化學(xué)合成物參與機體代謝，可幫助酶將膽固醇轉(zhuǎn)化為膽酸而排泄，減低毛細管的脆性，增加機體的抵抗力。防治壞血病，預(yù)防冠心病，大量靜脈注射用于克山病的

3、治療藥物分析維生素類藥物的分析12. Vitamin A (魚肝油中)(3)(4)(2)(1) UV吸收(325328nm)易氧化變質(zhì)與SbCl3呈藍色不溶于水，溶于CHCl3、乙醚、環(huán)己烷藥物分析維生素類藥物的分析1 鑒別？Identification(1)SbCl3反應(yīng)即Carr-price反應(yīng)加飽和無水SbCl3無醇CHCl3溶液 藍色紫紅色TLC法(2)(3)UV法取Vit A 加無水乙醇鹽酸(100:1)溶液溶解，立即在300400nm波長范圍內(nèi)紫外掃描，應(yīng)僅在326nm出有單一吸收峰。水浴加熱30秒，迅速冷卻，同法掃描，則應(yīng)在348，367和389nm波長處有三個尖銳的吸收峰，且在

4、波長332nm處有較低的吸收峰或拐點。 (nm)A(1%,1cm)12 389 367 348 326藥物分析維生素類藥物的分析1含量？AssayGC法HPLC法熒光法Vit A的無水乙醇溶液能產(chǎn)生綠色熒光?？蓽y定血液或動物組織中Vit A含量SbCl3比色法加SbCl3無水CHCl3溶液，在618620nm波長處有最大吸收，符合Beer定律。(5)(4)(3)(2)(1)UV法(三點校正法)三點校正法測Vit A1. 原理： (1)雜質(zhì)吸收在310340nm內(nèi)呈直線，且隨波長的增大吸收度變?。?(2)物質(zhì)對光的吸收有加和性。2.怎樣選擇三點波長： (1)第1點：選擇Vit A的最大吸收波長(

5、1) ; (2)第2點和第3點：在最大吸收波長的兩側(cè)各選一點(2和3); a.等波長差法：在1的左右各選一點2 和3 ，使3 1 1 2藥物分析維生素類藥物的分析1如ChP測Vit A醋酸酯時，規(guī)定1=328nm, 2=316nm, 3=340nmb.等吸光度法：在1的左右各選一點2 和3 ，使A2=A3=6/7A1如ChP測Vit A醇時，規(guī)定1=325nm, 2=310nm, 3=334nm3. 雜質(zhì)的吸收(1)Vit A2(3去氫維生素A)和Vit A3(去水維生素A) Vit A2在345350nm波長范圍內(nèi)有吸收；(2)Vit A的氧化產(chǎn)物：環(huán)氧化物、VA醛和酸；(3)光照下產(chǎn)生的無

6、生物活性的聚合物鯨醇；(4)Vit A的異構(gòu)體；(5)合成時產(chǎn)生的中間體。 4.測定方法(1)第一法(適用于VA醋酸酯)VA醋酸酯 環(huán)己烷在300,316,328,340,360nm波長處測A值(max=328nm),計算各波長下的吸收度與328nm波長下的吸收度之比值。藥物分析維生素類藥物的分析1(max326329nm)差值0.02，直接在328nm處測A328 差值0.02，A328(校正)3.52(2A328-A316-A340)-15%-3%+3%0 皂化法 皂化法A328(校正)A328直接算算效價(IU/g)：藥物分析維生素類藥物的分析1算VA醋酸酯膠丸占標(biāo)示量的百分含量：占標(biāo)示

7、量的百分含量%膠丸的平均內(nèi)容物重量W 內(nèi)容物重量D 稀釋倍數(shù)L 比色池厚度(cm)(2)第二法(適用于VA醇) 皂化法 Vit A 醇KOH乙醇溶液回流乙醚提取干燥異丙醇溶解在300,310,325,334nm處測A值確定max藥物分析維生素類藥物的分析1求算如max 323327nm 而且A300/A3250.73 按下列方法處理0-3%+3%A校A校A325占標(biāo)示量的百分含量%A325(校正)=6.815A325-2.555A310-4.260A334求效價:藥物分析維生素類藥物的分析13. Vitamin E (藥典收載： -生育酚醋酸酯) (3)(2)(1)易水解成游離生育酚H+或OH

8、-Ce(SO4)2滴定檢 查游離生育酚UV吸收max 284溶于乙醇、丙酮、醋酸乙酯、石油醚中，不溶于水藥物分析維生素類藥物的分析1Vit E 鑒別Identification(1)(4)(3)(2) 硝酸反應(yīng)(無水乙醇硝酸，750C顯橙紅色)UV法(284)TLC法水解后氧化反應(yīng) 加KOH醇試液，加熱，加水、乙醚，取乙醚液再加2,2-聯(lián)吡啶的乙醇溶液和FeCl3的乙醇液，應(yīng)顯血紅色。藥物分析維生素類藥物的分析1 Vit E 含量=? Assay(1)(6)(5)(4)(3)(2)GC法 HPLC法 UV法95%乙醇溶解，max292nm熒光法羥肟酸鐵比色法鹽酸羥胺+FeCl3生成羥肟酸鐵絡(luò)合

9、物，于480及510nm處有最大吸收，測A值。鈰量法 用硫酸加熱回流，水解成生育酚，用Ce(SO4)2定量地氧化為對生育醌，過量的Ce(SO4)2氧化二苯胺指示劑而指示終點。藥物分析維生素類藥物的分析14. Vitamin B1(硫胺Thiamine)(1)(4)(3)(2)溶于水不溶于乙醚 UV吸收(mmax246nm)沉淀反應(yīng)碘化汞鉀或硅鎢酸等反應(yīng)生成堿性中遇氧化劑(鐵氰化鉀)產(chǎn)生有熒光的硫色素 鑒別試驗TLC藥物分析維生素類藥物的分析1Vit B1 含量?Assay 非水堿量法冰HAc和Hg(Ac)2HClO4滴定硅鎢酸重量法(H+)硫色素?zé)晒夥?VB1專屬反應(yīng))OHK3Fe(CN)6硫

10、色素異丁醇提取365nm照射藍色熒光比較熒光強度含量 UV法(max 246nm)酸性染料比色法 鹽酸硫胺與酸性染料(溴麝香草酚藍)形成鹽，在420nm處測A值。HPLC法流動注射法(FIA)離子選擇性電極法制劑中VB1用鉛離 子電極直接測定示波極譜滴定法123689547藥物分析維生素類藥物的分析15. Vitamin C (抗壞血酸Ascorbic acid)(4)(3)(2)(1)旋光性溶于水，酸性強還原性 UV吸收 max245nm藥物分析維生素類藥物的分析1Vit C 鑒別15432 UV法 溶于鹽酸中 (max 243nm)AgNO3反應(yīng)黑色沉淀 (Ag )2,6-二氯靛酚反應(yīng)(顏色消失)與別的氧化劑反應(yīng)使KMnO4、亞甲藍等褪色糖類性質(zhì)反應(yīng)加HCl水解、脫羧、失水后變?yōu)榭啡偌舆量?00C加熱變藍色藥物分析維生素類藥物的分析1VC含量=? 碘量法(直