蛋公雞人工感染艾美耳球蟲病模型的建立(共6頁(yè))

1、蛋公雞人工感染(gnrn)艾美耳球蟲病模型的建立 王麗榮，陳雷(chn li)，秦波，林顯華，谷?。ㄉ綎|寶來利來生物工程股份(gfn)有限公司，山東泰安，271000）摘要：為建立人工模擬自然感染途徑誘發(fā)蛋公雞艾美耳球蟲病病理模型，本試驗(yàn)對(duì)14日齡蛋公雞人工接種不同量的柔嫩艾美耳球蟲卵囊，使其感染發(fā)病。攻毒后每日觀察雞只精神、食欲、糞便變化及死亡情況，并對(duì)死亡雞隨時(shí)進(jìn)行剖檢記錄，觀察病變，進(jìn)行糞便記分、病變計(jì)分，并計(jì)算病變值、克糞便卵囊數(shù)和卵囊值。結(jié)果表明：攻蟲量為3104個(gè)/只時(shí)，雞只感染球蟲病最明顯，主要病理變化為排稀糞帶血絲或血塊，或排血樣稀糞。臨床癥狀與卵囊值均與自然感染基本一致，可以

2、用作蛋公雞艾美耳球蟲病病理模型。關(guān)鍵詞：柔嫩艾美耳球蟲；人工發(fā)病；感染模型；病理變化；攻毒途徑前言雞艾美耳球蟲病是由孢子蟲綱(Sporzoa)真球蟲目(Eucoccida)艾美耳科(Eimeriidae)艾美耳屬(Eimeria)的原蟲在雞腸道上皮細(xì)胞內(nèi)寄生而引起的一種原蟲病。柔嫩艾美耳球蟲寄生于盲腸，其卵囊大小為 2219，裂殖體很大，直徑可達(dá)54，第一代裂殖體包含的裂殖子可達(dá)900個(gè)，第二代為350個(gè)，孢子化時(shí)間為18，潛隱期為138。雛雞感染球蟲后，大量腸上皮細(xì)胞受損出血，甚至死亡。雞球蟲病現(xiàn)已成為現(xiàn)代養(yǎng)雞業(yè)中最常見的疾病之一1，此病主要危害3月齡內(nèi)的雛雞，以1550日齡的雛雞發(fā)病率最高

3、，死亡率可達(dá)80%以上。隨著規(guī)?；⒓s化養(yǎng)雞業(yè)的高速發(fā)展，雞球蟲病對(duì)養(yǎng)雞業(yè)的危害越來越嚴(yán)重，據(jù)資料顯示，美國(guó)一年的損失可達(dá)45億美元2，我國(guó)每年因該病的損失也高達(dá)618億元3。雞球蟲病對(duì)養(yǎng)雞業(yè)危害十分嚴(yán)重，在過去幾十年中，各國(guó)對(duì)雞球蟲病的研究不斷深入，目前，對(duì)雞球蟲病的防治主要采用藥物防治和疫苗預(yù)防兩種方法。由于疫苗防治還不夠成熟，存在某些安全隱患及成本過高，所以藥物預(yù)防仍為主要的預(yù)防手段，隨著抗藥性的產(chǎn)生，長(zhǎng)期高劑量用藥現(xiàn)象嚴(yán)重，導(dǎo)致大量耐藥蟲株的出現(xiàn)4-5，而研制新藥費(fèi)用不斷提高，以及藥物殘留等問題的存在，驅(qū)使人們探尋更經(jīng)濟(jì)可靠的途徑來防治雞球蟲病6。本研究旨在建立蛋公雞人工感染艾美耳球

4、蟲病的模型，并對(duì)其病理變化進(jìn)行觀察，為雞球蟲病的藥物防治研究提供理論依據(jù)，對(duì)我國(guó)養(yǎng)雞業(yè)的健康可持續(xù)發(fā)展具有十分重要的意義。1 材料(cilio)與方法收稿日期(rq)作者簡(jiǎn)介王麗榮(1985-），女，漢，碩士(shush)研究生，山東萊陽(yáng)人，主要研究方向：禽病學(xué)、中藥發(fā)酵。1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及飼料選用1日齡海蘭褐健康蛋公雞雛雞300只，購(gòu)于本市某種雞場(chǎng)。飼料按雛雞飼料配方配制，不含任何飼料添加劑及抗球蟲藥物。基礎(chǔ)日糧組成見表1。表1 510基礎(chǔ)日糧配方及營(yíng)養(yǎng)水平日糧組成 百分比（）營(yíng)養(yǎng)水平百分比（）玉米56.6代謝能 ME（MJ.kg-1）12.06豆粕36.0粗蛋白(%)21.6豆油3.0鈣

5、(%)0.98磷酸氫鈣1.8總磷 (%)0.68石粉1.3有效磷 (%)0.49食鹽0.3蛋氨酸 (%)0.47預(yù)混料1.0蛋胱氨酸 (%)0.78合計(jì)100賴氨酸(%)1.151.2 毒株 柔嫩艾美爾球蟲純種卵囊，由山東農(nóng)業(yè)大學(xué)預(yù)防獸醫(yī)教研室惠贈(zèng)，并由山東寶來利來生物股份有限公司生物研究院保存，經(jīng)29恒溫孵育培養(yǎng)48h，當(dāng)有90%以上的卵囊完成孢子化時(shí)停止培養(yǎng)。1.3 實(shí)驗(yàn)方法1.3.1 試驗(yàn)分組雞只所用飼料、飲水器、料盤等均在80干燥箱中烘烤0.5h以上，以確保外界環(huán)境無球蟲。在感染前對(duì)雛雞進(jìn)行檢查及分組，并進(jìn)行糞便檢查挑選個(gè)體大小基本一致且無球蟲感染的8日齡雛雞，將雛雞分成5組，分別為A

6、組，B組，C組，D組和E組（陰性對(duì)照組）。每組為20只，分別設(shè)立三個(gè)平行組。A組，B組，C組，D組分別接種0.5104個(gè)/只，1104個(gè)/只，3104個(gè)/只，5104個(gè)/只球蟲卵囊，E組為對(duì)照組。感染方法為口服接種孢子化卵囊，感染后第8d剖殺全部雛雞，取盲腸分離柔嫩艾美耳球蟲蟲卵。實(shí)驗(yàn)分組及球蟲卵囊的接種量見表2。表2 510 實(shí)驗(yàn)(shyn)分組及球蟲卵囊的接種量分組及只數(shù)處理方法接種量（個(gè)/只）A20口服孢子化卵囊0.5104B20口服孢子化卵囊1104C20口服孢子化卵囊3104D20口服孢子化卵囊5104E20口服蒸餾水01.3.2 接種(jizhng)后排卵囊情況與病理觀察感染卵囊后

7、逐日觀察(gunch)并記錄各組雞的精神、食欲、糞便變化和死亡情況，并對(duì)死亡雞隨時(shí)進(jìn)行剖檢及實(shí)驗(yàn)室檢查。試驗(yàn)結(jié)束稱重后，各組雞全部撲殺，觀察內(nèi)臟病變，摘取盲腸，刮取糞便檢查球蟲卵囊數(shù)，沖洗盲腸，檢查病變情況，記錄病變和病變值。1.3.3 判定標(biāo)準(zhǔn)臨床癥狀：凡表現(xiàn)精神萎靡，羽毛蓬亂，雙目閉合，食欲不佳，嗉囊有積食，排稀糞帶血絲或血塊，甚或排血樣稀糞則初步判定為球蟲病雞。尸體剖檢及實(shí)驗(yàn)室檢查：凡見腸道外觀呈棕紅色或暗紅色，腸管腫脹，腸壁增厚且呈炎癥表現(xiàn)，內(nèi)容物稀軟混有血液或血凝塊或干酪樣夾雜血液的壞死物質(zhì)，經(jīng)取腸內(nèi)容物抹片鏡檢，發(fā)現(xiàn)球蟲卵囊值達(dá)到20，則判定為雞球蟲病1。研究報(bào)道，人工感染球蟲卵囊

8、后雞只死亡率達(dá)到10%-20%，所建立的球蟲病模型較理想，適合用于科研研究。1.3.4 數(shù)據(jù)處理 糞便記分：0分，正常；1分，有少量血便；2分，中等量血便；3分，有許多血便；4分，無正常糞便。病變記分和病變值：0分，腸道中無眼觀異常；1分，腸道充血或增厚；2分，腸道增厚，有少量出血和滲出；3分，腸道彌漫性出血；4分，腸道嚴(yán)重出血或有腸芯。病變值=每組雞腸道平均(pngjn)病變記分10克糞便卵囊數(shù)(O.P.G)：每組雞的糞便，充分?jǐn)噭蚝蠓Q取1 g加水10 mL，充分混勻后用血球(xuqi)計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)，參照角田清方法計(jì)算卵囊數(shù)。卵囊值：當(dāng)卵囊比數(shù)(b sh)為0%1%時(shí)，卵囊值為0；2%25%時(shí)

9、為5；26%50%時(shí)為10；51%75%時(shí)為20；76%100%時(shí)為40。2 結(jié)果與分析2.1 臨床癥狀感染球蟲孢子化卵囊后第5 d，A、B、C、D組均不同程度出現(xiàn)血便，雞只表現(xiàn)為精神萎靡、食欲減退、羽毛松亂、翅膀下垂，縮頸閉眼等癥狀，而E組糞便正常，無血便，雞只采食正常，精神狀態(tài)良好。第6 d、7d，除E組糞便正常外，各組都出現(xiàn)血便。說明A、B、C、D組均感染了艾美耳球蟲病。 血便計(jì)分血便計(jì)分是一個(gè)評(píng)判球蟲病發(fā)生及發(fā)病程度的指標(biāo)，由表3可知，陰性對(duì)照組E組，血便值為0，而A、B組血便值較低，D組較高，只有C組血便值居中。表3 血便值組別5 d6 d7 d平均血便計(jì)分A0100.333B011

10、0.666C1211.333D2322.333E0000注：表中數(shù)字表示每d每羽血便計(jì)分2.3 相對(duì)增重率、死亡率、病變值和卵囊值 由表4可以看出，C組的死亡率在10%-20%之間，且相對(duì)增重率、病變值、卵囊值均介于A、B、D組之間，陰性對(duì)照組E組為正常。說明，C組更適合作為球蟲模型。表4 評(píng)定(pngdng)結(jié)果組別相對(duì)增重率%死亡率%病變值卵囊值A(chǔ)90.1095B85.43.332510C79.511.61720D56.223.332340E100.00003 討論(toln)雞球蟲病是養(yǎng)禽業(yè)中重要的常見的一種疾病，它對(duì)養(yǎng)雞生產(chǎn)的危害(wihi)十分嚴(yán)重，在生產(chǎn)實(shí)踐中，球蟲病流行的雞群生長(zhǎng)

11、嚴(yán)重滯后，它不僅引起雛雞的大批死亡（盲腸球蟲死亡率超過80%），而且明顯降低雞只生產(chǎn)性能（如雞肉品質(zhì)、死淘率、增重率、飼料報(bào)酬等），造成重大經(jīng)濟(jì)損失，嚴(yán)重危害養(yǎng)禽業(yè)發(fā)展。雞球蟲寄生于腸道上皮細(xì)胞，在腸道內(nèi)繁殖，破壞腸粘膜的完整性，引發(fā)粘膜上皮細(xì)胞崩解，使腸道內(nèi)離子和滲透壓失去平衡，營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)不能吸收，且大量出血，由于腸道黏膜遭到破壞，造成黏膜免疫抑制，成為免疫失敗的一大因素，而且隨之誘發(fā)其他疾病，如大腸桿菌病、支原體病等，成雞多為帶蟲者，臨床癥狀往往不明顯，但是增重和產(chǎn)蛋會(huì)受到一定影響。臨床上發(fā)病雞表現(xiàn)為精神沉郁、下痢、貧血等癥狀，甚至死亡7。自上世紀(jì)40年代磺胺類藥物用于養(yǎng)雞生產(chǎn)以來，已先后有

12、30多種藥物投入臨床應(yīng)用，給現(xiàn)代養(yǎng)雞業(yè)帶來空前的發(fā)展，然而，隨著藥物的廣范應(yīng)用，球蟲抗藥性問題日趨普遍和嚴(yán)重。多藥抗性或交叉抗藥性的產(chǎn)生大大縮短了藥物的商業(yè)使用年限。雞球蟲病的藥物防治及免疫將是未來防治該病的發(fā)展趨勢(shì)，各國(guó)學(xué)者開始把研究重點(diǎn)轉(zhuǎn)向中草藥8、復(fù)方中草藥9、中西藥結(jié)合10及疫苗等方向，而雞球蟲病模型的建立則為研究雞球蟲病提供有利基礎(chǔ)。 本研究通過對(duì)蛋公雞人工感染艾美耳球蟲致使發(fā)病，并對(duì)其死亡率等指標(biāo)進(jìn)行對(duì)比試驗(yàn)，從而得到適合用來臨床試驗(yàn)用的蛋公雞人工感染艾美耳球蟲病的體內(nèi)模型，為雞球蟲病的進(jìn)一步研究提供了便利，對(duì)我國(guó)養(yǎng)雞業(yè)的健康可持續(xù)發(fā)展具有十分重要的意義。參考文獻(xiàn)1 索勛,李國(guó)清.

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