JIANYANJISHU教學(xué)文案

1、Good is good, but better carries it.精益求精，善益求善。JIANYANJISHU-免疫學(xué)檢測即是根據(jù)抗原、抗體反應(yīng)的原理，利用已知的抗原檢測未知的抗體或利用已知的抗體檢測未知的抗原。由于外源性和內(nèi)源性抗原均可通過不同的抗原遞呈途徑誘導(dǎo)生物機(jī)體的免疫應(yīng)答，在生物體內(nèi)產(chǎn)生特異性和非特異性T細(xì)胞的克隆擴(kuò)增，并分泌特異性的免疫球蛋白（抗體）。由于抗體抗原的結(jié)合具有特異性和專一性的特點，這種檢測可以定性、定位和定量地檢測某一特異的蛋白（抗原或抗體）。免疫學(xué)檢測技術(shù)的用途非常廣泛，它們可用于各種疾病的診斷、療效評價及發(fā)病機(jī)制的研究。最初的免疫檢測方法是將抗原或抗體的一方

2、或雙方在某種介質(zhì)中進(jìn)行擴(kuò)散，通過觀察抗原抗體相遇時產(chǎn)生的沉淀反應(yīng)，檢測抗原或抗體，最終達(dá)到診斷的目的。這種擴(kuò)散可以是蛋白的自然擴(kuò)散，例如環(huán)狀沉淀試驗、單向免疫擴(kuò)散試驗、雙向免疫擴(kuò)散實驗。單向免疫擴(kuò)散試驗就是在凝膠中混入抗體，制成含有抗體的凝膠板，而將抗原加入凝膠板預(yù)先打好的小孔內(nèi)，讓抗原從小孔向四周的凝膠自然擴(kuò)散，當(dāng)一定濃度的抗原和凝膠中的抗體相遇時便能形成免疫復(fù)合物，出現(xiàn)以小孔為中心的圓形沉淀圈，沉淀圈的直徑與加入的抗原濃度成正比。利用蛋白在不同酸堿度下帶不同電荷的特性，可以利用人為的電場將抗原、抗體擴(kuò)散，例如免疫電泳試驗和雙向免疫電泳。免疫電泳首先將抗原加入凝膠中電泳，將抗原各成分依次分散

3、開。然后沿電泳方向平行挖一直線形槽，于槽內(nèi)加入含有針對各種抗原的混合抗體，讓各抗原成分與相應(yīng)抗體進(jìn)行自然擴(kuò)散，形成沉淀線。然后利用標(biāo)準(zhǔn)的抗原抗體沉淀線進(jìn)行抗原蛋白（或抗體）的鑒別。上述的方法都是利用肉眼觀察抗原抗體反應(yīng)產(chǎn)生的沉淀，因此靈敏度有很大的局限。比濁法引入沉淀檢測產(chǎn)生的免疫比濁法就是利用濁度計測量液體中抗原抗體反應(yīng)產(chǎn)生的濁度，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線來計算抗原（或抗體）的含量。該方法不但大大提高了檢測的靈敏度，且可對抗原、抗體進(jìn)行定量的檢測。免疫印跡法則首先通過電泳分離標(biāo)準(zhǔn)的已知抗原，然后將電泳分離的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到硝酸纖維膜上，浸于待測血清中。如果血清中含有與一種或幾種抗原相對應(yīng)的抗體的話，則在該抗

4、原印跡部位形成免疫復(fù)合物沉淀。在洗去未結(jié)合的抗原和抗體后，在膜上加標(biāo)記的抗人免疫球蛋白的抗體，此抗體可以和病毒抗原與人抗體形成的免疫復(fù)合物發(fā)生反應(yīng)，最后加入顯色底物（可以是普通顯色劑，化學(xué)發(fā)光劑或放射性同位素等）進(jìn)行顯色。由于利用了第二種抗體進(jìn)行了信號放大，并且可以利用高靈敏的顯色方式，靈敏度也得到了很大的提高。目前該方法已經(jīng)利用凝集反應(yīng)檢測抗原抗體反應(yīng)也是較傳統(tǒng)的手段之一。利用帶有抗原的乳膠顆粒等不溶性的顆?？乖c相應(yīng)抗體結(jié)合形成凝集團(tuán)塊，通過凝集現(xiàn)象，就可以達(dá)到檢測的目的。無論是直接凝集法還是間接凝集法都可對抗原或抗體進(jìn)行檢測。還可以利用二抗對信號進(jìn)行放大，從而提高檢測的靈敏度。利用補(bǔ)體介

5、導(dǎo)的反應(yīng)（例如溶血反應(yīng)），檢測抗原抗體反應(yīng)也是過去常用的方法?？贵w與細(xì)胞表面抗原相遇，形成紅細(xì)胞-抗體復(fù)合物即可使加入反應(yīng)中的補(bǔ)體活化，導(dǎo)致細(xì)胞的溶解，此方法可用于紅細(xì)胞的各種抗原或相應(yīng)抗體的檢測，此外利用補(bǔ)體反應(yīng)的競爭效應(yīng)，也可對抗原抗體反應(yīng)進(jìn)行定量的檢測利用帶有標(biāo)記（熒光素、同位素、膠體金或酶）的抗體（抗原）檢測抗原抗體反應(yīng)是目前應(yīng)用最廣泛、最靈敏的方法，使用放射性同位素標(biāo)記法可使檢測的靈敏度達(dá)到pg級。由于帶標(biāo)記的抗體能準(zhǔn)確而可靠地反映出抗原的位置和數(shù)量，且利用二抗可對信號進(jìn)行放大，因此該方法可用于抗原定性、定量或定位檢測。以下是幾種常用的免疫學(xué)技術(shù)：1免疫熒光技術(shù)免疫熒光技術(shù)是利用熒光

6、素標(biāo)記的抗體（或抗原）檢測組織、細(xì)胞或血清中的相應(yīng)抗原（或抗體）的方法。由于熒光抗體具有安全、靈敏的特點，因此已廣泛應(yīng)用在免疫熒光檢測和流式細(xì)胞計數(shù)領(lǐng)域。根據(jù)熒光素標(biāo)記的方式不同，可分為直標(biāo)熒光抗體和間標(biāo)熒光抗體。間標(biāo)熒光抗體中一抗并不直接連接熒光素，而是先將一抗結(jié)合到蛋白，然后帶有熒光素的二抗再結(jié)合至一抗。通過二抗的結(jié)合，能將信號進(jìn)行放大，因此能在一定程度上提高檢測的靈敏度，但是隨之帶來的高背景也降低了檢測的特異性。近年來，隨著熒光素和熒光檢測技術(shù)的不斷進(jìn)步，熒光檢測的靈敏度已經(jīng)接近同位素檢測的水平，直接標(biāo)記的熒光抗體逐漸取代間接標(biāo)記抗體。這些標(biāo)記了熒光素的抗體直接結(jié)合至抗原，大大提高了檢測

7、的特異性，使檢測的結(jié)果更加準(zhǔn)確可靠。熒光檢測技術(shù)的發(fā)展，使得免疫熒光技術(shù)在傳染病診斷上有廣泛的用途，如在細(xì)菌、病毒、螺旋體感染的疾病，檢查IgM抗體，做為近期接觸抗原的標(biāo)志。利用單克隆熒光直接標(biāo)記抗體鑒定淋巴細(xì)胞的亞類。通過流式細(xì)胞儀，針對細(xì)胞表面不同抗原，可以同時使用多種不同的熒光抗體，對同一細(xì)胞進(jìn)行多標(biāo)記染色。2放射免疫檢測放射免疫檢測技術(shù)是目前靈敏度最高的檢測技術(shù)，利用放射性同素標(biāo)記抗原（或抗體），與相應(yīng)抗體（或抗原）結(jié)合后，通過測定抗原抗體結(jié)合物的放射性檢測結(jié)果。放射性同位素具有pg級的靈敏度，且利用反復(fù)曝光的方法可對痕量物質(zhì)進(jìn)行定量檢測。但放射性同位素對人體的損傷也限制了該方法的使用

8、。3酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）酶聯(lián)免疫檢測是目前應(yīng)用最廣泛的免疫檢測方法。該方法是將二抗標(biāo)記上酶，抗原抗體反應(yīng)的特異性與酶催化底物的作用結(jié)合起來，根據(jù)酶作用底物后的顯色顏色變化來判斷試驗結(jié)果，其敏感度可達(dá)ng水平。常見用于標(biāo)記的酶有辣根過氧化物酶(HRP)、堿性磷酸酶（AP）等。由于酶聯(lián)免疫法無需特殊的儀器，檢測簡單，因此被廣泛應(yīng)用于疾病檢測。常用的方法有間接法、夾心法以及BASELISA。間接法是先將待測的蛋白抱被在孔板內(nèi)，然后依次加入一抗、標(biāo)記了酶的二抗和底物顯色，通過儀器（例如酶標(biāo)儀）定量檢測抗原。這種方法操作簡單但由于高背景而特異性較差。目前已逐漸被夾心法取代。夾心法利用二種一抗對

9、目標(biāo)抗原進(jìn)行捕獲和固定，在確保靈敏度的同時大大提高了反應(yīng)的特異性。近年來，抗原的定量檢測技術(shù)也不斷推陳出新。近年來，在夾心法ELISA的基礎(chǔ)上，開發(fā)了多抗原檢測試劑盒，能同時檢測微量液相樣本中多個抗原含量。這項技術(shù)的應(yīng)用大大縮短了診斷的時間，提高診斷的可靠性和及時性。4免疫金膠體技術(shù)膠體金技術(shù)經(jīng)過30多年的發(fā)展到現(xiàn)在已日趨成熟，該方法是將二抗標(biāo)記上膠體金顆粒，利用抗原抗體間的特異性反應(yīng)，最終將膠體金標(biāo)記的二抗吸附于滲濾膜上，此方法簡單，快速，廣泛應(yīng)用于臨床篩查。第一章項目的評估指標(biāo)：金標(biāo)準(zhǔn)敏感性特異性預(yù)測值（陽性預(yù)測值陰性預(yù)測值）準(zhǔn)確度受試者工作曲線方法學(xué)的評估指標(biāo)：精密度準(zhǔn)確度分析敏感度分析

10、范圍分析干擾受試者工作曲線和醫(yī)學(xué)決定價值常規(guī)工作中的質(zhì)量監(jiān)控指標(biāo)：室內(nèi)質(zhì)控指標(biāo)時間指控注意臨床反饋意見第二章沉降系數(shù)：顆粒在單位力場中粒子的移動速度沉降速度：在強(qiáng)大離心力作用下，單位時間內(nèi)物質(zhì)運動的距離普通低速離心機(jī)使用的注意事項1離心機(jī)移動后，最好4小時后再使用。莊子長期不使用，應(yīng)取出。使用時在旋轉(zhuǎn)軸上涂抹潤滑油。2使用離心機(jī)應(yīng)使用天平確定平衡離心管，離心管放入轉(zhuǎn)子時應(yīng)注意位置平衡對稱，否則會損壞離心機(jī)。機(jī)器運行前檢查轉(zhuǎn)子蓋，機(jī)器蓋是否蓋好.3使用離心機(jī)時不可超過離心機(jī)或轉(zhuǎn)子的最高轉(zhuǎn)速。4離心機(jī)使用完畢，應(yīng)將離心機(jī)轉(zhuǎn)頭室及轉(zhuǎn)子清理干凈歸位，以維持離心機(jī)及轉(zhuǎn)子壽命及平衡。轉(zhuǎn)自嚴(yán)禁帶離本室。第三

11、章常用顯微鏡的種類：普通光學(xué)顯微鏡相差顯微鏡熒光顯微鏡倒置顯微鏡共聚焦顯微鏡電子顯微鏡普通光學(xué)顯微鏡的應(yīng)用1打開光源開關(guān)2調(diào)節(jié)目鏡的孔距3放置樣本玻片4首先用低倍鏡調(diào)焦及觀察5調(diào)節(jié)屈光度6視場光柵調(diào)焦和跳中7孔徑光柵大小8用畢的整理工作第五章電化學(xué)分析技術(shù)是利用被測離子濃度與電極電位之間的關(guān)系。對在零電流條件下電池的電動勢進(jìn)行測量，利用能斯特方程求的待測組分的活度或濃度。第六章電泳條件及其對電泳前遷移率的影響因素：電場強(qiáng)度溶液的PH溶液的離子濃度電滲焦耳熱區(qū)帶電泳(zoneelectrophoresis)：是指有支持介質(zhì)的電泳，待分離物質(zhì)在支持介質(zhì)上分離成若干區(qū)帶。血清肌酸激酶同工酶原理時根據(jù)

12、ISO-CK分子結(jié)構(gòu)的不同，在電泳緩沖液中所帶電荷各異，可以從陰極到陽極將CK不同組分予以分離，其分別為CK-MMCK-MB和CK-BB。CK和CK-BB是用于證實急性心肌梗死的首選指標(biāo)。等電聚焦電泳是一種利用具有PH梯度的電泳介質(zhì)來分離等電點不同的蛋白質(zhì)的技術(shù)。免疫印記法的基本原理：第一階段為SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳：蛋白樣品經(jīng)SDS處理后帶負(fù)電荷，在聚丙烯酰胺凝膠中從陰極向陽極泳動，相對分子質(zhì)量越小，泳動速度越快。第二階段為電轉(zhuǎn)移：將在凝膠中已經(jīng)分離的條帶轉(zhuǎn)移至硝酸纖維素膜上，選用低電壓100V和大電流12A，通電45MIN轉(zhuǎn)移即可完成。第三階段為酶免疫定位：將印有帶白紙條帶的硝酸纖維素

13、膜依次與特異性抗體結(jié)合和酶標(biāo)第二抗體作用后，加入能形成不溶性顯色物的酶反應(yīng)底物，使區(qū)帶染色。免疫印跡法在檢驗醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用1在自身抗體檢測中的應(yīng)用包括抗核抗體抗雙鏈DNA抗體可提取核抗原抗中性粒細(xì)胞之抗體抗磷脂抗體抗平滑肌抗體2在病原微生物中的應(yīng)用病原微生物提取抗原經(jīng)電泳轉(zhuǎn)移在硝酸纖維素膜上后，將膜切成蕭條，配合酶標(biāo)抗體及顯色底物制成的試劑盒，可方便在實驗室中供檢測用，根據(jù)出現(xiàn)顯色線條的位置可判斷有無特異性抗原/抗體。免疫電泳的原理：利用區(qū)帶電泳技術(shù)將不同電荷和相對分子質(zhì)量的蛋白質(zhì)抗原在瓊脂分離開后，在與電泳方向平行的兩側(cè)開槽并加入抗血清。置于室溫或37C使兩者進(jìn)行免疫擴(kuò)散，個區(qū)帶蛋白在相應(yīng)位置

14、上與抗體反應(yīng)形成弧形沉淀線。抗原含量越多，則反應(yīng)沉淀線越接近抗體槽，形成較粗的沉淀弧線；反之，則形成的沉淀線較細(xì)。以此可作細(xì)微的蛋白質(zhì)組分分析。在檢驗醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用；1異常體液蛋白的識別根據(jù)各蛋白所處的電泳位置，可分為不同的區(qū)帶2血清脂蛋白電泳血清鏡瓊脂糖凝膠電泳，再經(jīng)染色后可出現(xiàn)不同脂蛋白的條帶。第八章血氣分析技術(shù)血氣分析：是評價機(jī)體呼吸、氧化功能及血液酸堿平衡狀態(tài)的必要指標(biāo)。血氣分析技術(shù)：是利用血氣分析儀直接測定血標(biāo)本中PH、Pa（O2）三項基本數(shù)據(jù)后，并按有關(guān)公式計算出其他參數(shù)指標(biāo)的臨床實驗診斷技術(shù)。波爾效應(yīng)：因酸堿度改變而影響Hb攜帶O2能力的現(xiàn)象。血氣分析的主要參數(shù)：1、酸堿度2、二氧

15、化碳分壓指血漿中物理溶解co2的壓力。3、二氧化碳總量指存在于血漿中各種形式的co2的總和。代酸時明顯下降，堿中毒時明顯上升。4、氧分壓指血漿中物理溶解o2的張力，是機(jī)體缺氧的敏感指標(biāo)。5、氧飽和度指動脈血氧與血紅蛋白的結(jié)合程度。參考值95%-98%6、血氧飽和度為50%時的氧分壓指血紅蛋白為50%氧飽和度時的氧分壓。7、實際碳酸氫鹽和標(biāo)準(zhǔn)碳酸氫鹽AB指人體血漿中實際的HCO3-含量，是體內(nèi)代謝性酸堿平衡的重要指標(biāo)，也受呼吸因素改變的影響。SB指體溫37Pa（CO2）5.32kpa（40mmhg）、O2Sat為100%時的HCO3-含量，排除了呼吸因素的影響。8、堿剩余指在標(biāo)準(zhǔn)條件下，即溫度3

16、7C、一個標(biāo)準(zhǔn)大氣壓，Pa（CO2）5.32kpa（40mmhg），F(xiàn)O2Sat為100%時，用酸或堿將1L血液PH調(diào)整至7.40所需要加入的酸堿量。第九章酶免疫分析技術(shù)酶聯(lián)免疫吸附試驗ELAS基本原理時把抗原或抗體在不損壞其免疫活性的條件下預(yù)先結(jié)合到某種固相載體表面，測定時，將受檢樣品（含待測抗體或抗原）和酶標(biāo)抗原或抗體按一定程序與結(jié)合在固相載體上的抗原或抗體發(fā)生反應(yīng)形成抗原抗體復(fù)合物，結(jié)合到固相載體上的酶標(biāo)抗原或抗體量與標(biāo)本中待檢抗體或抗原量成一定比例；經(jīng)過洗滌去除反應(yīng)夜中其他物質(zhì)，加入酶反應(yīng)底物后，底物即被固相載體上的酶催化成有色產(chǎn)物，最后通過定性或定量分析有色產(chǎn)物量即可確定樣品中待測物

17、質(zhì)含量。1、雙抗體夾心法檢測大分子抗原基本原理利用連接于固相載體上的抗體和酶標(biāo)抗體可分別與樣品中被檢測抗原分子上兩個不同抗原決定簇結(jié)合，形成固相抗體和酶標(biāo)抗體的量相對于待檢抗原時過量的，因此復(fù)合物的形成量與待檢抗原的含量成正比。測定復(fù)合物中酶作用催化底物生成的有色物質(zhì)量（OD值），即可去定待測抗原含量2、競爭法檢測小分子半抗原小分子半抗原如地高辛，茶堿等藥物以及T3T4和睪酮等激素因其只有一個抗原決定簇，只能用此法?；驹泶郎y樣品中小分子半抗原和酶標(biāo)小分子半抗原共同競爭結(jié)合固相載體上的特異性抗體，形成酶標(biāo)的小分子抗原抗體復(fù)合物和非標(biāo)記小分子抗原抗體復(fù)合物。待測樣品中小分子半抗原含量越高，形成

18、的非標(biāo)記小分子抗原抗體復(fù)合物就越多，而酶標(biāo)的小分子抗原抗體復(fù)合物則越少。加入酶底物后，顯色強(qiáng)度與待測樣品中小分子抗原含量成反比關(guān)系。3、間接法檢測抗體是測定抗體最常用的方法，屬非競爭結(jié)合試驗，基本原理將抗原預(yù)先連接到固相載體上，加入樣品后，待檢抗體與固相抗原結(jié)合形成固相抗原抗體復(fù)合物，再用酶標(biāo)二抗（針對受檢抗體的抗體，如羊抗人IgG抗體）與固相免疫復(fù)合物中的抗體結(jié)合，形成固相抗原-受檢抗體-酶標(biāo)二抗復(fù)合物，測定加底物后的顯色程度，以確定待檢抗體含量。由于酶標(biāo)二抗時針對一類免疫球蛋白分子，因此該法可用一種酶標(biāo)二抗檢測多種待檢抗體，具有更好的通用性。4、雙抗原夾心法檢測抗體原理同雙抗體夾心法測抗原

19、5、競爭抑制發(fā)檢測抗體抗體的測定一般不使用競爭法，當(dāng)抗原中雜質(zhì)難以去除或抗原的結(jié)合特異性不穩(wěn)定時，可采用這種模式測定抗體。如乙肝病毒核心抗體和乙肝肝炎病毒e抗體的測定，由于e抗原較核心抗原僅多29個氨基酸，e抗原很容易轉(zhuǎn)變?yōu)楹诵目乖?，因此其測定采用競爭法。該法需制備固相抗體、酶標(biāo)記抗體及純化的抗原，待測標(biāo)本中無特異性抗體時，通過固相抗體-抗原-酶標(biāo)抗體的反應(yīng)順序最后使底物顯色。待測標(biāo)本中有特異性抗體時，它和加入的抗原結(jié)合，使最終結(jié)合到固相上的酶標(biāo)抗體減少，酶活性減少50%以上便使抑制試驗陽性?？膳卸ù郎y標(biāo)本中是否存在特異性抗體。6、捕獲法檢測抗體捕獲法（亦稱反向間接法）ELISA，主要用于血清

20、中某種抗體成分的測定?；驹硐葘⑨槍gM的第二抗體結(jié)合于固相載體，用以結(jié)合樣品中所有IgM，洗滌出去等無關(guān)物質(zhì)，然后加入特異抗原與待檢結(jié)合，再加入抗原特異的酶標(biāo)抗體，最后形成固相二抗-IgM-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，加入酶底物顯色后，即可對樣品中待檢IgM是否存在及其含量進(jìn)行測定。第十章放射免疫分析技術(shù)放射免疫分析技術(shù)是以放射性核素標(biāo)記的抗原或抗體為參與免疫反應(yīng)的失蹤物，對待檢物進(jìn)行超微量分析的一類測定標(biāo)本第十一章化學(xué)發(fā)光和熒光免疫技shu一.化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)的類型：1.化學(xué)發(fā)光免疫分析（CLIA）2.化學(xué)發(fā)光酶免疫分析（CLEIA）2.微粒子化學(xué)發(fā)光免疫分析（MLIA）4.時間分辨熒光

21、免疫分析法（TRFIA）/5.電化學(xué)發(fā)光免疫分析（ECL）.熒光偏振免疫分析（FPIA）二.電化學(xué)發(fā)光時對電極世家一定電壓進(jìn)行的電化學(xué)反應(yīng)，反應(yīng)的產(chǎn)物之間或體系中某種組分發(fā)生化學(xué)發(fā)光，用普通化學(xué)手段測量發(fā)光光譜及強(qiáng)度從而對物質(zhì)進(jìn)行痕量分析的一種方法。三.時間分辨熒光免疫分析法是將抗原抗體反應(yīng)與熒光物質(zhì)發(fā)光和時間相結(jié)合的熒光光譜技術(shù)。用3價烯土離子及其螯合劑作為示蹤物，通過雙功能基團(tuán)的螯合劑與蛋白質(zhì)多肽激素抗體核酸探針或生物活性細(xì)胞以共軛雙鍵結(jié)合進(jìn)行標(biāo)記，待反應(yīng)體系發(fā)生后，三價稀土離子螯合物可以在紫外線激發(fā)下，發(fā)出強(qiáng)度高持續(xù)時間長的熒光，利用延緩測量時間，待樣品中蛋白質(zhì)等背景熒光完全淬滅后，再測

22、量三價稀土離子螯合物的特異熒光，根據(jù)熒光強(qiáng)度和相對熒光強(qiáng)度和相對熒光強(qiáng)度的比值，判斷反應(yīng)體系中分析物的濃度，達(dá)到定量分析的目的第12章流式技術(shù)一.流式細(xì)胞術(shù)的概念：是一種對處在液流中的細(xì)胞或其它生物微粒逐個進(jìn)行多參數(shù)定量分析的技術(shù)。二.主要技術(shù)指標(biāo)：1.熒光測量靈敏度2.儀器分辨率3.前向角散射光檢測靈敏度4.FCM的分析速度5.FCM的分選指標(biāo)三.檢測結(jié)果顯示:1.單參數(shù)直方圖2.二維點圖3.二維高等圖4.假三維圖四.應(yīng)用：（一）淋巴細(xì)胞亞群分析：1.與T淋巴細(xì)胞有關(guān)的CD分子：CD2.CD3.CD4.CD8.CD28;2.NK細(xì)胞標(biāo)志：部分為CD2+.CD7+.CD56CD16與細(xì)胞毒效應(yīng)

23、有關(guān)；3.活化T淋巴細(xì)胞標(biāo)志：CD25.CD69.（二）其他方面應(yīng)用：1.血小板功能方面的評價.2.細(xì)胞凋亡的檢測.3.在器官移植和造血細(xì)胞移植中的應(yīng)用五.血細(xì)胞分析儀的原理：1.電學(xué)檢測原理（電阻抗原理）：血細(xì)胞與等滲的電解質(zhì)溶液相比為相對的不良導(dǎo)體，其電阻值大于稀釋溶液的電阻值；當(dāng)血細(xì)胞通過檢測器的孔徑感受區(qū)時，檢測器內(nèi)外電極之間的恒流源電路的電阻值瞬間增大，產(chǎn)生電壓脈沖信號；脈沖信號數(shù)等于通過的細(xì)胞數(shù)，脈沖信號幅度大小與細(xì)胞大小呈正比。應(yīng)用：應(yīng)用電阻抗原理可進(jìn)行白細(xì)胞計數(shù)和分群、血小板計數(shù)、紅細(xì)胞計數(shù)、紅細(xì)胞平均體積和血小板平均體積測定及獲得其他相關(guān)參數(shù)等。2.光學(xué)檢測原理：六.流式細(xì)胞

24、術(shù)尿沉渣分析儀的工作原理。答：流式細(xì)胞術(shù)尿沉渣分析儀的測定是應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)和電阻抗的原理進(jìn)行的。當(dāng)一個尿液標(biāo)本被稀釋并經(jīng)染色液染色后，靠液壓作用通過鞘液流動池。反應(yīng)樣品從樣品噴嘴出口進(jìn)入鞘液流動室時，被一種無粒子顆粒的鞘液包圍，使每個細(xì)胞以單個縱列的形式通過流動池的中心(豎直)軸線，在這里每個尿液細(xì)胞被氬激光光束照射。每個細(xì)胞有不同程度的熒光強(qiáng)度、前向散射光強(qiáng)度和電阻抗的大小。儀器將這種熒光、散射光等光信號轉(zhuǎn)變成電信號，并對各種信號進(jìn)行分析，最后得到每個尿液標(biāo)本產(chǎn)生出的直方圖(histogram)和散射圖(scattergram)。通過分析這些圖形，即可區(qū)分每個細(xì)胞并得出有關(guān)細(xì)胞的形態(tài)七尿沉渣

25、采用自動化智能顯微鏡技術(shù)的儀器尿沉渣全自動分析儀基于影像流式細(xì)胞術(shù)來分析尿中油性成分。儀器能自動吸入未離心的尿液，經(jīng)過粗濾網(wǎng)去除粘液等較大的顆粒，經(jīng)甲紫燃料染色后進(jìn)入平板式流動室內(nèi)做層狀流動，當(dāng)尿液中顆粒通過自動化智能顯微鏡時，由高分辨率電視攝像機(jī)采取圖像，由計算機(jī)數(shù)字化影像處理及重排，然后由檢驗人員根據(jù)內(nèi)存中的各種細(xì)胞，管型及其他有型成分信息進(jìn)行判斷，然后將結(jié)果儲存，計算，打印出來。根據(jù)圖像容量中個有形成分的數(shù)量，計算出每微升尿內(nèi)各種顆粒的數(shù)目。八尿沉渣檢查是用顯微鏡對尿沉渣中的有形成分進(jìn)行檢查，識別尿液中各種細(xì)胞，管型，結(jié)晶，細(xì)菌，寄生蟲和精子等有形成分，這些有形成分的鑒別鑒定。對腎臟和尿

26、路疾病的診斷和鑒別診斷病情嚴(yán)重程度和預(yù)后的判斷都有重要的意義第13章染色技術(shù)一.細(xì)胞玻片的制作方法：取材-制片-固定-染色-鏡檢二.臨床常用的染色方法：HE染色；瑞氏染色；吉姆薩染色；瑞氏-吉姆薩混合染色三.細(xì)胞化學(xué)染色定義：是指經(jīng)化學(xué)處理使細(xì)胞的某一組份其化學(xué)變化，產(chǎn)生特殊的的染色反應(yīng)，并通過顯微鏡來鑒定細(xì)胞中含有物的性質(zhì)和位置的一類方法。四.細(xì)胞標(biāo)本的取材和固定：1.細(xì)胞標(biāo)本來源：血液、骨髓、穿刺液、脫落細(xì)胞、培養(yǎng)細(xì)胞、新鮮實體組織和石蠟包埋組織經(jīng)處理后制備成的單細(xì)胞懸液。2.固定液選擇標(biāo)準(zhǔn)：a、最好的保持細(xì)胞的形態(tài)b、最大限度的保存抗原的的免疫活性；分類：醛類固定液、丙酮及醇類固定液；固

27、定方法：浸入法、微波法；免疫細(xì)胞化學(xué)染色的細(xì)胞制片技術(shù)：a、細(xì)胞涂片、印片及細(xì)胞單層培養(yǎng)物切片.b超薄切片五固定的方法物理干燥高熱和低溫驟冷化學(xué)方法是用化學(xué)試劑配制成的固定液進(jìn)行固定第15章自動生化分析儀一.全實驗自動化TLA：是指借助實驗室信息系統(tǒng)將臨床實驗中各類自動化分析儀器串聯(lián)起來，組合成流水線作業(yè)的形式，把樣品輸送到不同的檢測單元，并將這個儀器的檢驗結(jié)果合并輸出，實現(xiàn)了遠(yuǎn)程的檢驗申請、實時在線檢測、遠(yuǎn)程審核結(jié)果和實驗數(shù)據(jù)的共享。二.分析方法：1.一點法.2.二點終點法（固定時間法）3.速率法：兩點速率法、多點速率法、三.質(zhì)量控制：人員培訓(xùn)、室內(nèi)控制、室間質(zhì)評四實驗室自動化的特點是把各類

28、儀器集中起來形成一個核心，做到同一樣品在不同檢測原理的自動化儀器統(tǒng)一測定和報告，將自動化儀器與分析前處理分析后處理設(shè)備相連接成集成化。第16章基因分析技術(shù)PCR實際上是摸板DNA引物和4種DNTP存在的條件下，依賴與DNA聚合酶的酶促反映，類似于DNA的半保留復(fù)制過程，其特異性依賴于靶序列兩端互補(bǔ)的寡核苷酸引物一.PCR原理：1.變性：模板DNA經(jīng)加熱至94c左右一定時間后.使模板DNA雙鏈或經(jīng)PCR擴(kuò)增形成的雙鏈DNA離解，使之成為單鏈，以便與引物結(jié)合，為下輪反應(yīng)做準(zhǔn)備；2.退火：溫度突然降至37-58c時，引物與變形的DNA單鏈模板在堿基互補(bǔ)的基礎(chǔ)上形成引物-模板雜交雙鏈。3.延伸：在60

29、-72c時，TaqDNA聚合酶使引物從5端向3端按照堿基互補(bǔ)配對原則沿著DNA單鏈模板進(jìn)行延伸，隨著4中dNTP的摻入，合成新的DNA互補(bǔ)鏈。二.PCR反應(yīng)要素1.模板2.引物3.DNA聚合酶4.dNTP.5.PCR緩沖液三.PCR標(biāo)準(zhǔn)化：1.上崗人員培訓(xùn)2.標(biāo)準(zhǔn)化PCR診斷實驗室：試劑準(zhǔn)備區(qū)（10m2）-標(biāo)本準(zhǔn)備區(qū)(10m2)擴(kuò)增區(qū)(6m2)產(chǎn)物分析區(qū)(15m2).3.PCR標(biāo)準(zhǔn)化操作程序:1.試劑配置.分裝及保存2.標(biāo)本的采集和處理3.基因擴(kuò)增及其實驗條件的選擇4.擴(kuò)增產(chǎn)物檢測5.PCR結(jié)果的判讀4.污染的預(yù)防和污染源的標(biāo)準(zhǔn)化處理:1.嚴(yán)格執(zhí)行實驗室的各項規(guī)章制度，按規(guī)程進(jìn)行各項實驗操作2

30、.實驗時，必須戴一次性手套（處理標(biāo)本時需戴乳膠手套），并隨時更換。3、工作衣，手套及實驗用器材應(yīng)區(qū)分固定使用。4.不在PCR實驗室從事分子克隆實驗，不得在室內(nèi)從事與實驗無關(guān)的事宜。5.保持地面及桌面整潔，保持室內(nèi)溫度恒定，室內(nèi)禁止使用電風(fēng)扇。6.所有用于標(biāo)本采集的試管，容器（應(yīng)使用一次性實驗物品）以及基因擴(kuò)增管等模板或擴(kuò)增產(chǎn)物污染的物品，應(yīng)置于1mol/l鹽酸中臨時收集存放，以減少室內(nèi)氣溶膠形成。7.標(biāo)本擴(kuò)增后產(chǎn)物及一次性使用物品等實驗材料，實驗完畢密封包裝（包裝袋應(yīng)有明顯的生物污染標(biāo)記），進(jìn)行高壓消毒并焚燒。8.對于不能進(jìn)行高壓消毒等方法處理的重復(fù)使用物品或器具，如塑料試管架等，可以用一般或?qū)?/p>