HPLC法測定痔炎消片中綠原酸和蘆丁的含量

1、HPLC法測定痔炎消片中綠原酸和蘆丁的含量【摘要】目的建立高效液相色譜法同時測定痔炎消片中綠原酸和蘆丁的含量。方法采用Diansil18柱4.6250,5,流動相：乙腈-0.5%磷酸20：80，流速：1.0l/in,檢測波長：344n。結果綠原酸在進樣量0.01920.48g呈良好的線性關系；平均加樣回收率為99.89%，RSD=0.33%n=5。蘆丁在進樣量為0.0962.406g呈良好的線性關系；平均加樣回收率為99.73%，RSD=1.49%n=5。結論本法操作簡便，重現性好，可用作該藥品的質量控制。【關鍵詞】痔炎消片綠原酸蘆丁HPL含量測定【Abstrat】bjetiveTestabl

2、ishaHPLethdfrthedeterinatinfhlrgeniaid,rutininZhiyanxiatablets.ethdsADiansil18lun2504.6,5asusedithbilephasefaetnitrile-0.5%phsphriaidslutin20:80.Theflrateas1.0l/inandthedetetinavelengthas344n.ResultsThelinerarityrangefhlrgeniaidandrutinere0.01920.48gand0.0962.406grespetively.Theaveragereveryrateere9

3、9.89%RSD=0.33%,n=5and99.73%RSD=1.49%,n=5.nlusinThisethdissiple,aurateandanbeusedfrthestandardqualityntrlfZhiyanxiatablets.【Keyrds】Zhiyanxiatablet;hlrgeniaid;rutin;HPL;deterinatin痔炎消片是由火麻仁、紫珠葉、槐花、金銀花、地榆、白芍、三七、茅根、茵陳、枳殼十味藥材經適當加工制成，具有清熱解毒，潤腸痛便，止血，止痛，消腫的成效，用于痔瘡發(fā)炎腫痛等癥1。在處方組成中，金銀花具有清熱解毒,涼散風熱之成效2；茵陳具有清濕熱，退黃

4、疸之成效2；槐花具有涼血止血，清肝瀉火之成效2。本文用同一流動相系統對金銀花、茵陳中的綠原酸和槐花中的蘆丁同時進展測定，結果較為滿意，可用作加強本品的質量控制指標。1儀器與試藥儀器：日本島津L-10Atvp泵、SPD-10Avp紫外檢測儀；深圳威瑪通用多媒體數據工作站；SB2200超聲清洗器。綠原酸對照品供含量測定用,批號：200212、蘆丁對照品供含量測定用,批號：200206,均為中國藥品生物制品檢定所提供。痔炎消片為廣西某藥業(yè)市售品規(guī)格：0.53g/片，批號：070601，070602，070603。乙腈、磷酸為色譜純，水為超純水，其他試劑均為分析純。2方法與結果2.1色譜條件Dians

5、il18柱4.6250,5,流動相：乙腈-0.5%磷酸20：80，流速：1.0l/in,檢測波長：344n，進樣量：20l,柱溫：室溫。在此色譜條件下，對照品和樣品色譜圖見圖14。2.2對照品溶液的制備2.2.1綠原酸對照品的制備精細稱取綠原酸對照品4.8g,置20l棕色瓶中，加甲醇使溶解并稀釋至刻度，搖勻；精細量取5l，置50l棕色瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得每1l中含綠原酸0.024g。2.2.2蘆丁對照品的制備精細稱取蘆丁對照品12.03g，置20l量瓶中，加甲醇使溶解并稀釋至刻度，搖勻；精細量取10l，置50l量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得每1l中含蘆丁0.1203g。2.

6、2.3混合對照品溶液的制備精細量取綠原酸對照品和蘆頂對照品各5l，置同一棕色瓶中，搖勻，即得。2.3供試品溶液的制備取本品5袋內容物，混勻，研細，取0.5g，精細稱定，置50l棕色容量瓶中，加甲醇-水3：7的溶液40l，超聲30in使溶解，放冷，加至刻度，搖勻，用微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。2.4空白樣品的制備據處方比例，按標準制備法1制備不含金銀花、茵陳和槐花的痔炎消顆粒，并按“2.3項下方法同法制成陰性空白對照溶液。2.5線性關系的考察分別精細量取對照品溶液1.0、2.0、5.0、10.0、15.0、25.0l,分別置25l量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，進樣測定。以峰面積積分值

7、為縱坐標，進樣量g為橫坐標繪制標準曲線，回歸方程分別為：綠原酸：y=308248.9x+402.2,r=0.9999，線性范圍為：0.01920.48g;蘆丁：y=461350.8x-4078.5,r=0.9998，線性范圍為：0.0962.406g。2.6精細度試驗對同一份供試品溶液，連續(xù)進樣6次，結果綠原酸、蘆丁峰面積的RSDn=6分別為1.81%、2.76%，說明精細度較好。2.7穩(wěn)定性試驗取供試品溶液，在室溫下放置0h、2h、4h、6h、8h、12h分別進樣，測定峰面積，結果綠原酸、蘆丁峰面積的RSDn=6分別為2.35%、3.37%。2.8重復性試驗取同一批次061001樣品5份，同

8、法測定，結果綠原酸的平均含量為2.06g/g，RSD為0.70%；蘆丁的平均含量為1.06g/g，RSD=0.81%，說明該法重復性好。2.9加樣回收試驗精細稱取含量的樣品6份，分別精細參加綠原酸、蘆丁對照品適量，按“2.3項下方法配制供試品溶液，依上述方法測定，計算回收率，結果見表1、表2。表1樣品中綠原酸加樣回收結果表2樣品中蘆丁加樣回收結果2.10樣品測定取樣品3個批次，根據上述色譜條件，依法進樣測定含量，每批測定5份，結果見表3。3討論3.1測定波長的選擇經對綠原酸和蘆丁的紫外吸收光譜測定，兩對照品在344n處均有較大的吸光度，因此選擇344n作為測定波長。表3樣品測定結果3.2提取方

9、法的選擇以甲醇、甲醇-水1：1、甲醇-水7：3、甲醇-水3：7、60%乙醇、70%乙醇6種不同溶劑分別采用超聲提取和加熱回流提取的實驗，結果以甲醇-水3：7超聲處理為佳。通過對超聲時間10in、20in、30in、40in和60in的考察，提取時間30in與40in、60in樣品中的綠原酸和蘆丁無明顯差異，應選用超聲提取30in。3.3流動相的選擇實驗中曾使用甲醇-0.05l/L磷酸二氫鉀40：603，乙腈-0.4%磷酸10：904作流動相，供試品中綠原酸未能有效別離。經對乙腈-0.4%磷酸10：90流動相進展配比，特別是增加乙腈的濃度，選用乙腈-0.5%磷酸20:80作為流動相時，綠原酸、蘆丁與其他成分峰的別離度好，峰形對稱性良好。實驗中發(fā)現，綠原酸有光分解現象，即儲存在無色容量瓶中的綠原酸對照液在實驗室光照條件下放置一定時間后，色譜中除綠原酸主峰外，其后會出現一個雜質峰，其峰面積與光照時間呈正比。改用棕色瓶后，同樣條件未發(fā)現此現象，因此，實驗中應注意避光操作?！緟⒖嘉墨I】1國家藥典委員會.中華人民共和國衛(wèi)生部頒藥