HPLC法測(cè)定痔炎消片中綠原酸和蘆丁的含量

1、HPLC法測(cè)定痔炎消片中綠原酸和蘆丁的含量【摘要】目的建立高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定痔炎消片中綠原酸和蘆丁的含量。方法采用Diansil18柱4.6250,5,流動(dòng)相：乙腈-0.5%磷酸20：80，流速：1.0l/in,檢測(cè)波長(zhǎng)：344n。結(jié)果綠原酸在進(jìn)樣量0.01920.48g呈良好的線性關(guān)系；平均加樣回收率為99.89%，RSD=0.33%n=5。蘆丁在進(jìn)樣量為0.0962.406g呈良好的線性關(guān)系；平均加樣回收率為99.73%，RSD=1.49%n=5。結(jié)論本法操作簡(jiǎn)便，重現(xiàn)性好，可用作該藥品的質(zhì)量控制?！娟P(guān)鍵詞】痔炎消片綠原酸蘆丁HPL含量測(cè)定【Abstrat】bjetiveTestabl

2、ishaHPLethdfrthedeterinatinfhlrgeniaid,rutininZhiyanxiatablets.ethdsADiansil18lun2504.6,5asusedithbilephasefaetnitrile-0.5%phsphriaidslutin20:80.Theflrateas1.0l/inandthedetetinavelengthas344n.ResultsThelinerarityrangefhlrgeniaidandrutinere0.01920.48gand0.0962.406grespetively.Theaveragereveryrateere9

3、9.89%RSD=0.33%,n=5and99.73%RSD=1.49%,n=5.nlusinThisethdissiple,aurateandanbeusedfrthestandardqualityntrlfZhiyanxiatablets.【Keyrds】Zhiyanxiatablet;hlrgeniaid;rutin;HPL;deterinatin痔炎消片是由火麻仁、紫珠葉、槐花、金銀花、地榆、白芍、三七、茅根、茵陳、枳殼十味藥材經(jīng)適當(dāng)加工制成，具有清熱解毒，潤(rùn)腸痛便，止血，止痛，消腫的成效，用于痔瘡發(fā)炎腫痛等癥1。在處方組成中，金銀花具有清熱解毒,涼散風(fēng)熱之成效2；茵陳具有清濕熱，退黃

4、疸之成效2；槐花具有涼血止血，清肝瀉火之成效2。本文用同一流動(dòng)相系統(tǒng)對(duì)金銀花、茵陳中的綠原酸和槐花中的蘆丁同時(shí)進(jìn)展測(cè)定，結(jié)果較為滿意，可用作加強(qiáng)本品的質(zhì)量控制指標(biāo)。1儀器與試藥儀器：日本島津L-10Atvp泵、SPD-10Avp紫外檢測(cè)儀；深圳威瑪通用多媒體數(shù)據(jù)工作站；SB2200超聲清洗器。綠原酸對(duì)照品供含量測(cè)定用,批號(hào)：200212、蘆丁對(duì)照品供含量測(cè)定用,批號(hào)：200206,均為中國(guó)藥品生物制品檢定所提供。痔炎消片為廣西某藥業(yè)市售品規(guī)格：0.53g/片，批號(hào)：070601，070602，070603。乙腈、磷酸為色譜純，水為超純水，其他試劑均為分析純。2方法與結(jié)果2.1色譜條件Dians

5、il18柱4.6250,5,流動(dòng)相：乙腈-0.5%磷酸20：80，流速：1.0l/in,檢測(cè)波長(zhǎng)：344n，進(jìn)樣量：20l,柱溫：室溫。在此色譜條件下，對(duì)照品和樣品色譜圖見(jiàn)圖14。2.2對(duì)照品溶液的制備2.2.1綠原酸對(duì)照品的制備精細(xì)稱取綠原酸對(duì)照品4.8g,置20l棕色瓶中，加甲醇使溶解并稀釋至刻度，搖勻；精細(xì)量取5l，置50l棕色瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得每1l中含綠原酸0.024g。2.2.2蘆丁對(duì)照品的制備精細(xì)稱取蘆丁對(duì)照品12.03g，置20l量瓶中，加甲醇使溶解并稀釋至刻度，搖勻；精細(xì)量取10l，置50l量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得每1l中含蘆丁0.1203g。2.

6、2.3混合對(duì)照品溶液的制備精細(xì)量取綠原酸對(duì)照品和蘆頂對(duì)照品各5l，置同一棕色瓶中，搖勻，即得。2.3供試品溶液的制備取本品5袋內(nèi)容物，混勻，研細(xì)，取0.5g，精細(xì)稱定，置50l棕色容量瓶中，加甲醇-水3：7的溶液40l，超聲30in使溶解，放冷，加至刻度，搖勻，用微孔濾膜濾過(guò)，取續(xù)濾液作為供試品溶液。2.4空白樣品的制備據(jù)處方比例，按標(biāo)準(zhǔn)制備法1制備不含金銀花、茵陳和槐花的痔炎消顆粒，并按“2.3項(xiàng)下方法同法制成陰性空白對(duì)照溶液。2.5線性關(guān)系的考察分別精細(xì)量取對(duì)照品溶液1.0、2.0、5.0、10.0、15.0、25.0l,分別置25l量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，進(jìn)樣測(cè)定。以峰面積積分值

7、為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣量g為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，回歸方程分別為：綠原酸：y=308248.9x+402.2,r=0.9999，線性范圍為：0.01920.48g;蘆丁：y=461350.8x-4078.5,r=0.9998，線性范圍為：0.0962.406g。2.6精細(xì)度試驗(yàn)對(duì)同一份供試品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次，結(jié)果綠原酸、蘆丁峰面積的RSDn=6分別為1.81%、2.76%，說(shuō)明精細(xì)度較好。2.7穩(wěn)定性試驗(yàn)取供試品溶液，在室溫下放置0h、2h、4h、6h、8h、12h分別進(jìn)樣，測(cè)定峰面積，結(jié)果綠原酸、蘆丁峰面積的RSDn=6分別為2.35%、3.37%。2.8重復(fù)性試驗(yàn)取同一批次061001樣品5份，同

8、法測(cè)定，結(jié)果綠原酸的平均含量為2.06g/g，RSD為0.70%；蘆丁的平均含量為1.06g/g，RSD=0.81%，說(shuō)明該法重復(fù)性好。2.9加樣回收試驗(yàn)精細(xì)稱取含量的樣品6份，分別精細(xì)參加綠原酸、蘆丁對(duì)照品適量，按“2.3項(xiàng)下方法配制供試品溶液，依上述方法測(cè)定，計(jì)算回收率，結(jié)果見(jiàn)表1、表2。表1樣品中綠原酸加樣回收結(jié)果表2樣品中蘆丁加樣回收結(jié)果2.10樣品測(cè)定取樣品3個(gè)批次，根據(jù)上述色譜條件，依法進(jìn)樣測(cè)定含量，每批測(cè)定5份，結(jié)果見(jiàn)表3。3討論3.1測(cè)定波長(zhǎng)的選擇經(jīng)對(duì)綠原酸和蘆丁的紫外吸收光譜測(cè)定，兩對(duì)照品在344n處均有較大的吸光度，因此選擇344n作為測(cè)定波長(zhǎng)。表3樣品測(cè)定結(jié)果3.2提取方

9、法的選擇以甲醇、甲醇-水1：1、甲醇-水7：3、甲醇-水3：7、60%乙醇、70%乙醇6種不同溶劑分別采用超聲提取和加熱回流提取的實(shí)驗(yàn)，結(jié)果以甲醇-水3：7超聲處理為佳。通過(guò)對(duì)超聲時(shí)間10in、20in、30in、40in和60in的考察，提取時(shí)間30in與40in、60in樣品中的綠原酸和蘆丁無(wú)明顯差異，應(yīng)選用超聲提取30in。3.3流動(dòng)相的選擇實(shí)驗(yàn)中曾使用甲醇-0.05l/L磷酸二氫鉀40：603，乙腈-0.4%磷酸10：904作流動(dòng)相，供試品中綠原酸未能有效別離。經(jīng)對(duì)乙腈-0.4%磷酸10：90流動(dòng)相進(jìn)展配比，特別是增加乙腈的濃度，選用乙腈-0.5%磷酸20:80作為流動(dòng)相時(shí)，綠原酸、蘆丁與其他成分峰的別離度好，峰形對(duì)稱性良好。實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，綠原酸有光分解現(xiàn)象，即儲(chǔ)存在無(wú)色容量瓶中的綠原酸對(duì)照液在實(shí)驗(yàn)室光照條件下放置一定時(shí)間后，色譜中除綠原酸主峰外，其后會(huì)出現(xiàn)一個(gè)雜質(zhì)峰，其峰面積與光照時(shí)間呈正比。改用棕色瓶后，同樣條件未發(fā)現(xiàn)此現(xiàn)象，因此，實(shí)驗(yàn)中應(yīng)注意避光操作?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】1國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部頒藥