動植物用轉(zhuǎn)基因微生物安全性

1、關(guān)于動植物用轉(zhuǎn)基因微生物的安全性第一張，PPT共五十四頁，創(chuàng)作于2022年6月以微生物為受體的轉(zhuǎn)基因生物稱為轉(zhuǎn)基因微生物。微生物是轉(zhuǎn)基因最常用的轉(zhuǎn)化材料，轉(zhuǎn)基因微生物比較容易培育，應(yīng)用也最廣泛。例如，生產(chǎn)奶酪的凝乳酶，以往只能從殺死的小牛胃中獲得，現(xiàn)利用轉(zhuǎn)基因微生物已能夠使凝乳酶在體外大量產(chǎn)生，避免了小牛的無辜死亡，也降低了成本。如果把一種微生物的抗藥性基因或其他基因轉(zhuǎn)入另一種微生物中，使之具有抗藥性，或?qū)又参锘蜣D(zhuǎn)入微生物中。這種后來具有抗藥性或其他新性狀的微生物即為轉(zhuǎn)基因微生物。例如，開始時不具有產(chǎn)蘇氨酸、天冬氨酸、凝血蛋白等，后經(jīng)導入外源基因而獲得產(chǎn)蘇氨酸、天冬氨酸、凝血蛋白等的微生物

2、均為轉(zhuǎn)基因微生物。第二張，PPT共五十四頁，創(chuàng)作于2022年6月讓微生物制造然料-含油細菌第三張，PPT共五十四頁，創(chuàng)作于2022年6月嗜汞細菌-能清除汞污染第四張，PPT共五十四頁，創(chuàng)作于2022年6月第一節(jié) 動植物用轉(zhuǎn)基因微生物概況根據(jù)轉(zhuǎn)基因微生物的用途，可分為動物用轉(zhuǎn)基因微生物、植物用轉(zhuǎn)基因微生物和醫(yī)藥用轉(zhuǎn)基因微生物三大類。動物用轉(zhuǎn)基因微生物是應(yīng)用于動物的活疫苗、飼料添加劑和其他用途的轉(zhuǎn)基因微生物。植物用轉(zhuǎn)基因微生物主要是指通過重組DNA微生物研制的、直接應(yīng)用于植物上的具有殺蟲、防病、固氮、生長調(diào)節(jié)等作用的微生物。轉(zhuǎn)基因微生物釋放可能會帶來一系列安全問題，事前須對其在環(huán)境中的基因轉(zhuǎn)移潛力

3、、存活能力、擴散能力及對生態(tài)系統(tǒng)的潛在影響等進行安全評價，并探索有效的檢測方法和風險評價策略第五張，PPT共五十四頁，創(chuàng)作于2022年6月一、動物用轉(zhuǎn)基因微生物的發(fā)展概況1 轉(zhuǎn)基因微生物飼料添加劑酶制劑(重組酶)：利用高產(chǎn)能和生產(chǎn)飼料酶的基因工程菌，添加于飼料中，提高飼料的效價。如產(chǎn)植酸酶的重組畢氏酵母菌(2000年許可證)?？咕模嚎咕膶λ锍Ｒ姴∪绱竽c桿菌、沙門氏菌等具有廣譜殺菌作用，具有良好的應(yīng)用前景。2004年農(nóng)業(yè)部批準轉(zhuǎn)抗菌肽基因酵母生產(chǎn)的抗菌肽制劑的效價達5000U/ml重組生長素：GH由腦下垂體分泌，能促進動物的生長發(fā)育，加速蛋白質(zhì)合成，但在魚類體內(nèi)含量極微。將魚GH基因轉(zhuǎn)

4、入微生物中大量生產(chǎn)重組魚生長素，作為添加劑具有很強的促生長作用。第六張，PPT共五十四頁，創(chuàng)作于2022年6月產(chǎn)植酸酶的轉(zhuǎn)基因重組畢氏酵母菌第七張，PPT共五十四頁，創(chuàng)作于2022年6月2 基因工程疫苗利用重組DNA技術(shù)研制的疫苗，包括：亞單位疫苗、活載體疫苗和基因缺失疫苗。我國經(jīng)批準進入商業(yè)化生產(chǎn)的有狂犬病疫苗和牛羊腹瀉疫苗；通過安全性評估的有雞傳染性喉氣管炎疫苗、禽流感疫苗、雞痘疫苗等。基因工程亞單位疫苗：利用微生物的某種表面結(jié)構(gòu)成分(抗原)制成不含有核酸、能誘發(fā)機體產(chǎn)生抗體的疫苗稱為亞單位疫苗。它是一種保留病原體中有效免疫原成分,而去除其無效或有害成分的單純疫苗。例如,只含霍亂毒素B亞單

5、位制成的霍亂毒素B亞單位疫苗；用狂犬病毒主要抗原粘附在脂質(zhì)體上制成的狂犬病毒免疫體亞單位疫苗；以及麻疹病毒亞單位疫苗；等等.第八張，PPT共五十四頁，創(chuàng)作于2022年6月 將病原微生物的主要的保護性免疫原基因轉(zhuǎn)移到非致病的微生物中表達，可從其培養(yǎng)物中分離制備出亞單位疫苗試劑。轉(zhuǎn)基因活疫苗：活疫苗是指將病原微生物在人工誘發(fā)突變，失去致病性但保留免疫原性、繁衍能力和剩余毒力的無毒或弱毒病原微生物。 活疫苗接種后在人體內(nèi)有一定程度的繁殖或復制，類似一次輕型的自然感染，但不導致人發(fā)病。 轉(zhuǎn)基因活疫苗根據(jù)其外源基因載體可分為病毒活載體疫苗和細菌活載體疫苗。前者針對病毒病，后者針對細菌性疾病。轉(zhuǎn)基因活疫苗

6、已在全球范圍開展科技研發(fā)和應(yīng)用研究，將成為今后疫苗制劑的主要趨勢。第九張，PPT共五十四頁，創(chuàng)作于2022年6月二、植物用轉(zhuǎn)基因微生物的發(fā)展概況 應(yīng)用重組DNA技術(shù)有目的地改變微生物或其產(chǎn)品 的遺傳性狀和生物學活性,可進一步增強殺蟲防病效果、擴大作用譜、延長田間持效期、從而提高農(nóng)業(yè)生產(chǎn)的經(jīng)濟效益。 各國獲準進入田間釋放的轉(zhuǎn)基因微生物主要為轉(zhuǎn)蘇云金芽孢桿菌遺傳工程菌和轉(zhuǎn)基因根瘤菌等活體產(chǎn)品，轉(zhuǎn)基因病毒殺蟲劑、防病轉(zhuǎn)基因微生物。我國已構(gòu)建轉(zhuǎn)基因工程菌近百株，有十多株轉(zhuǎn)基因微生物處于安全性評價和田間試驗，6種菌經(jīng)安全性評價后進入環(huán)境釋放，5種菌劑完成產(chǎn)品登記，其中的聯(lián)合固氮菌和高效廣譜的抗性基因工程

7、菌BMB820Bt已進入商品化生產(chǎn)。第十張，PPT共五十四頁，創(chuàng)作于2022年6月1 轉(zhuǎn)基因生物農(nóng)藥殺蟲轉(zhuǎn)基因微生物 轉(zhuǎn)基因病毒殺蟲劑：通過基因工程方法將外源殺蟲基因如蝎子神經(jīng)毒素基因等與昆蟲病毒重組，使重組病毒殺蟲速度和毒性提高，或成為雙價殺蟲劑； 轉(zhuǎn)Bt基因殺蟲劑：將來自蘇氏桿菌的Bt基因?qū)胧荏w菌株中，利用受體菌或載體的增效基因，制備效力更強和更持久的基因工程菌，以菌體或分離的Bt 毒蛋白制造殺蟲劑。在國外已有10多種制劑投入商業(yè)化生產(chǎn)。防病轉(zhuǎn)基因微生物：通過對生防菌進行基因改良，使之獲得對多種病害有拮抗活性，或增強抗菌活性。 將外源幾丁質(zhì)酶基因轉(zhuǎn)入一些木霉菌、枯草桿菌的菌株中，使其產(chǎn)生

8、更強烈的抑菌作用。 將一些殺蟲基因轉(zhuǎn)移到生防菌中，可使其同時具有防病和殺蟲的功效。 第十一張，PPT共五十四頁，創(chuàng)作于2022年6月第十二張，PPT共五十四頁，創(chuàng)作于2022年6月相對于傳統(tǒng)化學合成農(nóng)藥，生物農(nóng)藥具有安全、高效、針對性強等優(yōu)點，在人們環(huán)保意識不斷增強的今天，生物農(nóng)藥受到越來越多的重視，在全球的市場需求穩(wěn)步攀升。隨著轉(zhuǎn)基因作物的增加，病蟲害綜合防治措施的應(yīng)用，以及有機農(nóng)業(yè)的不斷擴大，預計在未來數(shù)年生物農(nóng)藥的研發(fā)將取得更多突破性的進展。生物農(nóng)藥的主要發(fā)展趨勢為：以基因重組為核心高技術(shù)競爭日趨激烈，關(guān)鍵技術(shù)創(chuàng)新顯著加快；轉(zhuǎn)基因生物農(nóng)藥新品種不斷涌現(xiàn)，其研發(fā)和應(yīng)用向更安全和更環(huán)保方向發(fā)

9、展；產(chǎn)品更新?lián)Q代速度加快，已成為涉農(nóng)工業(yè)最具前景的發(fā)展領(lǐng)域。第十三張，PPT共五十四頁，創(chuàng)作于2022年6月2 轉(zhuǎn)基因微生物肥料 轉(zhuǎn)基因微生物肥料主要是遺傳改良的聯(lián)合固氮菌和根瘤菌，是采用基因工程技術(shù)對外源固氮基因及其調(diào)控基因進行轉(zhuǎn)移至受體微生物而構(gòu)建出來的新型重組固氮菌。由于銨對固氮菌的固氮有一定的阻遏作用，構(gòu)建耐銨或泌銨的固氮工程菌株將能減輕銨對固氮的阻遏作用，明顯提高其固氮效率。美Rearch Seeds公司的轉(zhuǎn)基因根瘤菌RMBPC-2已于1997年獲準進行商業(yè)化生產(chǎn)；我國中科院、廣東微生物所和中科院上海植生所研制的聯(lián)合固氮菌AC-1541已獲準在遼寧生產(chǎn)；中科院植物所和中國農(nóng)大聯(lián)合研究

10、的玉米聯(lián)合固氮耐銨工程菌E7已獲準在黑龍江進行環(huán)境釋放。 第十四張，PPT共五十四頁，創(chuàng)作于2022年6月第二節(jié) 動物用轉(zhuǎn)基因微生物安全性評價動物用轉(zhuǎn)基因微生物與動物和人類健康密切相關(guān)，也是公眾最關(guān)心和最顧慮的一類轉(zhuǎn)基因生物。微生物生長繁殖快、變異類型多，有許多類型本身就是動植物的病原體。因此，轉(zhuǎn)基因微生物向環(huán)境中釋放有可能會帶來一系列的安全問題。由于轉(zhuǎn)基因微生物種類及其應(yīng)用環(huán)境的多樣性,也由于對轉(zhuǎn)基因工作可能產(chǎn)生的各種表型變異及其作用還缺乏足夠和充分的了解,因此現(xiàn)階段對其安全性的評價一般采取個案分析的原則。大面積釋放之前必須對轉(zhuǎn)基因微生物在環(huán)境中發(fā)生基因轉(zhuǎn)移的潛力、存活能力、擴散能力及對生態(tài)

11、系統(tǒng)的潛在影響等進行生態(tài)學研究和風險評價，還要探索有效的檢測方法和風險評價策略。第十五張，PPT共五十四頁，創(chuàng)作于2022年6月一、受體微生物的安全性評價1 受體微生物概述受體微生物是被導入了重組DNA的微生物，其安全性評價要考慮以下幾個方面。受體微生物背景資料和生物學特性：分類地位、天然野生還是人工培養(yǎng)、應(yīng)用情況、是否對人畜產(chǎn)生過不良影響、演變?yōu)橛泻ι锏目赡苄?、繁殖與擴散方式。受體微生物所適應(yīng)的生態(tài)環(huán)境：地理分布、自然生境、 生長發(fā)育要求、與其他生物的生態(tài)關(guān)系，對生態(tài)環(huán)境的影響及潛在危險性。受體微生物的遺傳變異：遺傳穩(wěn)定性、質(zhì)粒穩(wěn)定性及其潛在危險、轉(zhuǎn)座子狀況及潛在危險、是否發(fā)生過對人畜有危

12、害的變異、自然條件下與其他微生物、動物發(fā)生基因重組的可能性、監(jiān)測和監(jiān)控的可能性。第十六張，PPT共五十四頁，創(chuàng)作于2022年6月2 受體微生物安全等級根據(jù)農(nóng)業(yè)轉(zhuǎn)基因生物安全評價管理辦法第十一條有關(guān)標準，分為I-IV級，即：不存在危險、低度危險、中度危險、高度危險。常用的受體微生物的安全等級如下： 巴斯畢赤酵母GS115和啤酒酵母AB103 定為 I 級； 大腸桿菌BL21 定為 I 級； 禽痘病毒定為 I 級； 痘苗病毒和腺病毒定為 級； 沙門氏菌和志賀氏菌定為級； 單核細胞增生李斯特菌定為級； 重組卡介苗(分枝桿菌屬)定為 I 級；第十七張，PPT共五十四頁，創(chuàng)作于2022年6月 啤酒酵母

13、大腸桿菌 痘病毒 腺病毒 沙門氏菌 志賀氏菌 李斯特菌 分支桿菌第十八張，PPT共五十四頁，創(chuàng)作于2022年6月二、轉(zhuǎn)基因操作的安全性評價1 轉(zhuǎn)基因操作安全性評價概述所引入的基因或?qū)⒈恍揎椀男誀畹奶匦浴?實際插入的序列及操作過程中將被刪除的序列： 大小和結(jié)構(gòu)、性狀和功能、序列信息及拷貝數(shù)。目的基因與載體構(gòu)建的圖譜： 載體的特性、安全性和各插入片段的資料； 能否向不含該類基因的微生物轉(zhuǎn)移及風險預測。基因操作方法： 基因操作對受體生物安全等級的影響； 目的基因表達的穩(wěn)定性及其檢測； 重組DNA的分子結(jié)構(gòu)、復制特性和安全性?；虿僮饔绊懙念愋停?類型1 -增加安全性； 類型2 -不影響安全性；類型3

14、 -降低安全性。 第十九張，PPT共五十四頁，創(chuàng)作于2022年6月3 常用菌株轉(zhuǎn)基因操作的安全性酵母菌 轉(zhuǎn)入的表達基因：抗菌肽基因、植酸酶基因、 生長素基因、甘露聚糖酶基因。 基因操作對酵母菌安全性影響：定為類型 2大腸桿菌： 轉(zhuǎn)入的表達基因：生長素基因、酸性植酸酶基因、 豬防御素基因。 基因操作對大腸桿菌安全性影響：定為類型 2痘苗病毒、禽痘病毒和腺病毒： 轉(zhuǎn)入的表達基因：病原體抗原基因、血凝素基因、 腫瘤抗原基因、胸苷激酶基因、重組病毒 等 基因操作對其安全性影響：定為類型 2第二十張，PPT共五十四頁，創(chuàng)作于2022年6月沙門氏菌 轉(zhuǎn)入的表達基因：病原體抗原或抗原亞單位基因 基因操作對其

15、安全性影響：定為類型 2志賀氏菌 轉(zhuǎn)入的表達基因：大腸桿菌腸毒素基因、 動物抗原蛋白基因、大腸桿菌菌毛抗原基因 基因操作對其安全性影響：定為類型 2李斯特菌 轉(zhuǎn)入的表達基因：病原體抗原或抗原亞單位基因 腫瘤抗原基因。 基因操作對其安全性影響：定為類型 2重組卡介苗 轉(zhuǎn)入的表達基因：病原體抗原或抗原亞單位基 基因操作對其安全性影響：定為類型 2第二十一張，PPT共五十四頁，創(chuàng)作于2022年6月三、動物用轉(zhuǎn)基因微生物的安全性評價1 動物用轉(zhuǎn)基因微生物安全性評價的內(nèi)容動物用轉(zhuǎn)基因微生物的生物學特性。動物用轉(zhuǎn)基因微生物對動物的安全性。動物用轉(zhuǎn)基因微生物對人類的安全性及潛在危險。動物用轉(zhuǎn)基因微生物對生態(tài)

16、環(huán)境的安全性。動物用轉(zhuǎn)基因微生物的檢則和鑒定技術(shù)。動物用轉(zhuǎn)基因微生物的安全等級分為4個等級 其評價標準考慮：受體微生物安全等級 I-IV級 基因操作的影響類型 1-3 類型 綜評價之后確定：轉(zhuǎn)基因微生物的安全性 I-IV 級第二十二張，PPT共五十四頁，創(chuàng)作于2022年6月受體安全等級 基因操作 轉(zhuǎn)基因微生物 安全等級 I 類型1 2 安全等級I 類型3 安全等級 I 安全等級 類型1 2 安全等級 I 類型3 安全等級 安全等級 類型1 安全等級 I 類型2 安全等級 類型3 安全等級 安全等級 類型1 安全等級 I 類型2 安全等級 類型3 安全等級 第二十三張，PPT共五十四頁，創(chuàng)作于2

17、022年6月2 幾種代表性受體微生物轉(zhuǎn)基因后的安全性轉(zhuǎn)重組抗菌肽基因酵母菌：華南農(nóng)大、深圳藝鵬公司、廣州微生物所和廣州華桑公司聯(lián)合研制，已通過中間試驗和環(huán)境釋放安全性評價，在動物體內(nèi)未檢出殘留，2004年7月獲農(nóng)業(yè)部批準生產(chǎn)。痘苗病毒-狂犬病毒糖蛋白G重組體：已在多個國家批準注冊，我國評定的安全等級為級。轉(zhuǎn)基因禽痘病毒：已用于生產(chǎn)抗雞新城疫疫苗、H5亞型禽流感疫苗、狂犬病毒糖蛋白重組疫苗，根據(jù)我國有關(guān)機構(gòu)和部門的安全性評價，其安全等級為級，可望不久的將來投入生產(chǎn)。轉(zhuǎn)p53基因腺病毒：導入了腫瘤抑制基因p53 ，其產(chǎn)品為“今又生”重組人p53腺病毒注射液，已獲國家藥監(jiān)局批準生產(chǎn)，其安全等級為級。

18、第二十四張，PPT共五十四頁，創(chuàng)作于2022年6月轉(zhuǎn)基因沙門氏菌：主要用于生產(chǎn)重組病原生物抗原疫苗、抗腫瘤疫苗和口服生長抑素疫苗，經(jīng)安全性評價其安全等級為級。其安全性主要是針對沙門氏菌的擔憂，且動物實驗中過量服用可導致細胞結(jié)構(gòu)受損并引起部分動物死亡。轉(zhuǎn)基因志賀氏菌：還未獲批準進入商業(yè)化生產(chǎn)，經(jīng)安全性評價其安全等級為級。其主要的副作用是引起炎癥和發(fā)熱。轉(zhuǎn)基因單核細胞增生李斯特菌：還未獲批準進入商業(yè)化生產(chǎn)，經(jīng)安全性評價其安全等級為級。由于其宿主范圍較廣，載體安全體系復雜，存在一定安全問題，其應(yīng)用可能受限。轉(zhuǎn)基因（重組）卡介苗：已有多種疫苗進入臨床期試驗，尚未獲批進入商業(yè)化生產(chǎn)，經(jīng)安全性評價其安全等

19、級為級，具有較高的安全性。第二十五張，PPT共五十四頁，創(chuàng)作于2022年6月3 減毒病毒和細菌疫苗中存在的隱患毒力及反應(yīng)原性回復：減毒表型要穩(wěn)定并防止回復突變造成毒力回復，可用雙基因缺失突變解決；水平基因轉(zhuǎn)移：含外源基因的活載體即轉(zhuǎn)基因生物體釋放在環(huán)境中，可能引起轉(zhuǎn)基因的水平轉(zhuǎn)移。如果轉(zhuǎn)基因微生物毒株或外源基因片段帶致病基因、抗藥基因等，有可能通過突變或基因重組引起生物災害。結(jié)合應(yīng)用條件致死突變可能防止。載體的抗生素抗性基因：主要擔憂是可能引起病源菌的抗藥性或耐藥性，可通過改變選擇標記來解決問題。潛在性：指DNA疫苗注射后整合到宿主細胞基因組DNA上、或整合后引起宿主基因失活、或引起細胞癌變的

20、可能性。第二十六張，PPT共五十四頁，創(chuàng)作于2022年6月四、動物用轉(zhuǎn)基因微生物產(chǎn)品的安全性評價1 動物轉(zhuǎn)基因微生物產(chǎn)品安全性評價的內(nèi)容轉(zhuǎn)基因微生物產(chǎn)品的穩(wěn)定性；生產(chǎn)、加工活動對轉(zhuǎn)基因微生物安全性的影響； 分為三個類型： 類型1-增加轉(zhuǎn)基因微生物的安全性 類型2-不影響轉(zhuǎn)基因微生物的安全性 類型3-降低轉(zhuǎn)基因微生物的安全性轉(zhuǎn)基因微生物產(chǎn)品與轉(zhuǎn)基因微生物在環(huán)境安全性方面的差異；轉(zhuǎn)基因微生物產(chǎn)品與轉(zhuǎn)基因微生物在對人類健康影響方面的差異。參照農(nóng)業(yè)轉(zhuǎn)基因生物安全評價管理辦法第十四條有關(guān)標準，確定轉(zhuǎn)基因微生物產(chǎn)品安全等級。第二十七張，PPT共五十四頁，創(chuàng)作于2022年6月2 幾類動物用轉(zhuǎn)基因微生物產(chǎn)品的

21、安全性評價轉(zhuǎn)基因酵母菌產(chǎn)品：從其濾液或菌體回收產(chǎn)品；生產(chǎn)和加工活動對轉(zhuǎn)基因生物影響類型為類型2；轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品對人畜和環(huán)境具有較高的安全性；因此，轉(zhuǎn)基因酵母菌產(chǎn)品的安全等級為級。轉(zhuǎn)基因大腸桿菌產(chǎn)品：產(chǎn)品純度高、穩(wěn)定性強、安全性好，生產(chǎn)和加工活動對轉(zhuǎn)基因生物影響為類型2，因此轉(zhuǎn)基因大腸桿菌產(chǎn)品的安全等級為級。轉(zhuǎn)基因病毒產(chǎn)品：轉(zhuǎn)基因表達產(chǎn)物存在于細胞內(nèi)或其裂解物中，通過收獲細胞培養(yǎng)物制備相關(guān)產(chǎn)品(如液體疫苗或凍干疫苗)，生產(chǎn)過程在封閉環(huán)境中進行，生產(chǎn)、加工活動對轉(zhuǎn)基因生物影響為類型2，轉(zhuǎn)基因病毒產(chǎn)品安全等級等同于重組病毒。第二十八張，PPT共五十四頁，創(chuàng)作于2022年6月減毒菌的轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品： 主要是活

22、疫苗產(chǎn)品，通過轉(zhuǎn)基因減毒菌的培養(yǎng)、收集培養(yǎng)物、離心收集菌體、加入保護劑、轉(zhuǎn)入西林瓶、制備液體疫苗或凍干疫苗； 生產(chǎn)過程嚴格GMP要求組織生產(chǎn)； 產(chǎn)品穩(wěn)定性好、加入保護劑安全有效，沒有引入有害物質(zhì)； 生產(chǎn)和加工活動對轉(zhuǎn)基因生物影響類型為類型2； 因此轉(zhuǎn)基因活菌產(chǎn)品的安全性等同于轉(zhuǎn)基因的減毒菌株。 第二十九張，PPT共五十四頁，創(chuàng)作于2022年6月第三節(jié) 植物用轉(zhuǎn)基因微生物安全性評價一、受體微生物的安全性評價1 評價的主要內(nèi)容受體微生物的背景資料受體微生物的生物學特性受體微生物的生態(tài)環(huán)境受體微生物的遺傳變異 根據(jù)農(nóng)業(yè)轉(zhuǎn)基因生物安全評價管理辦法附錄中規(guī)定的評價方法和依據(jù)，分析植物用轉(zhuǎn)基因微生物可能對

23、人畜和生態(tài)環(huán)境可能存在的危害和潛在的危險程度，為采取安全管理措施和防控潛在危害提供科學依據(jù)。第三十張，PPT共五十四頁，創(chuàng)作于2022年6月2 主要受體微生物的安全性評價桿狀病毒的安全性評價： 被開發(fā)為生物殺蟲劑的桿狀病毒是核型多角體病毒NPV和顆粒體病毒CV，專性感染節(jié)肢動物，昆蟲是其自然宿主，每種桿狀病毒能感染一種或幾種昆蟲。 大量試驗表明，桿狀病毒對動植物和人類是安全的，NPV在田間施用不會引起環(huán)境污染，用于生物防治的桿狀病毒制劑對有益昆蟲也是安全的。 桿狀病毒的安全性已得到 公認，根據(jù)農(nóng)業(yè)轉(zhuǎn)基因 生物安全評價管理辦法 第十一條的規(guī)定，確定桿 狀病毒的安全等級為 I 級。第三十一張，PP

24、T共五十四頁，創(chuàng)作于2022年6月第三十二張，PPT共五十四頁，創(chuàng)作于2022年6月熒光假單孢菌的安全性評價 為好氧的革蘭氏陰性桿菌或球桿菌，是土壤和水體微生態(tài)系統(tǒng)的重要組成成分。 是根際促生菌，通過其產(chǎn)生的多種次生代謝物和在根際定殖防治多種植物病害。 作為轉(zhuǎn)基因受體菌株是從自然環(huán)境中分離的生防菌，具有良好的安全性，尚未發(fā)現(xiàn)對人體健康和生態(tài)環(huán)境的危害，對多種植物病原菌有較好的拮抗作用。 根據(jù)農(nóng)業(yè)轉(zhuǎn)基因生物安全評價管理辦法第十一條的規(guī)定，確定桿狀病毒的安全等級為 I 級第三十三張，PPT共五十四頁，創(chuàng)作于2022年6月第三十四張，PPT共五十四頁，創(chuàng)作于2022年6月枯草芽孢桿菌的安全性評價 枯

25、草芽孢桿菌為嗜溫性好氧產(chǎn)芽孢的革蘭氏陽性桿狀細菌，在自然界中廣泛存在，是植物體內(nèi)常見的內(nèi)生細菌。 枯草芽孢桿菌對人畜無害，對環(huán)境無污染，能產(chǎn)生多種抗菌素和酶，具有廣譜抗菌活性和極強的抗逆能力，經(jīng)多種農(nóng)作物試驗對多種病害表現(xiàn)出良好的防治效果。 枯草芽孢桿菌制劑1988年已作為農(nóng)藥登記，國內(nèi)外已有多種枯草芽孢桿菌殺菌劑投入實際應(yīng)用。 根據(jù)農(nóng)業(yè)轉(zhuǎn)基因生物安全評價管理辦法第十一條的規(guī)定，確定桿狀病毒的安全等級為 I 級。第三十五張，PPT共五十四頁，創(chuàng)作于2022年6月第三十六張，PPT共五十四頁，創(chuàng)作于2022年6月木霉的安全性評價 是自然界廣泛存在的天然生防菌，用于防治多種植物真菌性病害，其活菌制

26、劑無毒、無污染、無殘毒，不傷害土壤中其他有益微生物。 對動物和環(huán)境無害，不影響土壤的微生態(tài)循環(huán)。 根據(jù)農(nóng)業(yè)轉(zhuǎn)基因生物安全評價管理辦法第十一條的規(guī)定，確定桿狀病毒的安全等級為 I 級。聯(lián)合固氮菌的安全性評價 定植于根表或根際，能侵入根的皮層形成共生關(guān)系，有固氮作用，促進根系生長，增加產(chǎn)量。 根據(jù)農(nóng)業(yè)轉(zhuǎn)基因生物安全評價管理辦法第十一條的規(guī)定，確定桿狀病毒的安全等級為 I 級。第三十七張，PPT共五十四頁，創(chuàng)作于2022年6月重組根瘤菌的安全性評價 為一類革蘭氏陰性好氧細菌，其固氮作用成為農(nóng)業(yè)的主要氮源供應(yīng)，根瘤菌劑已在世界范圍內(nèi)得到推廣和普及。 根據(jù)農(nóng)業(yè)轉(zhuǎn)基因生物安全評價管理辦法第十一條的規(guī)定，確

27、定重組根瘤菌的安全等級為 I 級蘇云金芽孢桿菌的安全性評價 為革蘭氏陽性的土壤細菌，可在菌體一端形成內(nèi)生芽孢而另一端同時形成伴孢晶體，對20多種重要農(nóng)作物害蟲有顯著防治效果。 對人畜無害，對環(huán)境安全，根據(jù)農(nóng)業(yè)轉(zhuǎn)基因生物安全評價管理辦法第十一條的規(guī)定，確定桿狀病毒的安全等級為 I 級。第三十八張，PPT共五十四頁，創(chuàng)作于2022年6月二、基因操作的安全性評價對植物用轉(zhuǎn)基因微生物進行安全性評價時，主要考慮以下幾方面內(nèi)容： -植物用轉(zhuǎn)基因微生物中引入或修飾性狀和特征； -實際插入或刪除序列的資料； -載體的名稱和來源；載體特性和安全性； -載體插入?yún)^(qū)域各片段的資料； -基因操作方法；重組DNA分子的

28、結(jié)構(gòu)、復制特性 和安全性。 -目的基因的生存前景和表達的穩(wěn)定定性?；虿僮鲗κ荏w生物安全性影響分為3種類型第三十九張，PPT共五十四頁，創(chuàng)作于2022年6月1 桿狀病毒基因操作的安全性評價針對野生型桿狀病毒殺蟲速度相對較慢、寄主范圍較窄的缺陷，對其基因操作主要包括： -缺失病毒非必需基因(無關(guān)復制)增加殺蟲效果； -插入外源基因提高殺蟲速度, 包括昆蟲激素基因、昆蟲毒素基因、植物蛋白酶抑制基因、昆蟲病毒增強蛋白(增強病毒對幼蟲的感染力) 基因。表達系統(tǒng)常用啟動子是桿狀病毒本身的啟動子，也可是組成型啟動子hsp70或其他啟動子。由于插入的外源基因均是針對昆蟲，對人畜和環(huán)境無害，基因操作對受體生物

29、安全性影響定為類型2，即不影響安全性。第四十張，PPT共五十四頁，創(chuàng)作于2022年6月2 熒光假單孢菌基因操作的安全性評價對熒光假單孢菌的基因操作主要包括： 轉(zhuǎn)入Bt殺蟲基因形成殺蟲防病雙價基因工程菌； 使用質(zhì)粒載體和非抗生選擇標志，完全性較高，但遺傳穩(wěn)定性較低，易在傳代中丟失； 或者使用染色體整合的載體將目的基因整合到細菌染色體中，達到穩(wěn)定遺傳。 轉(zhuǎn)入的Bt基因的殺蟲目標為農(nóng)業(yè)上的害蟲，對人畜無害，也不產(chǎn)生環(huán)境污染。因此轉(zhuǎn)基因操作對假單孢桿菌安全性的影響定為類型2，即不影響受體生物的安全性。第四十一張，PPT共五十四頁，創(chuàng)作于2022年6月3 枯草芽孢桿菌基因操作的安全性評價目前對枯草芽孢桿

30、菌基因操作主要是導入Bt殺蟲基因，使新構(gòu)建工程菌株具有殺蟲防病的作用。新構(gòu)建枯草芽孢桿菌工程菌中采用的載體有質(zhì)粒載體和染色體整合載體，安全性較高。對人畜無害，其基因操作對安全性影響為類型2。4 木霉基因操作的安全性目前對木霉基因操作主工是導入外源基因(Bt殺蟲基因、幾丁質(zhì)酶基因、隱地蛋白基因)提高抗菌活性或構(gòu)建殺蟲防病工程菌。轉(zhuǎn)基因方法有PEG-CaCl2介導法和根癌農(nóng)桿菌介導法，有潮霉素抗性選擇標記。轉(zhuǎn)入基因?qū)θ诵鬅o害，基因操作安全性為類型2。第四十二張，PPT共五十四頁，創(chuàng)作于2022年6月5 聯(lián)合固氮菌基因操作的安全性評價主要轉(zhuǎn)入對固氮有正調(diào)控作用的 nifA、hup、ntrc 基因以提

31、高固氮活性，或構(gòu)建耐銨固氮工程菌。采用載體為質(zhì)粒載體或轉(zhuǎn)座子載體，安全性較高。所有目的基因均來自固氮菌，對人畜無害，對環(huán)境安全，故對固氮菌基因操作安全性定為類型2。6 重組根瘤菌基因操作的安全性評價轉(zhuǎn)入正調(diào)節(jié)基因 nifA 提高根瘤菌固氮酶活性，或轉(zhuǎn)入四碳二羧酸系統(tǒng)的 dct 基因提高固氮效率。采用載體為Tn5 轉(zhuǎn)座子載體，可將攜帶的外源基因插入細菌基因組DNA中。外源基因和載體對人畜無害，對環(huán)境安全，故基因操作的安全性為類型2。第四十三張，PPT共五十四頁，創(chuàng)作于2022年6月7 蘇云金芽孢桿菌基因操作的安全性評價基因操作的目的是拓寬殺蟲活性譜、提高殺蟲效果、延緩昆蟲對毒蛋白產(chǎn)生抗性。轉(zhuǎn)入的

32、基因主要有：提高抗蟲活性的新殺蟲基因CryIAc、增加抗蟲譜的Cry3Aa基因。采用的載體為轉(zhuǎn)座子載體或去掉抗生素抗性基因的位點專一性重組質(zhì)粒載體。目的基因均來自天然菌株，可提高工程菌的殺蟲活性和擴大抗蟲譜，根據(jù)農(nóng)業(yè)轉(zhuǎn)基因生物安全評價管理辦法第十二條確定蘇云金芽孢桿菌的相關(guān)基因操作為類型2，即基因操作不影響受體菌的安全性。第四十四張，PPT共五十四頁，創(chuàng)作于2022年6月三、植物用轉(zhuǎn)基因微生物的安全性評價植物用轉(zhuǎn)基因微生物的安全性評價，主要考慮以下幾個方面：與受體微生物相比，其定殖、存活、擴展、致病性、毒性、遺傳變異等方面的能力是否改變；與受體微生物相比，其與植物、動物、人類或與其他微生物的生

33、態(tài)關(guān)系是否發(fā)生改變；與人畜接觸的可能性及危險性；與同用途的其他生物農(nóng)藥、其他生物肥料相比較的安全性；對應(yīng)用范圍內(nèi)的生態(tài)環(huán)境的影響及潛在危險性；對靶標生物或非靶標生物的有益性或有害性。第四十五張，PPT共五十四頁，創(chuàng)作于2022年6月1 轉(zhuǎn)基因桿狀病毒的安全性評價已有實驗表明，轉(zhuǎn)基因桿狀病毒對非靶標鱗翅目昆蟲和非靶標鱗翅目節(jié)肢動物是安全的通過動物注射和皮膚接觸試驗，證明其對哺乳動物是安全的。不能在細胞內(nèi)復制，僅短期表達。重組病毒殺蟲劑對捕食天敵的影響與野生病毒基本相同，對捕食天敵個體發(fā)育與種群特征的影響很小，通過捕食天敵而獲得的擴散力很有限。病毒DNA不存在于寄生性天敵的組織中。在生態(tài)效應(yīng)方面，

34、重組病毒比野生病毒的適應(yīng)性較低，對環(huán)境影響也低，比野生病毒危險性低。重組病毒具有可靠的安全性，安全等級為等級I。第四十六張，PPT共五十四頁，創(chuàng)作于2022年6月2 轉(zhuǎn)基因熒光假單孢菌的安全性評價土壤跟蹤監(jiān)測未發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)基因熒光假單孢菌對土壤細菌群落組成和結(jié)構(gòu)產(chǎn)生可檢測的影響。轉(zhuǎn)三價Bt-Cry基因的熒光假單孢菌經(jīng)溫室和田間釋放證明對人畜安全無毒，安全等級為等級I 。北京和江蘇連云港對轉(zhuǎn)基因熒光假單孢菌IPP202和BioP8菌株的田間試驗表明，沒有在土壤中殘留和擴散，對土壤中天然存在芽孢桿菌數(shù)量動態(tài)消長沒有什么影響，對田間節(jié)肢動物天敵的群落結(jié)構(gòu)和多樣性沒有影響。在自然生態(tài)環(huán)境中，工程菌株競爭力弱

35、于天然菌株，具有良好的安全性，受體菌為天然生防菌。因此轉(zhuǎn)基因熒光假單孢菌的安全等級為等級I。第四十七張，PPT共五十四頁，創(chuàng)作于2022年6月3 轉(zhuǎn)基因枯草芽孢菌的安全性評價日本SDS公司開發(fā)的枯草芽孢桿菌殺菌劑對蔬菜的灰霉病和白粉病有實用價值，已獲準農(nóng)藥登記。通過對大鼠給藥實驗證明無不良影響，對魚類、鳥類、淡水無脊椎動物、昆蟲、植物、土壤微生物均無不良影響。證明重組的工程菌安全性高。對人畜無害，對環(huán)境安全，其安全等級為等級I。4 轉(zhuǎn)基因木霉菌的安全性評價轉(zhuǎn)基因木霉菌的安全性高，受體菌為從自然界分離的生防菌；目的基因為殺蟲蛋白基因和抗真菌蛋白基因，對環(huán)境無害。因此轉(zhuǎn)基因木霉菌的安全等級為等級I。第四十八張，PPT共五十四頁，創(chuàng)作于2022年6月5 轉(zhuǎn)基因聯(lián)合固氮菌和根瘤菌的安全性評價重組固氮菌的受體菌為天然的固氮菌，對人畜無害，目的基因為固氮正調(diào)控基因。受體生物安全等級I，基因操作影響類型II。確定其安全等級為等級I。6 轉(zhuǎn)基因蘇云金芽孢菌的安全性評價基因工程菌BMB696B的外源基因為Bt殺蟲基因，受體菌為自然界分離的高毒力野生菌株；動物實驗表明沒致敏性，對人畜和環(huán)境無害?；蚬こ叹鶺