《微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)》課件實(shí)驗(yàn)七微生物的紫外誘變

1、實(shí)驗(yàn)七微生物的紫外誘變一、目的要求掌握紫外線誘發(fā)微生物突變的基本原理。掌握選育高產(chǎn)突變型菌株的方法。 二、基本原理紫外線是一種最常用的物理誘變因素。它的主要作用是使DNA雙鏈之間或同一條鏈上兩個(gè)相鄰的胸腺嘧啶形成二聚體，阻礙雙鏈的分開(kāi)、復(fù)制和堿基的正常配對(duì)，從而引起突變。紫外線照射引起的DNA損傷，可由光復(fù)活酶的作用進(jìn)行修復(fù)，使胸腺嘧啶二聚體解開(kāi)恢復(fù)原狀。為了避免光復(fù)活，用紫外線照射處理時(shí)以及處理后的操作應(yīng)在紅光下進(jìn)行，并將照射處理后的微生物放在暗處培養(yǎng)。三、實(shí)驗(yàn)器材菌株枯草芽孢桿菌培養(yǎng)基淀粉培養(yǎng)基溶液或試劑碘液，無(wú)菌生理鹽水，盛4.5ml無(wú)菌水試管儀器或其他用具1ml無(wú)菌吸管，玻璃涂布棒，血

2、細(xì)胞計(jì)數(shù)板，顯微鏡，紫外燈（15W），磁力攪拌器，臺(tái)式離心機(jī)，振蕩混合器等。四、操作步驟制備菌懸液取枯草芽孢桿菌48h斜面培養(yǎng)物4-5支用10ml無(wú)菌生理鹽水洗下菌苔倒入無(wú)菌大試管振蕩30s，打散菌塊3000r/min離心10min棄上清液用無(wú)菌生理鹽水洗滌菌體2-3次制成菌懸液用顯微鏡直接計(jì)數(shù)法調(diào)整細(xì)胞濃度108個(gè)/ml。（老師完成）制作淀粉瓊脂培養(yǎng)基平板紫外線處理打開(kāi)紫外燈預(yù)熱20min。各取3ml菌懸液，分別加入2套6cm無(wú)菌平皿中，并放入一根無(wú)菌磁力棒。將平皿置于磁力攪拌器上，打開(kāi)皿蓋，在距離30cm，15W的紫外燈下分別攪拌照射1min和3min。蓋上皿蓋，關(guān)閉紫外燈。稀釋：把照射過(guò)

3、的菌懸液用無(wú)菌水稀釋成10-1-10-6；涂平板：取 10-4、10-5、10-6稀釋液和未經(jīng)照射的稀釋液（對(duì)照）各0.1ml涂平板，重復(fù)三個(gè)平板；培養(yǎng)：用黑布或紙包好，37培養(yǎng)48h。分別計(jì)算紫外線處理1min和3min后的存活率和致死率存活率（%）=致死率（%）=觀察誘變效應(yīng)選取cfu數(shù)在5-6個(gè)左右的處理后涂布的平板觀察誘變效應(yīng)。分別向平板內(nèi)加碘液數(shù)滴，在菌落周?chē)霈F(xiàn)透明圈。分別測(cè)量透明圈直徑與菌落直徑并計(jì)算其比值（HC比值）。選取HC比值大的菌落轉(zhuǎn)接到試管斜面上培養(yǎng)，可用于復(fù)篩。五、注意事項(xiàng)紫外線照射計(jì)時(shí)從開(kāi)蓋起，加蓋止；先開(kāi)磁力攪拌器，再開(kāi)蓋照射，使菌懸液中的細(xì)胞接受均等照射；從紫外線照射處理開(kāi)始，直到涂布完平板的所有操作步驟都需在紅光下進(jìn)行。六、實(shí)驗(yàn)結(jié)果觀察誘變效應(yīng)，計(jì)算存活率、致死率、HC比值。結(jié)果填入1.(1)(2)。稀釋倍數(shù)平均數(shù)/皿處理時(shí)間/min存活率/%致死率/%0（對(duì)照）六、實(shí)驗(yàn)結(jié)果菌落HC比值誘變劑UV(1min)UV(3min)對(duì)照七、思考題.(2)、(3)用紫外線進(jìn)行誘變時(shí)，為什么要打開(kāi)皿蓋？為什么要在紅光下操作，暗環(huán)境下培養(yǎng)？分析你的實(shí)驗(yàn)