肺動脈帶瓣管道動物試驗方案 -20150619(共13頁)

1、武漢亞心醫(yī)療科技有限公司 動物試驗方案 編號：PC-05001 版本：A第 PAGE 13 頁 共 NUMPAGES 13 頁 肺動脈帶瓣管道(gundo)動物(dngw)試驗方案(fng n)委托單位：武漢亞心醫(yī)療科技有限公司研究單位：湖北省疾病預防控制中心課題負責人： 吳忠仕一、試驗(shyn)方案(fng n)目錄(ml) TOC o 1-3 h z u HYPERLINK l _Toc417310647 一、試驗方案目錄2 HYPERLINK l _Toc417310648 二、GLP符合性聲明3 HYPERLINK l _Toc417310649 三、研究相關資料4 HYPERLIN

2、K l _Toc417310650 1委托單位信息4 HYPERLINK l _Toc417310651 2研究機構信息4 HYPERLINK l _Toc417310651 3試驗背景4 HYPERLINK l _Toc417310655 四、試驗目的5 HYPERLINK l _Toc417310656 1.評價肺動脈帶瓣管道的功能作用5 HYPERLINK l _Toc417310657 2.評價肺動脈帶瓣管道的安全性5五、 HYPERLINK l _Toc417310660 試驗器械5 HYPERLINK l _Toc417310661 1供試品信息5 HYPERLINK l _Toc

3、417310664 2手術器械6六、試驗動物 HYPERLINK l _Toc417310660 6 HYPERLINK l _Toc417310665 1試驗系統(tǒng)及選擇理由6 HYPERLINK l _Toc417310666 2試驗動物6 HYPERLINK l _Toc417310667 3試驗動物的識別方法7 HYPERLINK l _Toc417310668 4試驗動物的飼養(yǎng)與管理及其環(huán)境條件7 HYPERLINK l _Toc417310670 七、試驗設計8 HYPERLINK l _Toc417310665 1試驗設計的依據8 HYPERLINK l _Toc417310666

4、 2試驗觀察指標和觀察周期8 HYPERLINK l _Toc417310667 3觀察指標的檢測方法8 HYPERLINK l _Toc417310675 八、手術9 HYPERLINK l _Toc417310665 1樣品預處理9 HYPERLINK l _Toc417310666 2手術操作10 HYPERLINK l _Toc417310666 3術后護理10 HYPERLINK l _Toc417310676 九、術后觀察11 HYPERLINK l _Toc417310665 1試驗數據的收集11 HYPERLINK l _Toc417310666 2數據處理11 HYPERLI

5、NK l _Toc417310666 3試驗相關記錄表12 HYPERLINK l _Toc417310678 十、 動物福利和無痛處死12 HYPERLINK l _Toc417310678 十一、 試驗方案修改和偏離12二、GLP符合(fh)性聲明本研究嚴格(yng)按照： 中華人民共和國國家(guji)食品藥品監(jiān)督管理局：醫(yī)療器械臨床試驗規(guī)定 （局令第5號，2004年4月1日實施）中華人民共和國國家食品藥品監(jiān)督管理局：醫(yī)療器械注冊管理辦法 （局令第4號，2014年10月1日實施）中華人民共和國國家食品藥品監(jiān)督管理局：藥物非臨床研究質量管理規(guī)范認證管理辦法 （局令第2 號，2003年9月1

6、日實施） Organization for Economic Co-operation and Development：OECD Principles on Good Laboratory Practice（1998年1月實施）研究地點為湖北省疾病預防控制中心，對于研究過程中所有偏離試驗方案和SOP的異常情況在“試驗方案和SOPs的偏離”項下進行了說明。此研究結果雖然在非GLP條件下下完成，但完全嚴格按照中華人民共和國國家食品藥品監(jiān)督管理局藥物非臨床研究質量管理規(guī)范（局令第2 號，2003年9月實施）執(zhí)行。試驗方案科學、可行，在執(zhí)行過程中嚴格按照SOP操作。課題負責人簽字：日 期：三、研究相關

7、資料1委托(witu)單位信息名 稱：武漢亞心醫(yī)療(ylio)科技有限公司地 址：武漢市東湖高新區(qū)九龍(ji ln)生物產業(yè)基地生物醫(yī)藥產業(yè)園加速器二期A8/7-2棟2樓聯系人：王有然電 話 真-mail：wyr 2研究機構信息名 稱：湖北省疾病預防控制中心（湖北省食品藥品安全評價中心）地 址： 湖北省武漢市洪山區(qū)卓刀泉北路6號聯系人：唐利軍電 話 真-mail：TLijun2003513、試驗背景我國現存先天性心臟病患兒約150萬，每年新出生近20萬，先心病發(fā)病率居出生缺陷的首位。

8、其中復雜先心病占30%左右，約有5-10%的病兒需要應用帶瓣管道重建右心室流出道才能獲得根治，如肺動脈閉鎖、共同動脈干、法洛四聯癥、右室雙出口、大動脈轉位等。對于這些復雜先天性心臟病的患兒，應用帶瓣管道重建右室流出道能極大提高這類先心病外科手術療效及術后的長期生活質量。目前，臨床應用的帶瓣管道有晶體保存的同種主動脈或肺動脈管道和經處理的豬主動脈或肺動脈異種管道。應用同種管道為多數外科醫(yī)生首選，但同種帶瓣管道取材困難，即使發(fā)達國家也存在來源不足的問題。受傳統(tǒng)觀念影響，亞洲人包括國人在內極少人愿死后捐獻器官，同種帶瓣管道的獲取更加困難，尤其適用于小兒的同種帶瓣管道更少，根本無法滿足臨床需要。豬主動

9、脈或肺動脈管道因其易鈣化、耐久性差等原因也并非理想材料。因此，國內外學者都在致力于尋找理想的帶瓣管道材料。近年來牛頸靜脈帶瓣管道被認為是有希望成為最佳肺動脈重建的替代材料。2002年美國食品藥品管理局通過了Medtronic公司研制的Contegra牛頸靜脈帶瓣管道在臨床使用。我國目前尚未有牛頸靜脈帶瓣管道系統(tǒng)研究和其產品問世。國外及本研究團隊的研究表明牛頸靜脈帶瓣管道具備天然的類似于人體的肺動脈瓣膜，在右心系統(tǒng)具備良好的抗返流性能；牛頸靜脈管徑范圍變異大，便于臨床不同體重病人手術需要；取材、縫合方便等優(yōu)點。但如同其他帶瓣管道一樣同樣存在遠期鈣化問題而影響其耐久性。如何改善牛頸靜脈帶瓣管道等生

10、物材料的抗鈣化性能是國內外學者研究的熱點問題。近年來，受組織(zzh)工程學技術的啟發(fā)，武漢亞心醫(yī)療科技(kj)有限公司的研究團隊發(fā)明了去細胞結合光氧化技術(jsh)，并用于處理制備牛頸靜脈帶瓣管道。研究結果表明經去細胞結合光氧化技術處理的具有良好的生物相容性及血流動力學特征。同時，我們也初步完成了項目產品理化性能、生物學性能的評價，效果良好，進而研發(fā)了本產品-肺動脈帶瓣管道。本研究的目的是評價武漢亞心醫(yī)療科技有限公司生產的肺動脈帶瓣管道的安全性和可操作性。該研究是在試驗用犬模型中進行肺動脈管道的原位置換，模擬的肺動脈的生理功能。本研究共設30天、90天、180天三個考察時間點。通過不同觀察周

11、期全面評價肺動脈帶瓣管道在動物體內的功能作用和安全性。因本產品適應癥為先天性肺動脈發(fā)育缺陷的患者，故針對本次動物試驗無法模擬建立相應病癥動物模型。產品的有效性可間接通過管道植入后的功能代償來評價。管道的安全性除手術因素外主要通過產品的生物相容性來評價。本產品系接觸血液和組織器官的長期植入物，故生物相容性應從血液相容性和組織相容性兩方面進行評價。評價血液相容性的試驗包括五個方面：血栓形成方面、凝血方面、血小板方面、血液其他方面、免疫學方面。作為與血液接觸的長期植入物，參照GB/T16886.4/6.1.12附表2產品本試驗只需完成血栓和血液學試驗，而血液學只需做溶血試驗。組織相容性評價參照GB/

12、T16886.6/3.4.3主要觀察植入物是否引起周圍組織的免疫排斥和組織炎性反應指標。四、試驗目的1評價(pngji)肺動脈帶瓣管道(gundo)的功能作用(zuyng)（1）管道內的血流動力學性能（血液流速、返流情況、跨瓣壓差）。（2）管道、瓣膜的結構變化（管道有無狹窄、瓣膜是否完好）。2評價肺動脈帶瓣管道的安全性（1）不良事件：所有動物的死亡、感染、行為異常情況。（2）植入物周圍的炎癥反應：管道和周圍組織有無粘連、感染、壞死；白細胞、淋巴細胞、中性粒細胞等數量；管道及周圍組織的病理改變。（3）血栓形成：探查主肺動脈、左右肺動脈及分支、主要臟器內是否有血栓形成。（4）溶血反應：觀察紅細胞形

13、態(tài)、血紅蛋白數量變化等。（5）器官病變：心臟、肺、 肝、腎、脾等形態(tài)學改變。（6）管道及瓣膜的鈣化。五、試驗器械1供試品信息名稱：肺動脈帶瓣管道縮寫名：BJVC批號：201505001保存條件：28有效期：1年（失效日期：2016-5-23）規(guī)格數量詳見附表1：表1 試驗器械明細名稱規(guī)格（mm）預備數量植入數量剩余數量剩余品（序列號）處理方法肺動脈帶瓣管道13141516171819202手術器械麻醉機、手術臺及器械(qxi)包、呼吸機、超聲影像(yn xin)等術中監(jiān)測(jin c)設備。六、試驗動物1試驗系統(tǒng)及選擇理由試驗用犬是醫(yī)療器械評價動物試驗研究中公認的標準動物之一。同類的研究結果也

14、表明本種屬動物適合于本供試品的動物試驗研究。委托方也同意使用該種動物進行肺動脈帶瓣管道植入動物試驗。2.試驗動物本次試驗動物選用同一品系成年健康雄性比格犬，具體情況詳見表2。試驗動物由“湖北安陸瑞科森試驗動物有限公司”飼養(yǎng)并提,。該公司成立于2002年，具有試驗動物的相關資質（動物防疫條件合格證、試驗動物生產許可證、動物使用許可證、動物檢測報告、環(huán)境檢測報告）等，且能對試驗動物進行追溯。表2 試驗動物基本情況試驗動物的種類試驗用犬品系比格犬級別普通級動物數量10只動物性別雄性動物月齡142個月體重102Kg動物許可許可證號：鑒別方法項圈標記選擇標準武漢市地方標準，DB-11（由執(zhí)業(yè)獸醫(yī)師和動物

15、試驗技術人員根據要求進行體檢及輔助診斷測試后，批準進行試驗。）動物檢疫（檢疫合格證由動物衛(wèi)生監(jiān)督部門(bmn)出具），符合國家動物檢疫管理(gunl)辦法要求的試驗(shyn)用犬，所有動物在試驗開始時均是初次用于動物試驗。檢疫標準操作規(guī)程，所有動物在手術前經過隔離檢疫。通過隔離檢疫合格的試驗動物才被納入到本研究中。3.試驗動物的識別方法動物到達后，按研究機構的要求接收。按相關文件規(guī)定給動物自D01至D10進行隨機編號，每只動物單獨使用一個試驗動物號。動物及籠卡上標明動物號。原始資料中使用試驗動物號來識別。試驗前檢疫，統(tǒng)一使用同色籠卡，并注明試驗編號，以及個體動物編號等信息。表3 試驗動物動物

16、編號是否檢疫年齡（月）體重(Kg)植入管道規(guī)格（mm）植入產品序列號存活時間(天)不良事件D01D104試驗動物的飼養(yǎng)管理及其環(huán)境條件飼養(yǎng)于湖北省食品藥品安全評價中心動物房內，室溫控制在20-25，濕度40-70%，12小時照明，12小時黑暗。每籠1頭，飼養(yǎng)籠具為鍍鋅鋼管籠。每天沖洗清潔籠子2次。飼喂湖北省食品藥品安全評價中心提供的標準化飼料，飼料合格證批準號： ，飼料合格證號： 。每只每天分兩次供給其體重5%的飼料（免高鈣食物），自由攝食，自由飲水。所有(suyu)動物將按要求(yoqi)檢疫(jiny)觀察期為7天，在此時間內，觀察動物的活動、飲食等表現，動物在使用前需經臨床獸醫(yī)檢查合格并

17、出具檢疫報告。發(fā)現異常動物在臨床獸醫(yī)和專題負責人指導下妥善處理。七、試驗設計1試驗設計的依據（1）委托單位提供的資料肺動脈帶瓣管道動物試驗方案動物試驗術前、術中及術后檢查和監(jiān)護等相關記錄表格（2）植入性醫(yī)療器械標準、指導原則及文獻GB16886.1-2011，醫(yī)療器械的生物學評價，風險管理過程中的評價與試驗；GB16886.2-2011，醫(yī)療器械的生物學評價，動物保護要求；GB16886.4-2003，醫(yī)療器械的生物學評價，與血液互相作用試驗選擇；GB16886.6-1997，醫(yī)療器械的生物學評價，植入后局部反應試驗；GB12279-2008，心血管植入物-人工心臟瓣膜；YY0500-2004

18、，心血管植入物-人工血管；（3）文獻1.光氧化處理牛頸靜脈帶瓣管道重建肺動脈與右心室連接 HYPERLINK /QK/98074X/200604/ 中國動脈硬化雜志 2006年 第4期 作者： HYPERLINK /main/search.aspx?w=%e5%86%af%e8%80%80%e5%85%89 馮耀光 HYPERLINK /main/search.aspx?w=%e8%83%a1%e5%bb%ba%e5%9b%bd 胡建國 HYPERLINK /main/search.aspx?w=%e5%90%b4%e5%bf%a0%e4%bb%95 吳忠仕 HYPERLINK /main/s

19、earch.aspx?w=%e8%83%a1%e9%93%81%e8%be%89 胡鐵輝 HYPERLINK /main/search.aspx?w=%e5%91%a8%e6%96%b0%e6%b0%91 周新民2. HYPERLINK /QK/90030X/200404/10633990.html t _blank 帶瓣牛頸靜脈作為右室肺動脈連接管道的研究 HYPERLINK /QK/90030X/200404/ t _blank 中華胸心血管外科雜志 2004年 第4期 作者： HYPERLINK /main/search.aspx?w=%e6%9d%8e%e8%83%9c%e5%88%a

20、9 李勝利 HYPERLINK /main/search.aspx?w=%e8%83%a1%e7%9b%9b%e5%af%bf 胡盛壽3. HYPERLINK /QK/98531X/200607/21623789.html t _blank 牛頸靜脈帶瓣管道重建犬右室-肺動脈連接后的鈣化研究 HYPERLINK /QK/98531X/200607/ t _blank 中國現代醫(yī)學雜志 2006年 第7期 作者： HYPERLINK /main/search.aspx?w=%e6%9d%a8%e6%99%93%e6%b6%b5 楊曉涵 HYPERLINK /main/search.aspx?w=

21、%e8%83%a1%e9%93%81%e8%be%89 胡鐵輝 HYPERLINK /main/search.aspx?w=%e5%90%b4%e5%bf%a0%e4%bb%95 吳忠仕 HYPERLINK /main/search.aspx?w=%e8%83%a1%e5%bb%ba%e5%9b%bd 胡建國 HYPERLINK /main/search.aspx?w=%e5%bc%a0%e7%ab%9e%e8%b6%85 張競超4. HYPERLINK /QK/98009A/201002/33066198.html t _blank 新型肺動脈帶瓣管道移植動物試驗與血流動力學評價 HYPER

22、LINK /QK/98009A/201002/ t _blank 心臟雜志 2010年 第2期 作者： HYPERLINK /main/search.aspx?w=%e6%9d%8e%e5%ad%90%e6%9e%97 李子林 HYPERLINK /main/search.aspx?w=%e5%88%98%e9%87%91%e6%88%90 劉金成 HYPERLINK /main/search.aspx?w=%e6%ae%b5%e7%bb%b4%e5%8b%8b 段維勛 HYPERLINK /main/search.aspx?w=%e6%98%93%e5%ae%9a%e5%8d%8e 易定華2

23、試驗觀察指標和觀察周期試驗的終點觀察指標為管道植入180天后的血流動力學性能(xngnng)，即管道的狹窄和瓣膜的返流情況，同時觀察管道(gundo)內血液的流速和跨瓣壓差，管道(gundo)的血液（血栓和溶血）和組織相容性（組織病理）。術后1天、3天、7天、30天、90天和180天作為觀察周期。術后30天、90天分別處死2只試驗動物，其余動物在飼養(yǎng)至180天按照第四項中的安全性和功能有效性指標要求進行相應的檢查和觀察。指標/時間1天3天7天30天90天180天傷口、行為觀察血液常規(guī)超聲病理解剖探查鈣化分析3觀察指標的檢測方法1、血流動力學的超聲檢測麻醉（3%戊巴比妥鈉，25mg/kg肌內注射

24、），剪除左胸部毛發(fā)進行心臟彩色超聲檢查。觀察并錄像記錄肺動脈的通暢情況、瓣膜活動情況、瓣膜有無血液返流并對返流進行評級（按照返流百分比），血液流速和跨瓣壓差等情況。2、生物相容性的檢測分析和病理記錄在全身麻醉狀態(tài)下，股靜脈穿刺抽血。全身肝素化（3mg/kg），肝素化目的是防止動物處死后血液凝固，與肺動脈帶瓣管道內形成的血栓相混淆。開胸，10%的氯化鉀10ml心內注射致心臟驟停，取出前期植入的肺動脈帶瓣管道。血液常規(guī)：手術前和術后各觀察周期，分別檢測試驗動物靜脈血中紅細胞形態(tài)、血紅蛋白數量，觀察是否有溶血現象發(fā)生；檢測白細胞、巨噬細胞、淋巴細胞等數量，觀察組織的炎性反應。肉眼觀察植入物周圍組織和

25、植入物-組織交界處形態(tài)學改變、粘連、纖維囊腔等，并拍照記錄。測定管道直徑，沿管道長軸縱向剪開，肉眼觀察評價肺動脈帶瓣管道中有無血栓形成并拍照記錄，稱量血栓的重量（濕重）。取植入物及周圍(zhuwi)組織制作病理切片，鏡下觀察病理學改變。組織切片制備：按照試驗周期分別通過過量(guling)麻醉處死動物。取出試驗動物肺動脈放于10%中性福爾馬林(f r m ln)中固定1014天。對植入物周圍3mm區(qū)域進行取樣，進行組織切片，石蠟包埋， H.E染色。肉眼觀察管道和瓣膜的形態(tài)變化、鈣化情況并拍照記錄。分別剪取余下管道瓣膜和管道壁組織片1x1cm，置于80烤箱 12小時烘干，原子吸收法做鈣含量測定（

26、g/干重組織）。器官剖檢。解剖心臟、肺、脾、 肝、腎等臟器，先做大體檢查，觀察有無梗死灶及異常病變。解剖肺動脈1-4級分支，以確定是否有栓塞現象。保留肺動脈帶瓣管道上及其周圍任何可疑的新生物作病理切片檢查。八、手術1.樣品預處理將樣品從離心管內取出，放入不銹鋼容器中，用0.9%氯化鈉注射液清洗3次，10min/次，500ml/次。經預處理后的肺動脈帶瓣管道可以直接用于動物試驗。2.手術操作1）備皮，麻醉，氣管插管，動靜脈穿刺，消毒，鋪巾。 2）左側第4肋間前外側切口進胸，打開心包，懸吊。 3）右心室流出道標記為右心室切口位置。 4）取肺動脈帶瓣管道，進行相應的修剪。 5）切開右心房，將肺動脈帶瓣管道一端切口與右心室切口吻合，另一端與肺動脈切口吻合。 6）結扎自身肺動脈。 7）測右心室血壓，關胸。3.術后護理術中靜脈滴注(jn mi d zh)青霉素160萬單位，術后禁食6小時(xiosh)后可由試驗動物自由(zyu)進食。術后3天內，常規(guī)肌注強效抗菌素；術后動物不用抗凝藥物；術后每天觀察動物2次，記錄其日常行為和精神狀態(tài)，觀察縫合傷口的狀況并記錄。九、數據的記錄和處理1. 試驗數據的收集試驗過程中由一名工作人員負責填寫記錄肺動脈帶瓣管道動物試驗