烏司他丁對(duì)大鼠缺血性腦水腫腦組織AQP4表達(dá)的影響

1、烏司他丁對(duì)大鼠缺血性腦水腫腦組織AQP4表達(dá)的影響汕頭大學(xué)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院 林重輝 鄭文玲 楊軍 邱文冰 黎永勝【摘要】目的：探討烏司他丁對(duì)大鼠缺血性腦水腫腦組織AQP4表達(dá)的影響及意義。方法：采用線栓法制備大鼠大腦中動(dòng)脈栓塞(MCAO)模型，隨機(jī)分為3組：對(duì)照組、治療1組、治療2組，取24 h時(shí)相點(diǎn)用免疫組化方法觀察大鼠模型缺血區(qū)AQP4的表達(dá)。結(jié)果：治療1組與對(duì)照組比較，24h后AQP4表達(dá)水平減輕(P 0.05)，治療2組與對(duì)照組相比，24h后AQP4表達(dá)水平明顯減輕 (P 0.01) 。結(jié)論：烏司他丁能通過下調(diào)腦缺血組織AQP4的表達(dá)，起到腦保護(hù)作用?！娟P(guān)鍵詞】烏司他??；水孔蛋白4；

2、腦水腫【Abstract】Objectives: To explore the influence of ulinastatin to the expression of AQP4 in rats brain tissue during ischemic encephaledema.Methods: The rats cerebral middle artery occlusion (MCAO) model was established with thread occlusion method.Rats were randomly divided into 3 groups,includin

3、g control group,treatment gruop 1 and treatment group 2.The changes in expression of AQP4 in rats model ischemic areas at 24h time point were determined by immunohistochemistry.Results:The expression of AQP4 of treatment group 1 was lower than that of control group at 24h point(P 0.05) ,while the ex

4、pression of AQP4 of treatment group 2 was obviously lower than that of control group at 24h point(P 0.01).Conclusion: Ulinastatin has protective effects to brains by downregulating the expression of AQP4 in ischemic brain tissue. 【key words】ulinastatin,aquaporins-4(AQP4),encephaledema烏司他丁(Ulinastati

5、n, )是一種存在于人尿中的胰蛋白酶抑制劑.現(xiàn)越來越廣泛地運(yùn)用于臨床，大量的研究表明提示烏司他丁具有腦保護(hù)作用，同時(shí)新近的研究也表明大劑量的烏司他丁對(duì)機(jī)體組織能起到更好的保護(hù)作用。故我們通過以下實(shí)驗(yàn)探索不同劑量烏司他丁對(duì)大鼠缺血性腦水腫腦組織的治療作用。1.材料 1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：選擇Wistar大鼠45只，性別不限，體重200-250g，將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物隨機(jī)分為3組：對(duì)照組、治療1組、治療2組、每組15只。1.2試劑和藥物：烏司他丁，由廣東天普生化醫(yī)藥股份有限公司提供 AQP4試劑盒，由武漢博士德生物工程有限公司提供2.方法2.1 實(shí)驗(yàn)方法 參照 Longa等的方法1，對(duì)照組、治療1組、治療2組均采

6、用線栓法建立大腦中動(dòng)脈阻塞( MCA0)模型，手術(shù)方法從略。 2.2 分組及給藥法 烏司他丁治療組大鼠分別于術(shù)后即刻、術(shù)后8h、16h腹腔注射烏司他丁1次，劑量分別為（II組） 1.0萬Ukg，(III組)4.0萬Ukg；對(duì)照組(I組)在相同時(shí)間點(diǎn)給予等量生理鹽水腹腔注射，三組均于術(shù)后24h處死。 2.3 指標(biāo)觀察及方法2.3.1腦組織水孔蛋白-4（AQP4）免疫組化檢測 分別取各組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物缺血腦組織后外部分作冠狀位冰凍切片(15um)，采用S-P法，選用一抗（AQP4抗體），并根據(jù)試劑盒上的步驟進(jìn)行操作，免疫組化AQP-4陽性細(xì)胞胞膜呈棕黃色。3.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 在400倍光鏡下各時(shí)相點(diǎn)各取免疫

7、組化切片5片，在同一光強(qiáng)度下隨機(jī)選擇不重疊的5個(gè)視野，細(xì)胞膜呈棕色為AQP-4免疫組化陽性，統(tǒng)計(jì)AQP-4表達(dá)陽性細(xì)胞數(shù)。數(shù)據(jù)均采用均數(shù)標(biāo)準(zhǔn)差表示，組間比較采用方差分析. P0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。3.結(jié)果： AQP4表達(dá)水平變化： AQP4主要在細(xì)胞膜中表達(dá)。治療1組與對(duì)照組比較，24h后AQP4表達(dá)水平減輕(P 0.05)，治療2組與對(duì)照組相比，24h后AQP4表達(dá)水平減輕較明顯(P 0.01) .組別例數(shù)AQP4陽性細(xì)胞數(shù)對(duì)照組1528.75.3392治療1組1525.124.7314治療2組1520.3+-2.8235討論 缺血性腦血管病率是嚴(yán)重危害人類健康的主要疾病之一，其急性期

8、病理變化主要表現(xiàn)為腦水腫，其嚴(yán)重程度和持續(xù)時(shí)間的長短對(duì)腦缺血的預(yù)后有著直接的影響。所以，使用有效藥物減輕缺血性水腫成為腦缺血急性期治療的關(guān)鍵。研究顯示在缺血性腦水腫的過程中，水孔蛋白-4（AQP4）與腦水腫關(guān)系密切234，當(dāng)使用相關(guān)藥物能使水孔蛋白的表達(dá)減低時(shí)，即能有效的減輕腦水腫的程度。烏司他丁是一種廣譜蛋白酶抑制劑 具有抗炎性介質(zhì)作用和多臟器功能保護(hù)作用5。近年來一些研究實(shí)驗(yàn)顯示烏司他丁具有良好的腦保護(hù)作用67,同時(shí)新近的臨床多學(xué)科研究也表明烏司他丁的治療效用與用藥劑量呈正比關(guān)系，即較大劑量的烏司他丁能起到更好的作用89，因不同劑量的烏司他丁在腦保護(hù)中起到的不同作用的研究及有關(guān)烏司他丁對(duì)缺

9、血性腦水腫腦組織水孔蛋白-4（AQP4）的影響的研究目前仍未見報(bào)道。故我們通過建立腦缺血?jiǎng)游锬Ｐ秃?，使用不同劑量的烏司他丁后，?duì)腦組織進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室重要免疫組化指標(biāo)水孔蛋白-4（AQP4）分析檢測，探討烏司他丁在預(yù)防及治療缺血性腦水腫方面的療效。 我們實(shí)驗(yàn)顯示：與對(duì)照組比較，使用烏司他丁的治療1組能使缺血腦組織的水孔蛋白-4（AQP4）表達(dá)下降（P 0.05）,且隨著使用烏司他丁劑量的增加，即：治療2組可使血腦組織的水孔蛋白-4（AQP4）表達(dá)相對(duì)對(duì)照組明顯減少(P 0.01)。我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示：烏司他丁能通過下調(diào)水孔蛋白的表達(dá)起到保護(hù)腦組織的作用，并且在大劑量的作用下能起到更好的效果。故我們認(rèn)

10、為在常規(guī)治療腦梗塞的基礎(chǔ)上，使用烏司他丁可以對(duì)腦梗塞后的腦水腫起到有效的輔助治療作用，從而有利病情的好轉(zhuǎn)和康復(fù)。但臨床運(yùn)用的有效性還待進(jìn)一步臨床實(shí)驗(yàn)證實(shí)。1 Longa EZ.,.Weinstein PR,Carison S,Cummins R:Reversible middle cerebral artery occlusion without craniotomy in ratsJ.Stroke,1989,20:84-91.2Taniguchi M, Yamashita T, Kumura E, Tamatani M, Kobayashi A, et al .Induction of aq

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12、rolled cortical impact injury in ratsJ. Neurosci Lett. 2002 May 17;324(2):105-8.4 Manley GT, Fujimura M, Ma T, Noshita N, Filiz F, Bollen AW, Chan P, Verkman AS. Aquaporin-4 deletion in mice reduces brain edema after acute water intoxication and ischemic strokeJ.Nat Med. 2000 Feb;6(2):159-63.5 邵明義,張良清,鄧烈華,等.烏司他丁對(duì)全身炎癥反應(yīng)綜合征的治療作用J.中國危重病急救醫(yī)學(xué),2005,17(4):228-2306 章國軍,杜杭根,殷利春等. 烏司他丁在重型顱腦損傷應(yīng)用中血漿內(nèi)皮素水平的變化. 浙江中醫(yī)學(xué)