2014版細(xì)胞毒理學(xué)實(shí)驗(yàn)二乳腺癌細(xì)胞MCF-7傳代培養(yǎng)

1、細(xì)胞毒理學(xué)實(shí)驗(yàn)乳腺癌細(xì)胞MCF-7傳代培養(yǎng)山東師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院實(shí)驗(yàn)?zāi)康恼莆諅鞔囵B(yǎng)的一般方法和步驟以及培養(yǎng)過(guò)程中的無(wú)菌操作技術(shù)。熟悉培養(yǎng)細(xì)胞的觀察方法。實(shí)驗(yàn)原理細(xì)胞在培養(yǎng)皿長(zhǎng)成致密單層后，已基本上飽和，為使細(xì)胞能繼續(xù)生長(zhǎng)，同時(shí)也將細(xì)胞數(shù)量擴(kuò)大，就必須進(jìn)行傳代（再培養(yǎng)）。傳代培養(yǎng)也是一種將細(xì)胞種保存下去的方法。同時(shí)也是利用培養(yǎng)細(xì)胞進(jìn)行各種實(shí)驗(yàn)的必經(jīng)過(guò)程。懸浮型細(xì)胞直接分皿就可以，而貼壁細(xì)胞需經(jīng)消化后才能分皿。實(shí)驗(yàn)用品儀器：培養(yǎng)箱（調(diào)整至37）、培養(yǎng)皿、超凈工作臺(tái)、倒置相差顯微鏡。材料：卵巢癌細(xì)胞HO-8910。試劑：DMEM培養(yǎng)基（含血清10%）、0.25%胰蛋白酶、75%消毒酒精。實(shí)驗(yàn)步驟

2、實(shí)驗(yàn)前將無(wú)血清培養(yǎng)基和含血清培養(yǎng)基分裝并進(jìn)行溫育（37）。以溫度計(jì)實(shí)際顯示溫度為準(zhǔn)！實(shí)驗(yàn)步驟將長(zhǎng)滿細(xì)胞的培養(yǎng)瓶中原來(lái)的培養(yǎng)液棄去。實(shí)驗(yàn)步驟用不含血清DMEM培養(yǎng)基沖洗細(xì)胞。實(shí)驗(yàn)步驟將無(wú)血清培養(yǎng)基吸出，加入0.25胰蛋白酶溶液1ml，使細(xì)胞都浸入溶液中。實(shí)驗(yàn)步驟消化30-40s后，棄去胰酶，加入含血清1640培養(yǎng)基2ml，終止消化，并充分吹打。吹打后將懸浮起來(lái)的細(xì)胞懸液取出1ml，轉(zhuǎn)移至新的培養(yǎng)皿中。實(shí)驗(yàn)步驟分別在兩皿中補(bǔ)加新的培養(yǎng)基各2ml，做好標(biāo)記，放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)。實(shí)驗(yàn)完畢，將培養(yǎng)基瓶口迅速過(guò)酒精燈火焰消毒，擰緊后，封口膜密封。拿出超凈臺(tái)，放入冰箱。實(shí)驗(yàn)后，請(qǐng)將超凈工作臺(tái)內(nèi)擦拭干凈，酒精噴灑消毒，并將酒精擦干凈，打開紫外燈滅菌。各個(gè)實(shí)驗(yàn)小組的同學(xué)負(fù)責(zé)將垃圾帶走，值日生打掃實(shí)驗(yàn)室衛(wèi)生。實(shí)驗(yàn)步驟：9、實(shí)驗(yàn)后的整理工作實(shí)驗(yàn)報(bào)告試述傳代培養(yǎng)的步驟和注意事項(xiàng)，并指出哪些是關(guān)鍵步驟。傳代培養(yǎng)時(shí)要注意嚴(yán)格的無(wú)菌操作，并防止細(xì)胞之間的交叉污染。酶解消化要適度，消化過(guò)度會(huì)對(duì)細(xì)胞造成損害，消化不夠則難于將細(xì)胞解離下來(lái)。傳代后第2-3天觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況，了解細(xì)胞是否健康生長(zhǎng)：健康細(xì)胞的形態(tài)飽滿，折光性好。掌握好代傳代時(shí)機(jī)：健康生長(zhǎng)的細(xì)胞生長(zhǎng)致密，即將鋪滿瓶底時(shí)，即可傳代。思考與討論細(xì)胞傳代培養(yǎng)