ABO從細(xì)胞到分子-打印版課件

1、ABO血型系統(tǒng) 從血清到分子1818年英國(guó)婦產(chǎn)科醫(yī)生布倫德爾成功地用輸血救活了一名產(chǎn)后大出血的產(chǎn)婦，成為人類歷史上成功輸血的第一例。 血型抗原能夠激活免疫系統(tǒng) ：母胎不相容輸血不相容自身溶血性貧血ABO血型的發(fā)現(xiàn)1900年奧地利 Landsteiner1907年捷克人Jansky1910年美國(guó)人MossLandsteiner（18681943）獲得1930年諾貝爾獎(jiǎng)金Landsteiner一生發(fā)現(xiàn)了ABO、MN、P、RH等許多血型。 ABO血型的配合性是輸血前試驗(yàn)的重要基礎(chǔ)ABO血型系統(tǒng)的獨(dú)特特點(diǎn)A和B抗原的免疫源性強(qiáng)血清中規(guī)律性存在抗-A和/或抗-B抗體分泌型個(gè)體的血漿、唾液、組織細(xì)胞等處存

2、在A、B、H血型物質(zhì)ABO血型主要抗原和抗體ABO系統(tǒng)概述A和B抗原是紅細(xì)胞膜表面糖蛋白、糖脂分子中的糖類決定簇。二者之間的區(qū)別在于免疫結(jié)構(gòu)域末端單糖性質(zhì)不同。A抗原末端糖基是N-乙酰氨基半乳糖B抗原末端糖基是D-半乳糖。ABO系統(tǒng)概述ABO抗原不是ABO基因的直接產(chǎn)物A和B基因編碼不同的糖基轉(zhuǎn)移酶，催化不同的糖基轉(zhuǎn)移到H抗原末端半乳糖基上，形成相應(yīng)的A或B抗原O基因的產(chǎn)物是一種無活性的轉(zhuǎn)移酶，不能轉(zhuǎn)移任何糖基到H抗原上，因此O型個(gè)體的抗原就是H抗原。 ABO血型的遺傳復(fù)等位基因 共顯性遺傳顯性基因：A、B隱性基因：OA型：AA AOB型: BB BOAB型: ABO型: OO根據(jù)孟德爾遺傳定

3、律 不同婚配類型子女可能的血型A*OA OB*OB OA*BA B AB OAB*OA BA*ABA B ABB*ABB A ABA*AA OHAB物質(zhì)生物合成 ABO基因 特異性糖基轉(zhuǎn)移酶 ABO抗原血型前身物質(zhì)L巖藻糖N乙酰氨基半乳糖D半乳糖 ABO基因糖基轉(zhuǎn)移酶結(jié)構(gòu)模式圖（1）ABO基因糖基轉(zhuǎn)移酶結(jié)構(gòu)模式圖（2）ABO基因糖基轉(zhuǎn)移酶結(jié)構(gòu)模式圖（3）ABO抗原形成的基礎(chǔ)：H位點(diǎn)H基因：一個(gè)獨(dú)立于ABO的基因FUT1編碼巖藻糖基轉(zhuǎn)移酶轉(zhuǎn)移一個(gè)巖藻糖到血型前身物質(zhì)上形成H抗原。極少數(shù)個(gè)體缺乏H基因，紅細(xì)胞上無H抗原，既使編碼A和B的糖基轉(zhuǎn)移酶基因是正常的，也不能產(chǎn)生A或B抗原。 ABO物質(zhì)的生

4、物合成A、B、H血型物質(zhì)1930年Lehrs發(fā)現(xiàn)唾液中有A和B物質(zhì)1943年Wiener發(fā)現(xiàn)分泌型占80AB物質(zhì)的量具有較顯著的個(gè)體差異血清中的血型物質(zhì)較弱唾液中的血型物質(zhì)較容易測(cè)到A型 A抗原，少量H抗原 血型物質(zhì)：A，HB型 B抗原，少量H抗原 血型物質(zhì)：B，HAB型 A，B抗原，很少的H抗原 血型物質(zhì)：A，B，HO型 H抗原 血型物質(zhì)：HH抗原強(qiáng)弱：OA2 B A2B A1 A1BH 抗原在人群中 呈 減 低 趨 勢(shì)ABH 抗原決定族新生兒正定型：RBC與血型試劑反應(yīng)弱。 56周的胚胎RBC就可檢測(cè)出來。 出生時(shí)發(fā)育不完整。 24歲紅細(xì)胞發(fā)育完全。新生兒通常不做反定型 1 新生兒免疫系統(tǒng)

5、發(fā)育不成熟 2 血清抗體易受到母親血清的干擾 成人與新生兒抗原數(shù)量比較細(xì)胞 成人新生兒A1810 0001170 000250 000 370 000A2240 000 290 000140 000B610 000 830 000200 000320 000抗-A、抗-B的特性IgM、IgGIgM抗體可被2Me（2巰基乙醇），DTT(2硫蘇糖醇)破壞IgA抗體經(jīng)2Me處理血清學(xué)活性下降，但抗體不破壞。IgG抗體分子量小，可以通過胎盤屏障 交叉反應(yīng)性抗-AB：來源于O型人血清聯(lián)合抗體 ：抗-AB 不是抗-A和抗-B簡(jiǎn)單的混合，針對(duì)A和B抗原共同的決定簇。A細(xì)胞與O型血清吸收后放散液可以凝集B細(xì)胞

6、，反之亦然。與ABO密切相關(guān)的H及Lewis血型系統(tǒng)ABH和Lewis抗原被稱作組織血型抗原 H（FUT1）抗原是ABO基因表達(dá)的基礎(chǔ)；ABH的分泌型Se（FUT2）在決定Lewis表現(xiàn)型中發(fā)揮重要作用Lewis（FUT3）抗原是從血漿吸附到紅細(xì)胞膜上的血型抗原。 Lewis血型系統(tǒng)1946年，Mourant最早描述了抗Lewis（后來稱之為抗-Lea）的兩個(gè)例子，這些抗體凝集約25英國(guó)人的紅細(xì)胞。Andresen發(fā)現(xiàn)一種抗體，后來被稱作抗Leb，該抗體針對(duì)的決定簇僅僅出現(xiàn)于成人Le（a）細(xì)胞。Lewis抗原的產(chǎn)生Lewis基因（FUT3）編碼一種巖藻糖基轉(zhuǎn)移酶催化一個(gè)巖藻糖基到分泌物的H物質(zhì)

7、上，產(chǎn)生Leb抗原。當(dāng)個(gè)體屬非分泌型（sese）分泌物中沒有H物質(zhì)時(shí)，則催化一個(gè)巖藻糖殘基到H前體物質(zhì)上，產(chǎn)生Lea抗原。Lewis系統(tǒng)當(dāng)這些結(jié)構(gòu)被從血漿吸附到紅細(xì)胞膜上時(shí)：多數(shù)H分泌型紅細(xì)胞表現(xiàn)Le（a-b）H非分泌型則表現(xiàn)為L(zhǎng)e（ab）約6的白人和25的黑人在Lewis位點(diǎn)是沉默因純合子，他們不產(chǎn)生Lewis酶，其紅細(xì)胞為L(zhǎng)e（ab），其分泌物中缺乏Lewis物質(zhì)。在亞洲，表現(xiàn)型Le（ab）很常見，這是由于一個(gè)弱的分泌型等位基因Sew所致。Lewis抗原雖然Lea和Leb不是由紅細(xì)胞合成的，而是從血漿中獲得的，他們被當(dāng)作血型抗原是因?yàn)樗鼈兪紫葟募t細(xì)胞上發(fā)現(xiàn)的。術(shù)語Lea和Leb容易使人們產(chǎn)

8、生誤解，因?yàn)檫@兩種抗原不是一對(duì)等位基因決定的，但仍沿用。Lewis血型的基因型與表現(xiàn)型ABO、H及Lewis血型系統(tǒng)ABO基因： 9號(hào)染色體FUT1（H）FUT2（SE）FUT3（Lewis） 19號(hào)染色體常見ABO亞型判斷ABO亞型:1 紅細(xì)胞與抗-A/抗-A1/抗-B及抗-AB的凝集程度。2 紅細(xì)胞上H物質(zhì)活性的強(qiáng)弱。3 血清中是否存在抗-A1。4 分泌型人的唾液中A、B和H物質(zhì)。 ABO亞型A抗原中主要為A1和A2 其它A亞型：A3、Ax、Aend、Am、Ay、和AelB亞型種類比A亞型更少：B3、Bx、Bm和Bel等H抗原強(qiáng)弱：OA2 B A2B A1 A1BO型A2BA2BA1A1B

9、各種弱A亞型的鑒別程序紅細(xì)胞弱凝集混合外觀(Mf）A60A3與抗-AA3 Ax10 紅細(xì)胞呈十分弱的mf凝集Aend及/或抗-Aend只與抗-AB呈弱凝集AxAB反應(yīng)不凝集容易吸附放散抗-AAm能吸附分泌型唾液中有一定量的A物質(zhì)及放散不容易吸附放散抗-AAy抗-A分泌型唾液含少量的A物質(zhì)Am Ay 吸附放散抗-AAelAel分泌型唾液只含H物質(zhì)無A物質(zhì)A2與人源性抗A試劑的反應(yīng)強(qiáng)度為4, 與抗H+/2+可能有不規(guī)則抗A1存在 (sometimes)1-8% A2和22-35%的A2B存在抗 A1血型物質(zhì) A H舉例 抗A 抗B Ac Bc Oc 4+ 4+ + - -A1和A2決定簇的區(qū)別是僅

10、存在量的差異還是抗原決定簇結(jié)構(gòu)不同？用A2細(xì)胞重復(fù)吸收來源于B型個(gè)體的抗-A血清可以移去所有抗體，表明二者之間僅是量的差別。A2和A2B個(gè)體常常產(chǎn)生抗-A1，說明A2細(xì)胞上缺乏A1細(xì)胞上的一種決定簇。 血型前體物質(zhì)：Type1 Gal13GlcNAc 1R（血清）Type2 Gal14GlcNAc 1R （紅細(xì)胞）Type3 Gal13GalNAc1R（紅細(xì)胞）Type4 Gal13GalNAc 1R （紅細(xì)胞）Type5 Gal13Gal 1R（人工合成）Type6 Gal14Glc 1R2型H與3型H的區(qū)別A1和A2同樣存在質(zhì)的區(qū)別A1細(xì)胞出現(xiàn)重復(fù)的3型A抗原結(jié)構(gòu)，但A2細(xì)胞卻沒有?？?A

11、1是3型或4型A特異性的，或者抗-A1可以優(yōu)先與3型或4型A反應(yīng)。只有A1轉(zhuǎn)移酶能夠轉(zhuǎn)化3型H加一個(gè)N乙酰氨基半乳糖基成為3型A因此A2細(xì)胞上可以檢測(cè)到3型H而不是3型A抗原。雙花扁豆植物血凝素檢測(cè)N乙酰氨基半乳糖胺，當(dāng)過量的濃度下，它可以凝集A2細(xì)胞，因此將它用作A亞型分型試劑更多是依賴A1和A2表現(xiàn)型數(shù)量上的差異。A3最早由Friedenreich在1936年描述與抗-A和抗-AB共同孵育時(shí)：“混合視野外觀”（mixed field agglutination）。即：小的凝集塊周圍是大量未凝集的細(xì)胞。與抗-A反應(yīng)強(qiáng)度低于A2。與抗-AB反應(yīng)呈混合視野，但并不增強(qiáng)。偶有抗-A1 (occas

12、ionally) 血型物質(zhì) A HA3不像是A2和O細(xì)胞的嵌合體 。Aend（Afinn，Abantu）Aend最早由Weiner 等于1959年描述類似于A3細(xì)胞：它們與一些抗-A和抗-AB表現(xiàn)很弱的混合視野外觀。Aend分泌型的唾液中只有H物質(zhì)，但是無A物質(zhì)抗-A1出現(xiàn)在部分Aend個(gè)體的血清中10細(xì)胞凝集（Mf）AmAm細(xì)胞不能被抗-A和抗-AB凝集，或者僅能發(fā)生很弱的凝集。Am細(xì)胞可以吸附放散抗-A 。Am分泌型的唾液中包含正常含量的A和H物質(zhì)，Am血清中通常無抗-A1。Am作為ABO位點(diǎn)上一個(gè)稀有的等位基因遺傳Am在法國(guó)獻(xiàn)血者的頻率是150 000中有1例。（A型人中占0.0015%

13、），中國(guó)臺(tái)灣的數(shù)據(jù)是400 000萬人中1例。Am抗原性較弱 與抗-A反應(yīng): - / w+與抗-H反應(yīng)： 增強(qiáng)無抗-A1產(chǎn)生，與抗-AB反應(yīng)不增強(qiáng)血型物質(zhì): A HAxAx表現(xiàn)型最初由Fischer和Hahn于1935年報(bào)道，它的主要血清學(xué)特點(diǎn)是：紅細(xì)胞與多數(shù)來源于B型血清的抗A不發(fā)生反應(yīng)，但是可以被大多數(shù)來源于O型個(gè)體的抗-AB凝集，沒有混合視野表現(xiàn)。血清中含有抗-A1，后者有時(shí)候可以凝集A1和A2細(xì)胞。除了H物質(zhì)，Ax分泌型個(gè)體唾液中可以撿出痕量的A物質(zhì)。Ax抗A: -/ w+抗H:增強(qiáng)血清中常有抗-A1(Frequently) ,比A2 A3的幾率都高?？?AB：反應(yīng)比與抗-A明顯增強(qiáng)血

14、型物質(zhì) H，痕量AAxAx表現(xiàn)型具有很高的遺傳異質(zhì)性：許多家系資料表明Ax以ABO位點(diǎn)上一種稀有的等位基因的方式遺傳。在一些家庭中遺傳背景不清楚在兩項(xiàng)獨(dú)立的研究中，法國(guó)Ax的頻率為1/77000 (A型人中的0.003%)和1/44000 AintLandsteiner和Levine：有些A型個(gè)體的紅細(xì)胞既不能定義為A1也不能定義為A2。Aint在黑人中較白人更為常見。Aint是作為ABO位點(diǎn)上的一個(gè)等位基因遺傳的。它的H抗原強(qiáng)度象A2一樣強(qiáng)，甚至更強(qiáng)。與抗-A1反應(yīng)較弱 2+與抗-A及抗-H反應(yīng)較強(qiáng) 4+/3+Ael在通常的條件下，Ael細(xì)胞與抗-A和抗-AB不發(fā)生凝集，雖然它們可以結(jié)合這些

15、抗體，結(jié)合的抗體可以通過吸收放散技術(shù)檢測(cè)到。Ael分泌型唾液中無A物質(zhì)，僅有H物質(zhì)，血清中常含有抗-A1，也可以含有能夠凝集A2細(xì)胞的抗體。Ael 在Ael血清和紅細(xì)胞膜上不能檢出A轉(zhuǎn)移酶。在法國(guó)150000例獻(xiàn)血者中，沒有檢測(cè)到Ael表現(xiàn)型，在中國(guó)臺(tái)灣400000人中檢出5例Ael個(gè)體。Ael以ABO位點(diǎn)上的一種稀有的等位基因遺傳的。AwML Olsson等對(duì)其它弱A亞型的ABO基因的外顯子、剪切部位和啟動(dòng)子進(jìn)行序列測(cè)定。表現(xiàn)型不太容易被劃分到任何現(xiàn)存的分類的異常基因被稱作Aw（15）。 Subgroups of APheno-typeRed cellstestedWith anti-ser

16、aSerum tested withKnown red cellsSalivaof secretorsAnti-A-B-AB-A1-HA1A2BO A1V_VV_V_A and HAint+_V+_V_A and HA2+_V_+Some-times. +_V_A and HA3+mf_+mf_+Occa-sionally. +_V_A and HAm-/w+_-/w+_V_V_A and HAx-/W+_+/+_VFre-quently +_V_HB亞型弱的B變異型是相對(duì)較少的，可能是由于在許多群體中B基因的頻率要相對(duì)低得多。弱B亞型的分類，Salmon指出B亞型最好的分類應(yīng)參照A變異型：B

17、3、Bx、Bm和Bel，另外加上那些不符合其它4種類型的Bw。 B31972年 Wiener和Cioffi首先報(bào)道一例ABH非分泌型B3。它被作為最稀少的一種B亞型 這種表現(xiàn)型以與抗B和抗AB呈現(xiàn)混合視野反應(yīng)為特點(diǎn)血清中缺乏抗B唾液中含有正常含量的B抗原B3通常是由于ABO位點(diǎn)上的稀有等位基因所致。 Bx一種異質(zhì)性的血型典型的Bx紅細(xì)胞與抗B和抗AB呈弱凝集。血清中含有弱的抗BBx分泌型唾液中含有一些B物質(zhì)，后者常常僅能通過Bx細(xì)胞與抗B的凝集抑制試驗(yàn)才能檢測(cè)到Bx是ABO位點(diǎn)上的一種稀有的等位基因。BmBm細(xì)胞不能被抗B或抗AB凝集B抗原僅能通過敏感的技術(shù)比如吸收放散抗B才能檢測(cè)到。Bm分泌

18、型唾液中B物質(zhì)的含量接近正常BBm個(gè)體的血清中不含有抗B。通常Bm是作為ABO位點(diǎn)上一個(gè)變異的基因來遺傳的，但是有幾個(gè)例外報(bào)道。 BelBel紅細(xì)胞與抗-B和抗-AB不發(fā)生凝集反應(yīng)，但是它們的確可以結(jié)合抗-B，抗體可以通過放散技術(shù)被檢測(cè)到。Bel分泌型唾液中不出現(xiàn)B物質(zhì)，血清中可能存在抗B抗體。Bel作為ABO位點(diǎn)上的稀有基因而遺傳， BwOlsson等確認(rèn)了7種新的等位基因，它們與正常B基因相比有1個(gè)核苷酸改變，導(dǎo)致一個(gè)氨基酸的取代（見表2.19Bw2到8），所有這些等位基因與B的弱表達(dá)相關(guān)，但是沒有做進(jìn)一步分類。分泌型與非分泌型1930年Lehrs發(fā)現(xiàn)唾液中有A和B物質(zhì)1943年Wiene

19、r發(fā)現(xiàn)分泌型占80血型物質(zhì)的量有顯著個(gè)體差異血清中的血型物質(zhì)較弱唾液中的血型物質(zhì)較容易測(cè)到分泌型：產(chǎn)生可溶性HAB抗原的能力由分泌型基因座SE（FUT2）決定，該位點(diǎn)由Se、se兩個(gè)等位基因決定。SeSe或Sese個(gè)體表現(xiàn)為HAB分泌型 80Sese基因控制唾液中H物質(zhì)的分泌，與紅細(xì)胞上的H抗原表現(xiàn)型無關(guān)Lewis血型：Le（a-b+）/Le（a-b-）非分泌型：隱性基因純合子sese在人群中占20，產(chǎn)生非分泌型唾液中缺乏HAB血型物質(zhì) Lewis血型：Le（a+b-）/Le（a-b-）孟買型與類孟買型孟買型（Oh）和類孟買血型(Amh/Bmh/ABmh/Omh) 是人群中兩種非常罕見的稀有血

20、型 孟買型：孟買型：H（FUT1）基因的產(chǎn)物為a（1，2）巖藻糖轉(zhuǎn)移酶，但缺少H時(shí)，即hh時(shí)不能形成H抗原物質(zhì)，盡管ABO基因存在，A/B抗原將不能形成。紅細(xì)胞缺乏H物質(zhì)、A、B物質(zhì)。血清中有很強(qiáng)的抗-H，血清與所有O型人的紅細(xì)胞反應(yīng)都很強(qiáng)。孟買型細(xì)胞與荊豆鹽水提取液（抗-H）不發(fā)生反應(yīng)。類孟買型（過去觀點(diǎn)）帶有正常的H基因和A基因，但因其調(diào)節(jié)H基因作用的一對(duì)基因是zz純合，故使其H的作用部分地受到抑制，因而只能產(chǎn)生少量的H抗原，少量的H抗原在A基因的作用下全部轉(zhuǎn)化為A抗原。但紅細(xì)胞上的A抗原是很弱的。紅細(xì)胞上缺少H物質(zhì)，有少量A抗原。血清中有抗B，抗HI抗體。唾液中含正常A、H物質(zhì)，控制HA

21、B物質(zhì)分泌的調(diào)節(jié)基因SeSe/Sese，因而能分泌正常的A、H物質(zhì)。孟買型與類孟買型孟買型屬H缺陷的非分泌型，其個(gè)體紅細(xì)胞和分泌液中均檢測(cè)不到ABO抗原。hh/seseLe(a+b-)或Le（a-b-） 類孟買血型是H缺陷的分泌型，其特點(diǎn)是紅細(xì)胞表面缺乏ABH抗原，而在唾液等分泌液中卻可以找到ABH血型物質(zhì)。hh/Sese；hh/SeSe Le(a-b+)或Le(a-b-)H基因的缺失1孟買型hhsese血清和紅細(xì)胞膜上均缺少H物質(zhì)抗-A抗-B 強(qiáng)抗-H(Oh OhA OhB OhAB )H基因的缺失2類孟買型hhSe紅細(xì)胞膜上均缺少H物質(zhì)血清中有1型H(A/B)物質(zhì)抗-A強(qiáng)/弱抗-B強(qiáng)/弱抗

22、-H 弱少量吸附(Omh Bmh Amh ABmh)H基因的缺失3類孟買型hhSew紅細(xì)胞膜上缺少H物質(zhì)血清中有少量1型H(A/B)物質(zhì)抗-A強(qiáng)/弱抗-B強(qiáng)/弱抗-H 較強(qiáng)痕量吸附(Omh Bmh Amh ABmh)H基因的減弱弱H型HmSe紅細(xì)胞膜上有少量H血清H(A/B)物質(zhì)含量正?？?A強(qiáng)/無抗-B強(qiáng)/無抗-H 無(OHm BHm AHm ABHm)H缺陷表現(xiàn)型總結(jié)從血清學(xué)到分子生物學(xué)1900年 2008年1990年1985年ABO血型系統(tǒng)遺傳學(xué)基礎(chǔ)ABO基因 9q34.19q34.2A基因：(1, 3)N-乙酰氨基半乳糖轉(zhuǎn)移酶B基因：D半乳糖轉(zhuǎn)移酶O基因：無有效的基因產(chǎn)物ABO基因7個(gè)

23、外顯子，跨越基因組DNA 18kb 外顯子17 ，28bp 691bp不等編碼順序：exon 6 和 exon 7ABO基因的核苷酸差異在A1基因的基礎(chǔ)上核苷酸突變糖基轉(zhuǎn)移酶改變影響催化活性抗原改變 ABO系統(tǒng)A1等位基因cDNA 全長(zhǎng)序列 ABO基因在cDNA和氨基酸上的差異A1 allele(1)A1 allele(2) nt.467(CT)=aa156(proleu)B allele nt.291(AG)； nt.526(CG) =aa176(ArgGly)； nt657(CT)； nt.703(GA) =aa235(glySer)； nt.796(CA) =aa266 (leuMet)

24、； nt.803(GC) =aa268(GlyAla)； nt.930(GA)。O allele(1) nt.261(Gdel) =framshiftO allele(2) nt.261(Gdel) =framshift , nt297(AG), nt646(TA), nt681(G A), nt771(CT), nt829(GA)ABO基因亞型的分子基礎(chǔ)A2 allele nt.467(CT) =aa156(ProLeu) nt.1059- 1061(3Cs 2Cs) =frameshiftA3 allele nt.871(GA) =aa291(AspAsn)Ax allele nt.646

25、(TA) aa216(AspAsn) O allele(3) nt.297(AG) nt.526(CG)= aa176 (Arg Gly) , nt.802(G A) =aa268 (Gly Arg) B3 allele nt.297(AG), nt526(CG) =aa176(Arg Gly) nt. 657(CT), nt.703(GA) =aa235 (GlySer) nt.796(cA)=aa266 (Leu Met) nt.803(GC)=aa268(GlyAla) nt.930 (G A), nt.1054(CT) =aa353(ArgTrp)CisAB nt.467(CT) =a

26、a156(ProLeu), nt.803 (GC) =aa.268(GlyAla)常見A亞型的分子基礎(chǔ)常見B亞型的分子基礎(chǔ)ABO基因等位基因舉例H位點(diǎn)隱性基因在人群中的多態(tài)性ABO血型系統(tǒng)基因分型1.聚合酶鏈反應(yīng)polymerase chain reaction, PCR聚合酶鏈反應(yīng)是DNA分型的基礎(chǔ)，在含有模板DNA 的反應(yīng)液中加入四種脫氧核糖核苷，耐熱的TaqDNA聚合酶，經(jīng)變性、復(fù)性和延伸三個(gè)不同溫度時(shí)相的變化，大約2530個(gè)循環(huán)后，DNA得到大量擴(kuò)增。反應(yīng)在熱循環(huán)儀上自動(dòng)進(jìn)行，簡(jiǎn)便易行。序列特異的PCR可直接用于分型，或?qū)CR產(chǎn)物作進(jìn)一步的分析。 2序列特異性引物的PCR PCR- sequence specific primer，PCR-SSP此技術(shù)采用序列特異性引物(SSP)。SSP的3端具有獨(dú)一無二的序列，在退火時(shí)只能與某特定等位基因結(jié)合，因此能夠特異性地?cái)U(kuò)增ABO基因，然后通過凝膠電泳檢測(cè)PCR產(chǎn)物。根據(jù)是否得到PCR產(chǎn)物，以及產(chǎn)物的片段大小來判斷ABO基因型。 3PCRRFLP （PCR-rest