浙江大學(xué)生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)甲維生素C的定量測(cè)定二氯酚靛酚滴定法_第1頁(yè)
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文檔簡(jiǎn)介

1、維生素C的定量測(cè)定 (2,6-二氯酚靛酚滴定法)1、維生素C簡(jiǎn)介維生素C是人類營(yíng)養(yǎng)中最重要的維生素之一,食物中如缺乏,將會(huì)導(dǎo)致壞血病,因此又稱為抗壞血酸。植物的綠色部分及許多水果(如橙子、橘子、蘋果、草莓、山楂、鮮棗、獼猴桃等)、蔬菜(黃瓜、洋白菜、西紅柿、豆芽菜、辣椒等)中維生素C的含量尤為豐富。維生素C為一種稍有酸味的糖類白色晶體,易溶于水,不溶于有機(jī)溶劑。在酸性溶液中比在中性及堿性溶液中穩(wěn)定,易被熱、光及某些金屬離子(Cu2+ 、Fe2+等破壞。1維生素C的定量測(cè)定 (2,6-二氯酚靛酚滴定法)維生素C具有很強(qiáng)的還原性,參與體內(nèi)多種氧化還原反應(yīng),是一些氧化還原酶的輔酶。金屬銅和酶(抗壞血

2、酸氧化酶)可催化維生素C氧化為脫氫型(氧化型)。還原型和氧化型都具有活力。2、維生素C的測(cè)定原理 根據(jù)維生素C的還原性可測(cè)定其含量,常用2,6-二氯酚靛酚測(cè)定法。還原性抗壞血酸能還原染料2,6二氯酚靛酚,本身則氧化為脫氫型。在酸性溶液中,2,6-二氯酚靛酚呈紅色,還原后變?yōu)闊o色。2維生素C的定量測(cè)定 (2,6-二氯酚靛酚滴定法)因此,當(dāng)用此染料滴定含有維生素C的酸性溶液時(shí),維生素C尚未全部被氧化前,則滴下的染料立即被還原成無色。一旦溶液中的維生素C已全部被氧化時(shí),則滴下的染料立即使溶液變成粉紅色。所以,當(dāng)溶液從無色轉(zhuǎn)變成微紅色時(shí)即表示溶液中的維生素C剛剛?cè)勘谎趸?,此時(shí)即為滴定終點(diǎn)。如無其它雜

3、質(zhì)干擾,樣品提取液所還原的標(biāo)準(zhǔn)染料量與樣品中所含的還原性抗血酸量成正比。300 O CHO CHO C H CHO CH CH2OHO還原型抗壞血酸 O C O C O C H CHO CH CH2OHO氧化型抗壞血酸ClNClOOHClNClOO-ClNClHOOHH還原型2,6-二氯酚靛酚(無色)氧化型2,6-二氯酚靛酚(粉紅色)(藍(lán)色)H+ OH-+(被還原的標(biāo)準(zhǔn)染料量與樣品中所含的還原型抗壞血酸量成正比)4維生素C的定量測(cè)定 (2,6-二氯酚靛酚滴定法)滴定終點(diǎn):當(dāng)溶液從無色轉(zhuǎn)變成微紅色(15s內(nèi)不消退)時(shí)即表示溶液中的維生素C剛剛?cè)勘谎趸?,此時(shí)即為滴定終點(diǎn)。2,6-二氯酚靛酚滴定法

4、的特點(diǎn):簡(jiǎn)便,快速,比較準(zhǔn)確,適用于許多不同類型樣品的分析。缺點(diǎn)是不能直接測(cè)定樣品中的氧化型抗壞血酸,并且,易受其它還原物質(zhì)的干擾,如果樣品中含有色素類物質(zhì),還會(huì)給滴定終點(diǎn)的觀察造成困難。3、材料與試劑 、實(shí)驗(yàn)材料 5維生素C的定量測(cè)定 (2,6-二氯酚靛酚滴定法)橘子、青椒等。、試驗(yàn)試劑標(biāo)準(zhǔn)抗壞血酸溶液和2,6-二氯酚靛酚溶液配制時(shí)的注意事項(xiàng)參P162。4、操作方法操作步驟及注意事項(xiàng)參P162-P163。5、實(shí)驗(yàn)結(jié)果及處理準(zhǔn)確紀(jì)錄所稱青椒的克數(shù);仔細(xì)觀察滴定終點(diǎn),準(zhǔn)確記錄滴定所用 2,6-二氯酚靛酚的毫升數(shù),代入下列公式計(jì)算維生素C的含量:6維生素C的定量測(cè)定 (2,6-二氯酚靛酚滴定法)VA:滴定樣品所耗用的染料的平均體積(ml)V:滴定空白對(duì)照所耗用的染料的平均體積(ml)C:樣品提取液的總體積(ml)D:滴定時(shí)所取的樣品提取液體積(ml)T:ml染料能氧化

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