紙層析分離絲氨酸和甘氨酸

1、紙層析分離絲氨酸和甘氨酸第三組： 李濤，柏健，徐翔，翟天賜姜峰，張令奇1一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?1. 學(xué)習(xí)氨基酸紙層析法的基本原理2. 掌握氨基酸紙層析的操作技術(shù)2二、實(shí)驗(yàn)原理紙層析法（paper chromatography）是生物化學(xué)上分離、鑒定氨基酸混合物的常用技術(shù)，可用于蛋白質(zhì)的氨基酸成分的定性鑒定和定量測(cè)定。紙層析法是用濾紙作為惰性支持物的分配層析法，其中濾紙纖維素上吸附的水是固定相，展層用的有機(jī)溶溶劑是流動(dòng)相。 3在層析時(shí)，將樣品點(diǎn)在距濾紙一端約23cm的某一處，該點(diǎn)稱為原點(diǎn)；然后在密閉容器中層析溶劑沿濾紙的一個(gè)方向進(jìn)行展層，這樣混合氨基酸在兩相中不斷分配，由于分配系數(shù)（Kd）不同，結(jié)果它們

2、分布在濾紙的不同位置上。物質(zhì)被分離后在紙層析圖譜上的位置可用比移值（rate of flow, Rf）來表示。 4所謂Rf，是指在紙層析中，從原點(diǎn)至氨基酸停留點(diǎn)（又稱為層析點(diǎn)）中心的距離（X）與原點(diǎn)至溶劑前沿的距離（Y）的比值：在一定條件下某種物質(zhì)的Rf值是常數(shù)。Rf值的大小與物質(zhì)的結(jié)構(gòu)、性質(zhì)、溶劑系統(tǒng)、溫度、濕度、層析濾紙的型號(hào)和質(zhì)量等因素有關(guān)。5三、實(shí)驗(yàn)器材與試劑（一）器材 1. 層析缸 2. 點(diǎn)樣毛細(xì)管 3. 小燒杯 4. 培養(yǎng)皿 5. 量筒 6. 噴霧器 7. 吹風(fēng)機(jī)（或烘箱）8. 層析濾紙9. 直尺及鉛筆(二) 試劑 1. 擴(kuò)展劑(正丁醇: 80%甲酸:水15:3:2) 2. 甘氨酸

3、溶液及絲氨酸溶液 3. 顯色劑：0.5%的茚三酮正丁醇溶液 （05g茚三酮溶于100ml正丁醇即得0.5%的茚三酮正丁醇溶液，使用茚三酮溶液顯色時(shí)要戴手套）6四、實(shí)驗(yàn)步驟1將盛有平衡溶劑的小燒杯置于密閉的層析缸中。2準(zhǔn)備濾紙：取層析濾紙一張。在紙的一端距邊緣2cm處用鉛筆劃一直線，在直線上每間隔2cm做一記號(hào)，標(biāo)出5個(gè)原點(diǎn)。3點(diǎn)樣：用毛細(xì)管將各氨基酸樣品點(diǎn)在5個(gè)原點(diǎn)上，用量1020l，每點(diǎn)在紙上擴(kuò)散的直徑，最大不超過3 mm，邊點(diǎn)樣邊用電吹風(fēng)吹干，越小越好。干后再點(diǎn)一次。74擴(kuò)展 用線將濾紙縫成筒狀，紙的兩邊不能接觸。將盛有約20 mL擴(kuò)展劑的培養(yǎng)皿迅速置于密閉的層析缸中，并將濾紙直立于培養(yǎng)皿中(點(diǎn)樣的一端在下，擴(kuò)展劑的液面需低于點(diǎn)樣線1 cm)。待溶劑上升1520 cm時(shí)即取出濾紙，鉛筆描出溶劑前沿界線，自然干燥或用吹風(fēng)機(jī)熱風(fēng)吹干。5顯色 用噴霧器均勻噴上0。1茚三酮正丁醇溶液