壬基酚與卵清蛋白的結(jié)合與鑒定

1、壬基酚與卵清卵白的結(jié)合與斷定【摘要】目的：合成壬基酚與卵清卵白的偶聯(lián)物。要領(lǐng)：在磷酸鹽pbs，ph=8.0緩沖液中使用甲醛通過(guò)曼尼希反響毗連壬基酚與卵清卵白va；通過(guò)抗體芯片技能與紫外掃描斷定偶聯(lián)物。效果：壬基酚與va偶聯(lián)樂(lè)成，壬基酚單克隆抗體對(duì)偶聯(lián)物的識(shí)別濃度小于2.68g/l。結(jié)論：本要領(lǐng)可用于壬基酚與卵清卵白的偶聯(lián)，且要領(lǐng)簡(jiǎn)樸易實(shí)現(xiàn)?！娟P(guān)鍵詞】壬基酚卵清卵白甲醛synthesisandidentifiatinfthenjugatinfnnylphenlandvalbuininstitutefhygieneenvirnentalediine,aadeyfilitaryedialsiene,

2、tianjin300050,hinaabstratbjetive:tnjugatennylphenlandvalbuinva.ethds:nnylphenlasnjugatedtvabyannihreatinithfraldehydeinphsphatebufferpbs,ph=8.0.andeidentifiedthenjugatebyantihipandultraviletsan.results:nnylphenlasnjugatedtvasuessfully,andnnylphenlnantibdyregnizedthenjugatelessthan2.68g/l.nlusin:this

3、isaneasyethdtprduethenjugatefnnylphenlsuessfully.keyrdsnnylphenl；valbuin；fraldehyde1質(zhì)料與要領(lǐng)1.1試驗(yàn)質(zhì)料1.2試驗(yàn)要領(lǐng)透析袋煮沸1小時(shí)，將濾液倒入透析袋中，置于蒸餾水中透析6天，天天換1次蒸餾水。透析產(chǎn)物經(jīng)冷凍、抽干得到白色絮狀的偶聯(lián)物。偶聯(lián)物放入4冰箱保存。偶聯(lián)比=a280偶聯(lián)物-a280vaa280壬基酚6.3510-3va壬基酚。2效果2.1白色絮狀物質(zhì)斷定取小部門白色絮狀加至10l乙酸乙酯中，攪拌，白色物質(zhì)未見(jiàn)溶解，因此白色絮狀物質(zhì)不是壬基酚互相毗連的產(chǎn)物有機(jī)物易溶于有機(jī)溶劑，但不克不及確定是由甲醛

4、引起的變性卵白，由于在過(guò)濾后，在濾液中參加甲醛并未見(jiàn)白色絮狀物質(zhì)出現(xiàn)。鑒于這種物質(zhì)是在參加nah溶液后出現(xiàn)的，故另取50l壬基酚加至10lnah溶液1l/l，公然有白色絮狀物質(zhì)出現(xiàn)。因此，這種物質(zhì)大概是壬基酚與nah酸堿反響的有機(jī)鹽產(chǎn)物。圖1紫外掃描圖280n波峰處由上至下別離為偶聯(lián)物、va和壬基酚略fig.1theuvspetrafthenjugate,vaandnpnte:thethreeurvesfruptdnat280nrepresentedthespetrafthenjugate,vaandnpindistilledater.thenjugate:1g/l,a280=2.6301;v

5、a:1g/l,a280=1.4143;np:6.35g/l,a280=0.0423.圖2芯片掃描圖兩側(cè)為標(biāo)識(shí)表記標(biāo)幟后的偶聯(lián)物溶液的稀釋比略fig.2thesangrafantihip2.2偶聯(lián)物中va與壬基酚偶聯(lián)比例簡(jiǎn)直定接納核酸卵白闡發(fā)儀別離對(duì)偶聯(lián)物、va、壬基酚溶液舉行紫外掃描，偶聯(lián)物與va在220260n區(qū)間擬和很好，峰值均出如今280n四周圖1。偶聯(lián)物與va在一級(jí)布局上無(wú)不同，其不同是在苯環(huán)含量上，表白偶聯(lián)樂(lè)成。將數(shù)據(jù)代入公式盤算va與半抗原的偶聯(lián)比約為130。2.3抗體芯片斷定偶聯(lián)物芯片掃描圖19區(qū)均有信號(hào)，信號(hào)值顯著高于配景值。壬基酚抗體對(duì)偶聯(lián)物識(shí)別濃度小于2.68g/l圖2。3

6、討論franek等9曾將壬基酚的烷基衍生為h29h之后再與載體卵白結(jié)合產(chǎn)生人工抗原。這種人工抗原表露的大概說(shuō)使用這種人工抗原產(chǎn)生的抗體的抗原決定簇只有一個(gè)酚基，抗體的特異性受到很大影響，也倒霉于使用免疫技能檢測(cè)壬基酚。julia等10比來(lái)報(bào)道了一種與本實(shí)行原理雷同的壬基酚人工抗原的制備要領(lǐng)，并且他們做的越發(fā)深化，并將這種人工抗原注射到兔體內(nèi)，制備出相應(yīng)的抗體血清，特異性較好，效價(jià)到達(dá)1600。人工抗原的制備是否樂(lè)成，關(guān)鍵取決于兩個(gè)因素：一是合成的人工抗原是否保存了目的或特性官能團(tuán)；二是合成的人工抗原可否樂(lè)成的表露目的或特性官能團(tuán)。本實(shí)行直接將壬基酚使用甲醛通過(guò)曼尼希反響毗連到卵清卵白的氨基端，也就是在壬基酚的臨位與卵白的氨基間創(chuàng)立一個(gè)甲撐。理論上，小分子與載體卵白間只用一個(gè)h2這么小的毗連間隔，將對(duì)半抗原官能團(tuán)的表露造成很大的不良影響，但實(shí)行效果表現(xiàn)這并未對(duì)表露造成影響。我們以為緣故原由有兩個(gè)：一是毗連比例大，導(dǎo)致表露幾率高；二是過(guò)量甲醛與載體卵白的氨基或別的位置結(jié)合，使卵白的卷曲性削弱，越發(fā)有利于壬基酚兩個(gè)官能團(tuán)的表露。實(shí)行中一個(gè)征象大概可以或許證實(shí)后一點(diǎn)，即在合成反響竣事得到濾液后，取一些濾液并向此中再參加甲醛，卻無(wú)沉淀出現(xiàn)。這與甲醛使卵白變性沉淀的特性相悖。因此，我們推測(cè)這種征象是由于過(guò)量甲醛使部門卵白變性，另一部卵白的甲醛變性凝集位點(diǎn)被甲醛游