生物制品中的雜質(zhì)及污染物清除技術(shù)-常見污染物去除技術(shù)選擇要點課件

1、生物制品中的雜質(zhì)及污染物清除技術(shù)1.工藝概覽污染物清除技術(shù)常見污染物及解決方案總結(jié)概要生物制藥工藝概覽下游工藝(DSP)上游工藝(USP)基于細(xì)胞表達(dá)的抗體或者目標(biāo)分子純化目標(biāo)分子準(zhǔn)備貯存準(zhǔn)備病毒滅活除菌過濾拋棄型貯存細(xì)胞收獲澄清循環(huán)切向流體積減小除菌過濾貯存種子生物反應(yīng)器生物反應(yīng)器生物反應(yīng)器 取樣凍融儲液袋監(jiān)測與控制切向流系統(tǒng) 濃縮/擴(kuò)散流親和層析捕獲步驟低 pH 病 毒滅活精制1精制2 膜層析切向流系統(tǒng) 除病毒、 緩沖液置換 除菌過濾配置與灌裝可控凍融系統(tǒng)下游工藝概覽典型的抗體下游工藝澄清精制工藝1病毒滅活精制工藝2除病毒過濾濃縮及制劑除菌過濾近一步的雜質(zhì)清除(e.g., HCP, DNA

2、, 病毒 ,內(nèi)毒素,etc.)雜質(zhì)清除(e.g., 變體, 脫落的親和介質(zhì) etc.)目標(biāo)產(chǎn)品捕獲細(xì)胞培養(yǎng)QC and親和捕獲雜質(zhì)及污染物清除技術(shù)-澄清（Clarification）離心深層過濾切向流過濾效率 VS. 成本的選擇澄清-深層過濾技術(shù)（細(xì)胞，細(xì)胞碎片去除）Minow, B. et. Al., High-Cell Density Clarification By Single-Use Diatomaceous Earth Filtration Bioprocess International, April, 2014Cell Culture (CHO)Volume : 600 LCe

3、ll count: 18 x 106 cells/mlViability: 95 %Wet Cell Weight: 8%澄清效果：僅單級處理處理時間小于1小時收率 85%濁度 70PRV:是 5.58 0.28100pH:7.2,電導(dǎo)：4ms/cm，流速：450cm/h， 挑戰(zhàn)量1% 蛋白濃度：4.3g/l 抗體上樣量：10.9kg/l膜（3kg/m2）LRV= 5.59 （流速600cm/h）Zhou J and Tressel T, Amgen: Basic Concepts in Q Membrane Chromatography for Large-Scale Antibody Pr

4、oduction. Submitted for層析精制-膜層析陰離子交換技術(shù)（病毒去除）雜質(zhì)及污染物清除技術(shù)-病毒清除（Virus clearance）紫外滅活除病毒過濾層析雜質(zhì)及污染物清除技術(shù)-病毒清除策略雜質(zhì)及污染物清除技術(shù)-病毒清除技術(shù)小結(jié)大小排除：基于篩分，除菌&除病毒病毒清除-除病毒過濾技術(shù)原理病毒清除-除病毒過濾技術(shù)要點可以有效去除4個Log值以上的包膜和非包膜病毒，且高回收率流速衰減及堵塞情況下扔能維持4個Log值以上的去除效果可濾性實驗和驗證實驗結(jié)果的重復(fù)性Sartorius病毒清除-除病毒過濾技術(shù)要點病毒清除-除病毒過濾技術(shù)要點可濾性實驗和驗證實驗結(jié)果的重復(fù)性細(xì)小病毒截留濾器

5、通量；可濾性研究通量細(xì)小病毒截留濾器通量*細(xì)小病毒濾器過濾結(jié)束點選擇：單位面積過濾量或流速衰減*細(xì)小病毒濾器通量核算需以病毒挑戰(zhàn)結(jié)果為依據(jù)基于水相的完整性測試潔凈的材質(zhì)有效的病毒截留率-PPV可以去除4個Log-Retrovirus可去除6個Log易于使用病毒清除-除病毒過濾器選擇要點病毒清除-除病毒過濾器選擇要點病毒清除-除病毒過濾器選擇要點UV-C-選擇254nm波長-破壞病毒DNA和RNA,使核酸突變-阻礙其復(fù)制、轉(zhuǎn)錄及蛋白質(zhì)的合成UVC紫外滅活：適用于包膜和非包膜病毒滅活病毒清除-UVC紫外滅活技術(shù)照射分布可控、均勻一致徑向液體混合強(qiáng)烈、充分保留時間最小化靈活高效、可放大病毒清除-UVC紫外滅活技術(shù)病毒清除-UVC紫外滅活技術(shù)病毒清除-UVC紫外滅活技術(shù)病毒百萬單位小于1EU內(nèi)毒素L=K/M(L:內(nèi)毒素限值；K：最大耐受劑量；M：最大供給量）殘留宿主蛋白100 ppm殘留DNA 100pg/dose聚體；異構(gòu)體（純度相關(guān)）