微生物顯微鏡直接計(jì)數(shù)法和死活細(xì)胞的鑒定

1、實(shí)驗(yàn)四微生物顯微鏡直接計(jì)數(shù)法和死活細(xì)胞的鑒定以及四大類微生物菌落形態(tài)的比較和識別微生物顯微鏡直接計(jì)數(shù)法一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、學(xué)習(xí)使用血球記數(shù)板測定微生物數(shù)量的方法。2、學(xué)習(xí)并掌握形態(tài)觀察及死活細(xì)胞的鑒別方法。二、實(shí)驗(yàn)原理酵母菌顯微直接計(jì)數(shù)一血球計(jì)數(shù)板A.血球計(jì)數(shù)板側(cè)面三、實(shí)驗(yàn)材料顯微鏡、血球記數(shù)板、酵母菌懸液、蓋玻片、無菌滴管、吸水紙、擦鏡紙四、實(shí)驗(yàn)步驟1、取清潔無油的血球計(jì)數(shù)板，在計(jì)數(shù)室上面加蓋血蓋片。2、取酵母菌液，搖勻，用滴管由蓋玻片邊緣滴一小滴，使菌液自行滲入，計(jì)數(shù)室內(nèi)不得有氣泡。3、用10X(40 x)鏡觀察并將計(jì)數(shù)室移至視野中央。4、在10X(40 x)鏡下計(jì)數(shù)：計(jì)數(shù)5個中格的平均值，最

2、后再換算到每mL菌液中的含菌數(shù)。注意事項(xiàng)：計(jì)上不計(jì)下，計(jì)左不計(jì)右。出芽計(jì)一半。五、實(shí)驗(yàn)結(jié)果將顯微計(jì)數(shù)結(jié)果記錄于下表中。T表示五個中方格中的總菌數(shù)。各中格中菌數(shù)T二室平均值個/ml12345第一室第二室六、問題與討論在顯微鏡下直接測定微生物數(shù)量有什么優(yōu)缺點(diǎn)？有何改進(jìn)方法?酵母菌死活細(xì)胞的鑒定一、實(shí)驗(yàn)原理美藍(lán)是一種無毒的染料，它的氧化型呈藍(lán)色，還原型無色。用美藍(lán)對酵母的活細(xì)胞進(jìn)行染色時，由于細(xì)胞的新陳代謝作用，細(xì)胞內(nèi)具有較強(qiáng)的還原能力，使美藍(lán)由藍(lán)色的氧化型變?yōu)闊o色的還原型。因此，具有還原能力的酵母活細(xì)胞是無色的，而死細(xì)胞或代謝作用微弱的衰老細(xì)胞則呈藍(lán)色，借此即可對酵母菌的死活細(xì)胞進(jìn)行鑒別。二、實(shí)驗(yàn)

3、材料酵母菌懸液、0.1%呂氏堿性美藍(lán)染色液顯微鏡、載玻片、蓋玻片。三、實(shí)驗(yàn)步驟美藍(lán)鏡片的觀察1）在載玻片中央加一滴0.1%呂氏堿性美藍(lán)染色掖，然后按無菌操作用吸取計(jì)數(shù)時酵母菌樣品液放在染液中，混合均勻。2）用鑷子取一塊蓋玻片，先將一邊與菌液接觸，然后慢慢將蓋玻片放下使其蓋在菌液上。3）將制片放置約1min后鏡檢，低倍鏡到高倍鏡觀察，根據(jù)顏色來區(qū)別死活細(xì)胞。注意事項(xiàng)1、加染液不宜過多或過少，否則，在蓋上蓋玻片時，菌液會溢出或出現(xiàn)大量氣泡而影響觀察。2、蓋玻片不宜平著放下，以免產(chǎn)生氣泡影響觀察。四、實(shí)驗(yàn)結(jié)果將觀察結(jié)果繪制成圖，并標(biāo)明死細(xì)胞和活細(xì)胞，計(jì)算活細(xì)胞所占比例。結(jié)合顯微鏡直接計(jì)數(shù)法，數(shù)出樣品

4、中的活細(xì)胞數(shù)。四大類微生物菌落形態(tài)的比較和識別一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、熟悉四大類微生物菌落的主要特征2、掌握識別四大類微生物菌落形態(tài)的依據(jù)和要點(diǎn)，并應(yīng)用于識別未知菌落二、實(shí)驗(yàn)原理掌握識別四大類微生物菌落形態(tài)的要點(diǎn)對于從事菌種的篩選、雜菌的識別和菌種鑒定等項(xiàng)工作都有重要意義。菌落是由某一微生物的少數(shù)細(xì)胞或抱子在固體培養(yǎng)基表面繁殖后所形成的子細(xì)胞群體，因此，菌落形態(tài)在一定程度上是個體細(xì)胞形態(tài)和結(jié)構(gòu)在宏觀上的反映。由于每一大類微生物都有其獨(dú)特的細(xì)胞形態(tài)，因而其菌落形態(tài)特征也各異。在四大類微生物的菌落中，細(xì)菌和酵母菌的形態(tài)較接近，放線菌和霉菌形態(tài)較相似。細(xì)菌和酵母菌的異同細(xì)菌和多數(shù)酵母菌都是單細(xì)胞微生物。菌落

5、中各細(xì)胞間都充滿毛細(xì)管水、養(yǎng)料和某些代謝產(chǎn)物，因此，細(xì)菌和酵母菌的菌落形態(tài)具有尖似的特征，如濕潤、較光滑、較透明、易挑起、菌落正反面及邊緣、中央部位的顏色一致，且菌落質(zhì)地較均勻等。它們之間的區(qū)別如下：細(xì)菌：由于細(xì)胞小，故形成的菌落也較小，較薄、較透明且有“細(xì)膩”感。不同的細(xì)菌會產(chǎn)生不同的色素，因此常會出現(xiàn)五顏六色的菌落。此外，有些細(xì)菌具有特殊的細(xì)胞結(jié)構(gòu)，因此，在菌落形態(tài)上也有所反映，如無鞭毛不能運(yùn)動的細(xì)菌其菌落外形較圓而凸起；有鞭毛能運(yùn)動的細(xì)菌其菌落往往大而扁平，周緣不整齊，而運(yùn)動能力特強(qiáng)的細(xì)菌則出現(xiàn)更大、更扁平的菌落，其邊緣從不規(guī)則、缺刻狀直至出現(xiàn)遷居性的菌落，例如變形桿菌屬和菌種。具有莢膜

6、的細(xì)菌其菌落更粘稠、光滑、透明。莢膜較厚的細(xì)菌其菌落甚至呈透明的水珠狀。有芽抱的細(xì)菌常因其折光率和其他原因而使菌落呈粗糙、不透明、多皺褶等特征。細(xì)菌還常因分解含氮有機(jī)物而產(chǎn)生臭味，這也有助于菌落的識別。酵母菌：由于細(xì)胞較大（直徑約比細(xì)菌大10倍）且不能運(yùn)動，故其菌落一般比細(xì)菌大、厚而且透明度較差。酵母菌產(chǎn)生色素較為單一，通常呈礦蠟色，少數(shù)為橙紅色，個別是黑色。但也有例外，如假絲酵母因形成籍節(jié)狀的假菌絲，故細(xì)胞易向外圈蔓延，造成菌落大而扁平和邊緣不整齊等特有形態(tài)。酵母菌因普遍能發(fā)酵含碳有機(jī)物而產(chǎn)生醇類，故其菌落常伴有酒香味。放線菌和霉菌的異同放線菌和霉菌的細(xì)胞都是絲狀的，當(dāng)生長于固體培養(yǎng)基上時有

7、營養(yǎng)菌絲（或基內(nèi)菌絲）和氣生菌絲的分化。氣生菌絲向空間生長，菌絲之間無毛細(xì)管水，因此菌落外觀呈干燥、不透明的絲狀、絨毛狀或皮革狀等特征。由于營養(yǎng)菌絲伸入培養(yǎng)基中使菌落和培養(yǎng)基連接緊密，故菌絲不易被挑起。由于氣生菌絲、抱子和營養(yǎng)菌絲顏色不同，常使菌落正反面呈不同顏色。絲狀菌是以菌絲頂端延長的方式進(jìn)行生長的，越近菌落中心的氣生菌絲其生理年齡越大，也越早分化出子實(shí)器官或分生抱子，從而反映在菌落顏色上的變化，一般情況下，菌落中心的顏色常比邊緣深。有些菌的氣生菌絲還會分泌出水溶性色素并擴(kuò)散到培養(yǎng)基中而使培養(yǎng)基變色。有些菌的氣生菌絲在生長后期還會分泌水滴，因此，在菌落上出現(xiàn)“水珠”。放線菌：放線菌屬原核生

8、物，其菌絲纖細(xì)，生長較慢，氣生菌絲生長后期逐漸分化出抱子絲，形成大量的抱子，因此菌落較小，表面呈緊密的絨狀或粉狀等特征。由于菌絲伸入培養(yǎng)基中常使菌落邊緣的培養(yǎng)基呈凹狀。不少放線菌還產(chǎn)生特殊的土腥味或冰片味。霉菌：霉菌屬真核生物，它們的菌絲一般較放線菌粗（幾倍）且長（幾倍至幾十倍），其生長速度比放線菌快，故菌落大而疏松或大而緊密。由于氣生菌絲會形成一定形狀、構(gòu)造和色澤的子實(shí)器官，所以菌落表面往往有肉眼可見的構(gòu)造和顏色。三、實(shí)驗(yàn)材料已知菌落：細(xì)菌類（大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、賽氏桿菌、枯草桿菌和霉?fàn)顥U菌）酵母（釀酒酵母、紅酵母、假絲酵母）放線菌類（黃色鏈霉菌、藍(lán)色鏈霉菌、褐色鏈霉菌等）霉菌類（青霉、黑曲霉、黑根霉、毛霉）四、實(shí)驗(yàn)步驟1、細(xì)菌菌落的描述菌落表面形態(tài)：有光滑、皺褶、放射狀、根狀等菌落邊緣形態(tài)：有整齊、波狀、絲狀、鋸齒狀、裂葉狀等形態(tài)菌落隆起形態(tài)：有扁平、隆起、草帽狀、膠狀等透明度：可分為秀明、半透明、不透明等2、酵母菌菌落形態(tài)的描述：可參照細(xì)菌3、放線菌和霉菌