微生物論文---自來水中細(xì)菌總數(shù)的測定

1、 自來水中細(xì)菌總數(shù)的測定姓名：吳燕卓指導(dǎo)老師：陳燕飛（太原師范學(xué)院生物系091班學(xué)號：2009131124）摘要水是微生物廣泛分布的天然環(huán)境。水中微生物的主要來源是：水中的水生性微生物（如光合藻類）、來自土壤徑流、降雨的外來菌群和來自下水道的污染物和人畜的排泄物等1。水中的病原菌主要來自于人和動(dòng)物的傳染性排泄物。我國飲用水衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)（GB5749-85）規(guī)定每毫升水樣細(xì)菌總數(shù)37C培養(yǎng)24h不得超過100個(gè)。所謂細(xì)菌總數(shù)，指ImL水樣中所含的細(xì)菌菌落的總數(shù)。目前一般采用普通牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基在保證無菌的環(huán)境下，采取自來水的樣品，利用培養(yǎng)基制作平板2。按菌落計(jì)數(shù)方法進(jìn)行計(jì)數(shù)，通過實(shí)驗(yàn)測得的菌數(shù)

2、對照國家飲用水標(biāo)準(zhǔn)來判斷水質(zhì)3。對自來水用平板菌落技術(shù)測定細(xì)菌總數(shù)，通過觀測得到如下結(jié)果：在顯微鏡下可觀察到眾多的菌落且種類繁多，取其平均值得到，自來水中細(xì)菌總數(shù)為13/mL。自來水的微生物學(xué)檢驗(yàn)，在保證飲水安全和控制傳染病上有著重要意義，同時(shí)也是評價(jià)水質(zhì)狀況的重要指標(biāo)。關(guān)鍵字自來水平板菌落計(jì)數(shù)技術(shù)牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基乳白色菌細(xì)菌總數(shù)前言平板菌落計(jì)數(shù)法是將待測樣品經(jīng)適當(dāng)稀釋之后，其中的微生物充分分散成單個(gè)細(xì)胞，取一定量的稀釋樣液接種到平板上，經(jīng)過培養(yǎng)，由每個(gè)單細(xì)胞生長繁殖而形成肉眼可見的菌落，即一個(gè)單菌落應(yīng)代表原樣品中的一個(gè)單細(xì)胞。細(xì)菌總數(shù)是指水樣在一定條件下培養(yǎng)后（培養(yǎng)基成分，培養(yǎng)溫度和時(shí)

3、間、pH、需氧性質(zhì)等）所得1mL水樣所含菌落的總數(shù)。本實(shí)驗(yàn)只包括一群能在營養(yǎng)瓊脂上發(fā)育的嗜中溫的需氧的細(xì)菌菌落總數(shù)4。目前一般是采用普通牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基。除采用平板計(jì)數(shù)技術(shù)測定水中細(xì)菌總數(shù)外，現(xiàn)在已有許多種快速、簡便的微生物檢測儀或試劑紙等也用來測定水中細(xì)菌總數(shù)5。水是生命之源，人的生存離不開水環(huán)境，水質(zhì)的好壞對人們生活起著至關(guān)重要的作用，而判斷水質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)，微生物在水中的數(shù)量、種類是必不可少的。自來水的微生物學(xué)檢驗(yàn)，在保證飲水安全和控制傳染病上有著重要意義，同時(shí)也是評價(jià)水質(zhì)狀況的重要指標(biāo)6。材料與方法材料、試劑與儀器實(shí)驗(yàn)的時(shí)間與地點(diǎn)：2010年11月1日太原師范學(xué)院(南區(qū))微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室

4、材料：自來水1.1.3試劑：牛肉膏、蛋白胨、NaCl、ImoL/LNaOH、ImoL/LHCL、滅菌水1.1.4儀器：高壓蒸氣滅菌鍋、培養(yǎng)皿、三角燒瓶、天平、牛角匙、pH試紙(pH5.5-9.0)、麻繩、牛皮紙、量筒、玻璃棒、電熱爐、稱量杯實(shí)驗(yàn)方法滅菌7滅菌物品的放入：首先將高壓蒸氣滅菌鍋的內(nèi)鍋層取出,再向外鍋內(nèi)加入適量的水,使水面與三角擱架相平為宜。放回內(nèi)鍋層,并加入用報(bào)紙包好的培養(yǎng)皿、三角燒瓶、吸管。加蓋，并將蓋上的排氣軟管插入內(nèi)層鍋的排氣槽內(nèi)。再以兩兩對稱的方式同時(shí)旋緊相對的兩個(gè)螺旋，使螺旋松緊一致，勿使漏氣。高壓蒸氣滅菌鍋的調(diào)節(jié)：打開排氣閥，使水沸騰以排除鍋內(nèi)的冷氣。待冷空氣完全排盡后

5、，關(guān)上排氣閥，讓鍋內(nèi)的溫度隨蒸氣壓力增加而逐漸上升。當(dāng)鍋內(nèi)壓力上升到所需壓力時(shí)，通過高壓蒸汽滅菌鍋上的按鈕調(diào)節(jié)壓力、溫度和時(shí)間，維持壓力至所需時(shí)間。本實(shí)驗(yàn)用0.1MPa,121C,20min滅菌。滅菌時(shí)間到后，切斷電源，讓滅菌鍋內(nèi)溫度自然下降，當(dāng)壓力表的壓力降至“0”時(shí)打開排氣閥，旋松螺旋，打開蓋子，取出滅菌物品。水樣的采取先放開水龍頭使水流5min后，用滅菌后的三角燒瓶接取水樣，迅速地進(jìn)行分析。制備牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基6稱量用天平稱量33g牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基粉末置于燒杯中。溶化在上述燒杯中加入1000mL蒸餾水，然后，在石棉網(wǎng)上加熱，并用玻璃棒攪拌直至沸騰2分鐘。調(diào)pH在未調(diào)pH前，先用精密p

6、H試紙測量培養(yǎng)基的原始pH。如果偏酸，用滴管向培養(yǎng)基中逐滴加入Imol/LNaOH，邊加邊攪拌，并隨時(shí)用pH試紙測其pH，直至pH達(dá)7.6。反之，用lmol/LHCl調(diào)節(jié)。l.2.4細(xì)菌總數(shù)測定1.2.4.1加水：滅菌吸管吸取1mL水樣，注入其中一套滅菌的培養(yǎng)皿中。共做2個(gè)培養(yǎng)皿。124.2加培養(yǎng)基：分別傾注約15mL已溶化并冷卻到45C左右的牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基，并立即在桌上作平面搖動(dòng)，使自來水水樣與培養(yǎng)基充分混勻?？瞻讓φ眨毫砣∫豢盏臏缇囵B(yǎng)皿，不加水樣，直接傾注牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基15mL，作空白對照。1.2.4.4培養(yǎng)計(jì)數(shù)：待培養(yǎng)基凝固后，倒置，放于37C恒溫箱中，培養(yǎng)24小時(shí)，然

7、后進(jìn)行菌落計(jì)數(shù)。兩個(gè)平板的平均菌落數(shù)即為1mL自來水的細(xì)菌總數(shù)。結(jié)果菌落照片實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)表自來水中菌落數(shù)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)平板序號2對照組平均值菌落數(shù)目（個(gè)）67831560根據(jù)國家衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)可飲用水中的細(xì)菌個(gè)數(shù)為每毫升100個(gè)，而此自來水中的細(xì)菌個(gè)數(shù)為60個(gè)，低于國家標(biāo)準(zhǔn)，故該自來水水質(zhì)合格。菌落記數(shù)方法6每個(gè)實(shí)驗(yàn)組的菌落數(shù)減去對照組的菌落數(shù)，所得值相加除以2，就是菌落數(shù)的平均數(shù)先計(jì)算相同稀釋度的平均菌落數(shù)，若其中一個(gè)平板有較大片狀菌苔生長時(shí)，則不應(yīng)采用，而應(yīng)以片狀菌苔生長的平板作為該稀釋度的平均菌落數(shù)。若片狀菌苔的大小不到平板的一半，而其余的一半菌落分布又很均勻時(shí)，則可將此一半的菌落數(shù)乘2以代表全平板的菌

8、落數(shù)，然后再計(jì)算該稀釋度的平均菌落數(shù)。首先選擇平均菌落數(shù)在30300之間的，則只有一個(gè)稀釋度的平均菌落數(shù)符合此范圍時(shí)，則以該平均菌落數(shù)乘其稀釋倍數(shù)即為該水樣的菌落總數(shù)。若有兩個(gè)稀釋度的平均菌落數(shù)均30300之間，則按兩者菌落總數(shù)之比值來決定。若其比值小于2，應(yīng)采取兩者的平均數(shù)；若大于2，則取其中較小的菌落總數(shù)。若所有稀釋度的平均菌落數(shù)均大于300，則應(yīng)按稀釋度最高的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)。若所有稀釋度的平均菌落數(shù)均小于30，則應(yīng)按稀釋度最低的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)。若所有稀釋度的平均菌落數(shù)均不在30300之間，則以最近300或30的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)。結(jié)果分析與討論分析對照組中的菌數(shù)應(yīng)為0

9、個(gè)，但實(shí)驗(yàn)測得數(shù)據(jù)為15個(gè)，這主要是因?yàn)橛须s菌混入，雜菌來源可能：培養(yǎng)皿、三角燒瓶、吸管等儀器滅菌不充分；滅菌后在空氣中放置又落入雜菌；無菌操作技術(shù)不當(dāng)，培養(yǎng)基傾入培養(yǎng)皿后沒有立即加蓋；配置培養(yǎng)基時(shí)反復(fù)升降溫，使一些雜菌產(chǎn)生抗性8由于國家飲用水標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定，飲用水中細(xì)菌總數(shù)每毫升不超過100個(gè)。但是實(shí)驗(yàn)組2中的菌落數(shù)目遠(yuǎn)遠(yuǎn)少于100個(gè)，可能是由于倒培養(yǎng)基時(shí)溫度較高殺死了部分的細(xì)菌9，使得實(shí)驗(yàn)的結(jié)果有較大的出入。(3)依據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果可判斷實(shí)驗(yàn)室中的自來水符合國家衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)的要求。討論由于該實(shí)驗(yàn)存在著不準(zhǔn)確的因素比如在數(shù)菌落時(shí)，對于一些形態(tài)較小的菌落，我們就忽略不計(jì)。菌落太小且又處于培養(yǎng)基內(nèi)部這樣就不能觀

10、察到菌落從而影響結(jié)果，又如在培養(yǎng)過程中由于細(xì)菌之間的相互抑制也會使計(jì)數(shù)菌落減少10。因此，只有我們在不需要精確的情況下才可使用此方法。雖然水中存在大量的細(xì)菌且種類繁多，但由于牛肉膏蛋白胨所提供的生長條件的限制，培養(yǎng)基中所得的細(xì)菌群落較單一為大腸桿菌，呈圓片狀6。本實(shí)驗(yàn)的成敗在于滅菌、無菌操作技術(shù)、培養(yǎng)基的溫度等方面是否操作正確，所以，今后要更加注意其方法及原理。4實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)本實(shí)驗(yàn)成功的關(guān)鍵在于：實(shí)驗(yàn)時(shí)，應(yīng)避免雜菌的污染，操作要規(guī)范，如接自來水時(shí)一定要讓自來水流5min，然后再采集水樣。向培養(yǎng)皿中傾注牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基時(shí)應(yīng)降溫至45C，以免溫度過高燙死細(xì)菌。倒置培養(yǎng)基前一定要將自來水搖勻，

11、否則會影響觀察的效果，計(jì)數(shù)比較難。培養(yǎng)基一定要倒置，這樣絕大多數(shù)的細(xì)菌著生在培養(yǎng)基表面。這是由于菌種在固體培養(yǎng)基上借助重力作用而形成的，有利于菌落計(jì)數(shù)。參考文獻(xiàn)陳聲明劉麗麗.微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)研究方法.北京：人民教育出版社，1982沈萍陳向東等.微生物學(xué)(第二版).北京：高等教育出版社.1999李根生.干燥培養(yǎng)基恩德制造及應(yīng)用.上海：上?？茖W(xué)技術(shù)文獻(xiàn)出版社.1994郝士海.現(xiàn)代細(xì)菌學(xué)培養(yǎng)基和生化試驗(yàn)手冊.北京：中國科學(xué)技術(shù)出版社.1992羅雪云等.食品衛(wèi)生微生物檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)手冊.北京：中國標(biāo)準(zhǔn)出版社.1995沈萍陳向東等.微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)(第四版)北京：高等教育出版社.1999周德慶等.微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)教程上海

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13、alenvironment.Themainsourceofmicroorganismsinwateris:waternaturewaterorganisms(suchasthephotosyntheticalgae),fromsoilrunoff,rainfall,andexternalbacteriaandpollutantsfromsewageandotherhumanandanimalexcreta1.Watermainlyfromhumanandanimalpathogensofinfectiouswaste.Ourdrinkingwaterhealthstandards(GB5749

14、-85)providesthetotalnumberofbacteriapermilliliterofwaterat37Cfor24hnomorethan100.Theso-calledtotalnumberofbacteria,watersamplesthatcontained1mLofthetotalnumberofbacterialcolonies.Itisgenerallytheordinarybeefextractpeptoneagarinensuringasterileenvironment,totakewatersamplesproducedbymediumplate.Colon

15、ycountingmethodbycountingthebacteriameasuredbythenumberofexperimentsweretodeterminethewaterqualityofnationaldrinkingwaterstandards2.Withaplateofwatermeasuredbytotalnumberofbacteriacolonies,byobservingtheresultsareasfollows:observedunderamicroscopeandawiderangeoflargecolonies,themeanvalueobtained,thetotalnumberofbacteriaintapwaterwas765/mL.Microbiologicalexaminationofwater,ensuringthesafetyofdrinkingwaterandcontrolofinfectiousdiseasesisofgreatsignificance,butalsoanimportantindicatorofwaterqualityevaluation.Keywo