唾液淀粉酶最適PH的測(cè)定2013級(jí)11班(共8頁)

1、唾液(tuy)淀粉酶最適PH的測(cè)定摘要(zhiyo)： 本實(shí)驗(yàn)的目的是掌握測(cè)量 pH 對(duì)酶活力(hul)影響的基本原理和方法，掌握用碘-淀粉比色法的方法測(cè)定唾液淀粉酶的最適PH值。學(xué)會(huì)常用的緩沖溶液的配制方法。進(jìn)一步熟悉分光光度計(jì)的使用。影響酶反應(yīng)活力的因素很多，影響胞外酶的因素主要包括 PH 值、溫度和金屬離子、抑制劑及其他小分子，以及酶濃度等因素。在溫度、酶濃 度相同的條件下，酶的活力在最適 pH 處達(dá)到最大，遠(yuǎn)離則變小。在底物過量的 條件下，相同時(shí)間內(nèi)，在溫度、酶濃度相同的條件下，接近最適 pH 的反應(yīng)體系 中消耗淀粉的量最大，剩余淀粉與過量碘液生成的顏色越淺，吸光度越小，利用 分光光度

2、計(jì)測(cè)出各管的吸光度后， 取處于升高與降低趨勢(shì)之間的較小吸光度范圍 對(duì)應(yīng)的 pH 值即為唾液淀粉酶的最適 pH。關(guān)鍵詞：唾液淀粉酶、酶活性測(cè)定。前言：生物體內(nèi)的酶是對(duì)其特異底物起高效催化作用的蛋白質(zhì)和核酸，前者是機(jī)體內(nèi)催化各種代謝反應(yīng)最重要的催化劑。酶分子中的許多極性基團(tuán)。在不同的PH條件下解離狀態(tài)不同，其所帶電荷的種類和數(shù)量也各不相同，酶活性中心的某些必需基團(tuán)往往僅在某一解離狀態(tài)時(shí)才最容易同底物結(jié)合或具有最大的催化活性。許多具有可解離基團(tuán)的底物和輔酶的荷電狀態(tài)也受PH改變的影響，從而影響酶對(duì)它們的親和力。此外，PH還可以影響酶活性中心的空間構(gòu)象，從而影響酶的活性。正文(zhngwn)： 實(shí)驗(yàn)(

3、shyn)原理：1.酶催化活性最高時(shí)反應(yīng)體系(tx)的PH值稱為酶的最適PH值。人體正常唾液PH值為6.67.1，吸光度值在6.08.0范圍內(nèi)隨著PH的增大先減小后增大。2.在底物足量的條件下，相同時(shí)間內(nèi)，在溫度、酶濃度相同的條件下，接近最適PH的反應(yīng)體系中消耗淀粉的量最大，剩余淀粉與碘液生成的顏色越淺，在660mm吸光度A越小，利用分光光度計(jì)測(cè)出各管的吸光度后，以PH為橫坐標(biāo)，吸光度值為縱坐標(biāo)，曲線上最低點(diǎn)所對(duì)應(yīng)的PH值即為唾液淀粉酶的最適PH值。實(shí)驗(yàn)材料： 移液槍，試管，吸量管（5ml，10ml），試管架，小燒杯，722型分光光度計(jì)，恒溫箱，洗耳球 試劑：0.01mol/l碘液，0.2mo

4、l/l磷酸氫二鈉，0.2mol/l磷酸二氫鈉，淀粉溶液，唾液，蒸餾水實(shí)驗(yàn)步驟：緩沖溶液的配制，取七支試管進(jìn)行編號(hào)1-7，按下表加入試劑 試管1234567PH6.26.46.66.87.07.27.40.2mol/lNa2HPO4（ml）0.5 0.71.01.21.51.82.00.2mol/lNaH2PO4（ml）2.01.81.51.31.00.70.5蒸餾水（ml）2.52.52.52.52.52.52.5唾液的采集：先給備取者一杯純凈水讓其漱口(sh ku)，將漱口液吐掉,口含蒸餾水，適宜時(shí)間后將蒸餾水連同唾液一同放置于小燒杯中，置于冰水中冷卻。唾液(tuy)稀釋 取4支試管，進(jìn)行編

5、號(hào)1-6，按下表加入試劑 試管編號(hào)1234唾液（ml）1.00.50.40.25蒸餾水（ml）4.04.54.64.75稀釋倍數(shù)5101520 取出另取4支試管進(jìn)行編號(hào)1-4，各取上述稀釋唾液1ml加入相應(yīng)編號(hào)的試管，同時(shí)各加入1ml的0.02%的淀粉溶液，振蕩混勻后放入37度恒溫水浴5分鐘后取出，滴加2-3滴碘液，混勻，觀察顏色，選取(xunq)顏色變化適中的一支，記錄稀釋倍數(shù)，再多配5ml該稀釋倍數(shù)的稀釋唾液。另取七支試管編號(hào)(bin ho)1-7.分別按下表加入試劑 試管編號(hào)12345670.02%淀粉溶液（ml）1.01.01.01.01.01.01.02ml緩沖溶液PH6.26.46

6、.66.87.07.27.4 混勻，37度恒溫水浴五分鐘稀釋唾液（ml）1.01.01.01.01.01.01.0振蕩混勻，37度恒溫水浴3分鐘取出，各加入2-3滴碘液，以蒸餾水作為對(duì)照，測(cè)吸光度值A(chǔ)6600.1630.0610.4081.3011.0221.8532.096在坐標(biāo)紙上，以PH為橫坐標(biāo)，吸光度(gungd)值為縱坐標(biāo)，曲線上最低點(diǎn)所對(duì)應(yīng)的PH即為唾液淀粉酶的最適PH。作出吸光度的變化(binhu)曲線：因?yàn)橥僖旱矸勖傅幕钚允?.2到7.0，吸光度越低，則底物淀粉被分解的數(shù)量越多，酶活性越高，由上圖數(shù)據(jù)(shj)可知，測(cè)得的唾液活性的最是pH是6.4。討論(toln)：本實(shí)驗(yàn)中，

7、當(dāng)唾液淀粉酶的活性最大時(shí)，淀粉被分解得最多，剩余底物的量最少，A值最小，過酸或過堿均會(huì)抑制酶的活性，使之分解的底物減少，A值增大。由所作曲線可知唾液淀粉酶的最適pH值在6.4左右。在PH6.4時(shí)唾液淀粉酶的活性隨PH的升高而增大，在PH=6.4達(dá)到最大值，在PH6.4時(shí)唾液淀粉酶的活性隨PH的升高而降低，因此唾液淀粉酶的最適pH值為6.4，如果過酸或過堿均會(huì)降低酶的催化活性。最適PH不是酶的特征性常數(shù)，它受底物濃度、緩沖液種類與濃度以及酶純度等因素的影響。溶液PH高于或低于最適PH時(shí)，酶活性降低，遠(yuǎn)離最適PH時(shí)還會(huì)導(dǎo)致酶變性。在測(cè)定酶活性時(shí)，應(yīng)選用適宜的緩沖液以保持酶活性的相對(duì)恒定。思考(sk

8、o)：酶是生物體內(nèi)具有催化功能(gngnng)的蛋白質(zhì)，也叫生物催化劑。生物體內(nèi)存在多種多樣的酶， 從而使生物體在溫和的條件下能夠迅速完成復(fù)雜的代謝過程。除了(ch le)pH對(duì)酶活性有影響，酶活性還受其他因素的影響。酶活力受環(huán)境 pH 值的影響極為顯著。通常各種酶只有在一定的 pH 值范圍內(nèi)才表現(xiàn)出 活力。一種酶表現(xiàn)活力最高時(shí)的 pH 值，稱為該酶的最適 pH。低于或高于最適 pH 時(shí)，酶的 活性逐漸降低。不同酶的最適 pH 不同。酶的最適 pH 也受底物性質(zhì)和緩沖液性質(zhì)的影響。 酶的催化作用受溫度的影響也很大。在一定溫度范圍內(nèi)，隨著溫度的升高，酶的熱變性不顯著，而酶促反應(yīng)速度增加，直至達(dá)到

9、最大值。反應(yīng)速度達(dá)到最大值時(shí)的溫度稱為酶作用 的最適溫度。當(dāng)溫度超過酶的最適溫度時(shí)，酶促反應(yīng)急劇下降，直至完全停止。酶的活性受到某些物質(zhì)的影響，有些物質(zhì)能使酶的活性增加，稱為酶的激活劑；有些物質(zhì)能使酶的活性降低，稱為酶的抑制劑。研究表明，很少量的激活劑或抑制劑就會(huì)影響酶的活性，而且常具有特異性。另外，激活劑和抑制劑不是絕對(duì)的，有些物質(zhì)在低濃度時(shí)為某種 酶的激活劑，而在高濃度時(shí)則為該酶的抑制劑。其中氯離子是唾液淀粉酶的激活劑， 能加速唾液淀粉酶催化淀粉水解的速率， 而銅離子則為唾液淀粉酶的抑制劑， 能降低唾液淀 粉酶催化淀粉水解的速率。 本實(shí)驗(yàn)分別以不同 pH 值條件下讓唾液淀粉酶作用于淀粉，并

10、用碘試劑檢查酶促淀粉的水解程度，來說明pH對(duì)酶活力的影響。 直鏈淀粉遇碘時(shí)呈藍(lán)色，支鏈淀粉遇碘時(shí)呈紫色。在淀粉酶作用下，淀粉逐步水解成各 種不同大小分子的糊精和麥芽糖，它們遇碘呈不同顏色。糊精按分子從大到小的順序，遇碘 可呈藍(lán)色、紫色、暗褐和紅色，最小的糊精和麥芽糖遇碘不呈現(xiàn)顏色。因此淀粉被淀粉酶水解的程度可由淀粉水解混合物遇碘呈現(xiàn)的顏色來判斷。根據(jù)淀粉被水解的程度來說明淀粉酶的活性大小。參考文獻(xiàn)： 1 許冰 , 原媛 , 趙文獻(xiàn) . pH 值對(duì)酶活性影響(yngxing)的實(shí)驗(yàn)觀察J . 臨床合理用藥雜志，2010 , 3 （10） ：35-35 . 2 查錫良，周春燕 . 生物化學(xué)(shn

11、 w hu xu) M . 第七版 . 北京：人民衛(wèi)生(wishng)出版社，2010 . 3 吳耀生，周素芳。醫(yī)學(xué)生物化學(xué)與分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)指南 PH對(duì)酶促反應(yīng)的影響 P81. 4陳鐵茹，王亞杰（訥河市中醫(yī)院，黑龍江訥河161300）黑龍江醫(yī)學(xué) 5吳麗明福建醫(yī)藥學(xué)校福州350002海峽藥學(xué)2003，15（2） 6馮攸科.唾液淀粉酶活性的最適溫度質(zhì)疑J.中等醫(yī)學(xué)教育.1996(03)5許冰，原媛，趙文獻(xiàn)河北鋼鐵集團(tuán)邯鋼醫(yī)院西院,河北省邯鄲市,056003臨床合理用藥雜志 7楊玉萍.YANGYu-ping幾種環(huán)境條件對(duì)唾液淀粉酶活性的影響期刊論文-新鄉(xiāng)學(xué)院學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版 8羅紀(jì)盛生物化學(xué)簡(jiǎn)明教程，北京，高等教育出版杜，1988，9012O 9京師范大學(xué)生物系生物化學(xué)教研室，基礎(chǔ)化學(xué)實(shí)驗(yàn)，北京，高等教育出版社，1992l136 10劉恒烈生物化學(xué)，江蓖，高校出版杜，1993，4770 11聶劍初生物化學(xué)簡(jiǎn)明教程，北京，高等教育出版杜，1989，7889