實驗植物提取以及檢測

1、關(guān)于實驗植物提取及檢測第一張，PPT共三十頁，創(chuàng)作于2022年6月植物基因組 DNA的提取瓊脂糖凝膠電泳檢測第二張，PPT共三十頁，創(chuàng)作于2022年6月一 、實驗?zāi)康?學(xué)習(xí)提取和純化高等植物總DNA的方法，理解其原理。第三張，PPT共三十頁，創(chuàng)作于2022年6月脫氧核糖核酸(DNA)、核糖核酸(RNA) 與蛋白質(zhì)結(jié)合在一起以核蛋白（DNP）的形式存在。在制備核酸時通常破壞細(xì)胞壁及細(xì)胞膜來使核蛋白釋放出來。植物總DNA包括細(xì)胞核DNA和細(xì)胞核外DNA,前者存在于細(xì)胞核內(nèi)，后者存在于細(xì)胞質(zhì)中有半自主性復(fù)制活性的細(xì)胞器內(nèi)，例如線粒體DNA(mtDNA)和葉綠體DNA(ctDNA)。二、實驗原理第四張

2、，PPT共三十頁，創(chuàng)作于2022年6月第五張，PPT共三十頁，創(chuàng)作于2022年6月細(xì)胞破碎 抽提去蛋白質(zhì) 沉淀核酸基本過程第六張，PPT共三十頁，創(chuàng)作于2022年6月 機(jī)械方法： 超聲波處理法、研磨法、勻漿法； 化學(xué)試劑法：用SDS處理細(xì)胞； 酶解法： 加入溶菌酶或蝸牛酶，破壞細(xì)胞壁。 細(xì)胞破碎 第七張，PPT共三十頁，創(chuàng)作于2022年6月SDS法 SDS是有效的陰離子去垢劑, 細(xì)胞中DNA與蛋白質(zhì)之間 常借靜電引力或配位鍵結(jié)合, SDS能夠破壞這種價鍵。CTAB法 CTAB是一種陽離子去垢劑，它可以溶解膜與脂膜，使細(xì)胞中的DNA-蛋白質(zhì)復(fù)合物釋放出來，并使蛋白質(zhì)變性，使DNA與蛋白質(zhì)分離。D

3、NA提取第八張，PPT共三十頁，創(chuàng)作于2022年6月蛋白質(zhì) 常用苯酚：氯仿：異戊醇（25：24：1）或氯仿：異戊醇（24：1）抽提。RNA 常選用RNase消化 ，或是用LiCl來消除大分子的RNA。酚類物質(zhì) 提取液中加少量巰基乙醇，選取幼嫩的材料。DNA純化（去雜質(zhì)）第九張，PPT共三十頁，創(chuàng)作于2022年6月實驗材料植物葉片(去葉脈)試劑 2CTAB抽提液（CTAB、Tris-HCL、EDTA、Nacl）TE 緩沖液(pH=8.0) 氯仿：異戊醇(24:1)巰基乙醇異丙醇70%乙醇 三、材料與試劑第十張，PPT共三十頁，創(chuàng)作于2022年6月離心機(jī) 水浴鍋研缽 微量移液器儀器用具第十一張，P

4、PT共三十頁，創(chuàng)作于2022年6月移液器量程的選擇第十二張，PPT共三十頁，創(chuàng)作于2022年6月1取 2g 清洗涼干的植物幼嫩葉片于研缽中，加 入液氮，迅速研磨。將2CTAB抽提液與2ml巰基乙醇在提取前混合后于65水浴中加熱30分鐘。2將 0.5mL 研磨液轉(zhuǎn)入 1.5mL 離心管中，加入1ml CTAB提取液，置于65水浴中保溫 30min，其間顛倒混勻23次。破碎細(xì)胞3. 加入等體積氯仿：異戊醇（24:1）混合液，充分顛倒混勻20分鐘，防止成團(tuán)。8000r/min，離心 5min，取上清。抽提去蛋白4將上清液移入新的1.5mL離心管內(nèi)，加 等體積異丙醇（預(yù)冷）。顛倒混勻，可見 DNA 絮

5、狀沉淀。沉淀核酸58000r/min，離心 1min，倒掉上清液，將離心管倒置干燥。 將沉淀回溶于無菌水或 TE 緩沖液待測。四、操作步驟第十三張，PPT共三十頁，創(chuàng)作于2022年6月1)選取新鮮材料，研磨迅速徹底，研磨好的材料應(yīng)與 CTAB 抽提液充分混勻；2)若提取產(chǎn)物有顏色，可能是材料中含有較多的多酚類物質(zhì)，添加巰基乙醇（25），盡可能選取幼嫩的材料；3）收集 CTAB 與核酸形成的復(fù)合物時不要離心過度，否則沉淀再溶解難；4）為了獲得具有生物活性的天然核酸，在分離制備過程中必須采用溫和的條件，避免過酸過堿、劇烈地攪拌，防止熱變性，同時還要避免核酸降解酶類的降解。五、注意事項第十四張，PP

6、T共三十頁，創(chuàng)作于2022年6月六、作業(yè) 為了獲得高質(zhì)量的植物總DNA，在分離提取過程中應(yīng)注意那些問題？第十五張，PPT共三十頁，創(chuàng)作于2022年6月瓊脂糖凝膠電泳檢測DNA一、實驗?zāi)康?學(xué)習(xí)瓊脂糖凝膠電泳檢測DNA的方法和技術(shù)。第十六張，PPT共三十頁，創(chuàng)作于2022年6月DNA分子在高于等電點(diǎn)的PH溶液中帶負(fù)電荷，在電場中向正極移動。在一定電場強(qiáng)度下，DNA分子的遷移速度與相對分子質(zhì)量的對數(shù)成反比。二、實驗原理第十七張，PPT共三十頁，創(chuàng)作于2022年6月瓊脂糖是一種線性多糖聚合物。濃度越高，孔隙越小，其分辨能力就越強(qiáng)。瓊脂糖濃度(%)線型DNA分子的分離范圍(Kb)0.35600.612

7、00.70.8100.90.571.20.961.50.2312.00.12第十八張，PPT共三十頁，創(chuàng)作于2022年6月三、實驗儀器和試劑儀器電泳儀電泳槽灌膠模具等第十九張，PPT共三十頁，創(chuàng)作于2022年6月Tris-硼酸（TBE） Tris-乙酸（TAE） Tris-磷酸（TPE）常用電泳緩沖液 第二十張，PPT共三十頁，創(chuàng)作于2022年6月電泳指示劑溴酚蘭在堿性液體中呈紫蘭色，一般與蔗糖、甘油或聚蔗糖400組成上樣緩沖液。 作用：增加樣品比重，以確保DNA均勻沉入加樣孔內(nèi)。形成肉眼可見的指示帶，預(yù)測核酸電泳的速度和位置。使樣品呈色，使加樣操作更方便。上樣緩沖液第二十一張，PPT共三十頁

8、，創(chuàng)作于2022年6月溴化乙錠（EB） 是一種熒光染料，EB分子可嵌入核酸雙鏈的堿基對之間，在紫外線激發(fā)下，發(fā)出紅色熒光。其熒光強(qiáng)度與DNA的含量成正比。據(jù)此可粗略估計樣品DNA濃度。瓊脂糖凝膠EB染色，肉眼可見核酸電泳帶，其DNA量一般5ng。 EB是致癌物質(zhì)，切勿用手接觸，更不要污染環(huán)境。GoldViewTM: 是一種可代替溴化乙錠（EB）的新型核酸染料，采用瓊脂糖電泳檢測DNA時，GoldViewTM與核酸結(jié)合后能產(chǎn)生很強(qiáng)的熒光信號，其靈敏度與EB相當(dāng)，使用方法與之完全相同。在紫外透射光下雙鏈DNA呈現(xiàn)綠色熒光，而單鏈DNA呈紅色熒光。GoldView不僅能染DNA，也可用于染RNA。

9、核酸染色劑第二十二張，PPT共三十頁，創(chuàng)作于2022年6月DNA分子量標(biāo)準(zhǔn)第二十三張，PPT共三十頁，創(chuàng)作于2022年6月不同種類DNA Marker第二十四張，PPT共三十頁，創(chuàng)作于2022年6月1.凝膠制備 制備1%瓊脂糖凝膠。稱取0.8g瓊脂糖加入 80mL 1TAE，加熱至瓊脂糖全部熔化，冷卻至50-60 時，加入 EB或GoldViewTM 10ul。緩慢倒入膠板，待膠凝固后拔出梳子。2.加樣 取15l DNA樣液與 2l 上樣 buffeer 混勻，用微量移液器小心加入樣品槽。3.電泳 接通電源，切記靠近加樣孔的一端為負(fù)，電壓為15V/cm（長度以兩個電極之間的距離計算）,待溴酚蘭移動到一定位置，停止電泳。4.觀察拍照四、操作步驟第二十五張，