細菌藥物敏感試驗的標準操作程序（藥敏SOP文件）

1、廣東省中醫(yī)院檢驗科細菌藥物敏感試驗的標準操作程序一、方法改進Kirby-Bauer法二、原理 將含有抗菌藥物的紙片貼在已接種待測菌的瓊脂平板上?？咕幬镌诃傊瑑?nèi)由紙片中心向四周擴散，其濃度呈梯度遞減。經(jīng)過規(guī)定時間、條件的孵育培養(yǎng)后，在紙片周圍一定距離內(nèi)細菌生長受到抑制，形成透明的抑菌圈。其直徑大小與藥物濃度的對數(shù)呈線性關(guān)系。抑菌圈的大小反映待試菌對測定藥物的敏感程度。三、菌株 各種標本別離出的待測病原菌。四、儀器設(shè)備普通培養(yǎng)箱： CO2培養(yǎng)箱：五、實驗材料培養(yǎng)基：M-H瓊脂商業(yè)成品：用于非苛養(yǎng)菌的藥物敏感性試驗。5%脫纖維羊血M-H瓊脂商業(yè)成品：用于苛養(yǎng)菌的藥物敏感性試驗。HTM：用于嗜血桿菌

2、的藥物敏感性試驗。試劑：無菌生理鹽水自制比濁儀法國生物梅里埃公司生產(chǎn)或麥氏標準比濁管商業(yè)成品抗菌藥物紙片：品牌： 英國OXOID儲存條件：-20冰箱使用期限：有效期內(nèi)使用，常用紙片開啟后60天有效。不常用的紙片，開啟后裝在含有枯燥劑的密封盒內(nèi)，-20冰箱保存，有效期內(nèi)使用。4其他：無菌棉拭、紙片分配器、鑷子、游標卡尺或毫米尺、接種環(huán)。六、標準操作步驟 在平板上挑取適量已分純菌落，將細菌溶于0.9%無菌生理鹽水中，用比濁儀或0.5麥氏標準比濁管將菌液濃度調(diào)整至0.5麥氏單位，含菌量1-2108cfu/L。測試平板接種：用無菌棉簽浸入調(diào)節(jié)好的細菌懸液，將多余細菌懸液在管壁擠出，在平板上反復(fù)涂布三次

3、，每次旋轉(zhuǎn)平皿60，最后沿平板周圍涂兩圈，保證涂布均勻。平板在室溫下枯燥3-5min后貼紙片：無論用手工貼或紙片分配器，必須使紙片完全與瓊脂外表接觸，各紙片中心相距應(yīng)大于24mm，紙片距平板內(nèi)緣應(yīng)大于15mm，一旦貼在某一位置，不應(yīng)變動位置。15分鐘后將貼有紙片的平板置35孵育18-24小時測鏈球菌的敏感性，應(yīng)5%CO2 35孵育18-24小時。結(jié)果判讀：用游標卡尺或毫米尺量取抑菌圈直徑以mm為單位，根據(jù)CLSI標準，按敏感S、中介I、耐藥R報告。以沒有明顯肉眼可見生長物區(qū)域為抑菌圈邊絕緣，極其細小菌落生長可以忽略不計。由于培養(yǎng)基內(nèi)抗藥成份使其對甲氧芐啶和磺胺甲噁唑引起的輕微細菌生長，生長層小

4、于20%可以忽略不計。七、藥敏紙片的選擇及判斷標準：我們以CLSI/NCCLS修訂的選藥分組為根本標準，同時參照國內(nèi)知名醫(yī)院的經(jīng)驗來進行藥物敏感試驗。腸肝菌科細菌抗菌藥物選擇，見表1。銅綠假單胞菌抗菌藥物選擇，見表2。不動桿菌屬細菌抗菌藥物選擇，見表3。嗜麥芽窄食單胞菌和伯克霍德菌抗菌藥物選擇，見表4。葡萄球菌屬細菌抗菌藥物選擇，見表5。腸球菌屬細菌抗菌藥物選擇，見表6。肺炎鏈球菌屬細菌抗菌藥物選擇，見表7。除肺炎鏈球菌之外的鏈球菌屬細菌抗菌藥物選擇，見表8。沙門氏、志賀氏菌抗菌藥物選擇，見表9嗜血桿菌屬抗菌藥物選擇，見表10腸桿菌科及不動桿菌屬細菌紙片法藥敏判斷標準，見表11。CLSI/NC

5、CLS大腸埃希菌、肺炎克雷伯菌、產(chǎn)酸克雷伯菌、奇異變形桿菌*ESBLs檢測的篩選和確證試驗，見表12。銅綠假單胞菌等糖不發(fā)酵革蘭陰性桿菌紙片法藥敏判斷標準，見表13。葡萄球菌屬細菌紙片法藥敏判斷標準，見表14。CLSI/NCCLS紙片擴散法*檢測葡萄球菌中由mecA基因介導的耐藥，見表15。腸球菌紙片法藥敏判斷標準，見表16。肺炎鏈球菌紙片法藥敏判斷標準，見表17。除肺炎鏈球菌以外的其他鏈球菌紙片法藥敏判斷標準，見表18。沙門菌、志賀菌紙片法藥敏判斷標準，見表19。嗜血桿菌屬紙片法藥敏判斷標準，見表20。紙片法藥敏標準菌株質(zhì)控范圍，見表21。表1 腸桿菌科細菌抗菌藥物選擇抗菌藥物ABCU抗菌藥

6、物ABCU阿米卡星亞胺培南慶大霉素美羅培南氨芐西林環(huán)丙沙星哌拉西林SXT-TMP頭孢唑啉頭孢西丁頭孢克羅氨芐西林/舒巴坦頭孢丙烯頭孢哌酮/舒巴坦頭孢呋辛哌拉西林/他唑巴坦頭孢噻肟頭孢噻肟/克拉維酸頭孢吡肟頭孢他啶/克拉維酸頭孢他啶呋喃妥因ESBLs表2 銅綠假單胞菌抗菌藥物選擇抗菌藥物ABCU抗菌藥物ABCU阿米卡星亞胺培南慶大霉素美羅培南哌拉西林環(huán)丙沙星頭孢哌酮氧氟沙星氨曲南替卡西林/克拉維酸頭孢他啶頭孢哌酮/舒巴坦頭孢吡肟哌拉西林/他唑巴坦表3 不動桿菌屬細菌抗菌藥物選擇抗菌藥物ABCU抗菌藥物ABCU阿米卡星亞胺培南慶大霉素美羅培南哌拉西林環(huán)丙沙星頭孢呋辛SXT-TMP頭孢噻肟氨芐西林/

7、舒巴坦頭孢他啶頭孢哌酮/舒巴坦頭孢吡肟哌拉西林/他唑巴坦表4 嗜麥芽窄食單胞菌和洋蔥伯克霍爾德菌抗菌藥物選擇抗菌藥物ABCU抗菌藥物ABCU頭孢他啶*左氧氟沙星*美羅培南*SXT-TMP米諾環(huán)素* 為伯克霍爾德菌所選用藥物* 為嗜麥芽窄食單胞菌所選用藥物其余為兩菌共選用藥物。表5 葡萄球菌屬細菌抗菌藥物選擇抗菌藥物ABCU抗菌藥物ABCU青霉素萬古霉素慶大霉素替考拉寧苯唑西林左氧氟沙星頭孢唑啉SXT-TMP頭孢呋辛頭孢西丁克林霉素氨芐西林/舒巴坦紅霉素呋喃妥因磷霉素利福平MRS注：頭孢西丁藥敏結(jié)果可判別MR菌株，但報告時報苯唑西林耐藥或敏感。表6 腸球菌屬細菌抗菌藥物選擇抗菌藥物ABCU抗菌藥

8、物ABCU氨芐西林環(huán)丙沙星呋喃妥因慶大霉素120 ug萬古霉素紅霉素替考拉寧表7 肺炎鏈球抗菌藥物選擇抗菌藥物ABC抗菌藥物ABC青霉素E-test*氯霉素萬古霉素克林霉素紅霉素苯唑西林*左氧氟沙星頭孢丙烯* 判別PSSP及PNSP菌株。* 適用于PNSP菌株，進一步確證PSSP、PISP和PRSP。表8 除肺炎鏈球之外的鏈球菌屬細菌抗菌藥物選擇抗菌藥物ABC抗菌藥物ABC青霉素頭孢丙烯紅霉素頭孢曲松克林霉素萬古霉素左氧氟沙星表9 沙門氏、志賀氏菌抗菌藥物選擇抗菌藥物ABC抗菌藥物ABC氨芐西林環(huán)丙沙星氨芐西林/舒巴坦氯霉素頭孢曲松復(fù)方新諾明表10 嗜血桿菌屬抗菌藥物選擇抗菌藥物ABCU抗菌藥

9、物ABCU氨芐西林AMP四環(huán)素TEC頭孢他啶CAZ頭孢丙烯CPR氯霉素CHL阿齊霉素美羅培南MEM表11 CLSI/NCCLS 腸桿菌科及不動桿菌屬細菌紙片法藥敏判斷標準試驗條件：培養(yǎng)基：M-H瓊脂接種物：菌落懸浮液0.5麥氏單位培養(yǎng)條件：352，空氣，16-18小時質(zhì)控菌：大腸埃希菌 ATCC 25922大腸埃希菌 ATCC 35218用于測定-內(nèi)酰胺酶抗菌藥物紙片含量ug判斷標準mm備注阿米卡星AMC3015-16慶大霉素GEN1013-14氨芐西林AMP1014-16氨芐西林/舒巴坦AMP/SUL10/1012-14哌拉西林PIP10018-20頭孢唑啉CEZ3015-17頭孢克洛CEC

10、3015-17頭孢丙烯CPR3015-17頭孢呋辛CXM3015-17頭孢噻肟CTX3015-22頭孢他啶CAZ3015-17亞胺培南IPM1014-15環(huán)丙沙星CIP516-20呋喃妥因NIT30015-16尿液中的腸桿菌科細菌加做復(fù)方磺胺甲噁唑SMZ-TMP1.25/23.7511-15頭孢西丁FOX3015-17頭孢哌酮/舒巴坦CFP/SUL75/3516-20哌拉西林/三唑巴坦PIP/TAZ100/1018-20頭孢吡肟FEP3015-17美羅培南MEM1014-15頭孢他啶/克拉維酸CAZ/CLA30/10見注1。頭孢噻肟/克拉維酸CTX/CLA30/10見注1。注：大腸埃希菌、肺炎

11、克雷伯菌、產(chǎn)酸克雷伯菌要進行ESBLs確證試驗測定，當頭孢他啶/克拉維酸與頭孢他啶抑菌圈直徑相差5mm者，或頭孢噻肟/克拉維酸與頭孢噻肟直徑相差5mm者應(yīng)報告為產(chǎn)ESBLs，并對所有青霉素類；一、二、三代頭孢菌素類抗生素報告耐藥。如遇菌血癥或無菌體液中別離出奇異變形桿菌時，并當臨床醫(yī)生需要時亦要進行ESBLs的檢測。表12 CLSI/NCCLS大腸埃希菌、肺炎克雷伯菌、產(chǎn)酸克雷伯菌、奇異變形桿菌*ESBLs檢測的篩選和確證試驗方法初篩試驗表型確證試驗培養(yǎng)基MH瓊脂MH瓊脂抗微生物藥物紙片濃度頭孢泊肟 10g或頭孢他啶 30g或氨曲南 30g或頭孢噻肟 30g或頭孢曲松 30g或使用一種以上的藥

12、物進行篩選將會提高檢測的敏感性頭孢他啶 30g頭孢他啶/克拉維酸 30/10g和頭孢噻肟30g頭孢噻肟/克拉維酸 30/10g確證試驗要求同時做上述四種紙片接種同紙片擴散法同紙片擴散法孵育條件同紙片擴散法同紙片擴散法孵育時間同紙片擴散法同紙片擴散法結(jié)果判度頭孢泊肟抑菌圈 17mm頭孢他啶抑菌圈 22mm氨曲南抑菌圈 27mm頭孢噻肟抑菌圈 27mm頭孢曲松抑菌圈 25mm意味著可疑有ESBL的產(chǎn)生2藥中任何一個藥物，在加克拉維酸后，抑菌圈直徑與不加克拉維酸的抑菌圈相比，5mm者，判定為產(chǎn)ESBL質(zhì)控建議陰性對照：大腸埃希菌 ATCC 25922參考質(zhì)控標準，見表陽性對照：肺炎克雷伯菌 ATCC

13、 700603頭孢泊肟抑菌圈 9-16mm頭孢他啶抑菌圈 10-18mm氨曲南抑菌圈 9-17mm頭孢噻肟抑菌圈 17-25mm頭孢曲松抑菌圈 16-24mmESBLs篩選試驗中，肺炎克雷伯菌ATCC 700603作為質(zhì)評菌株；肺炎克雷伯菌ATCC 700603或大腸埃希菌ATCC 25922作為常規(guī)質(zhì)控菌株。陰性對照：大腸埃希菌ATCC 25922：加有克拉維酸的抑菌圈比沒有加克拉維酸的抑菌圈2mm。陽性對照：肺炎克雷伯菌 ATCC 700603 頭孢他啶/克拉維酸抑菌圈頭孢他啶抑菌圈5mm頭孢噻肟/克拉維酸抑菌圈頭孢噻肟抑菌圈3mmESBLs確證試驗中，肺炎克雷伯菌ATCC 700603和

14、大腸埃希菌ATCC 25922作為常規(guī)質(zhì)控菌株。*常規(guī)實驗中不推薦對奇異變形桿菌的ESBLs篩選，除非有臨床特別要求。表13CLSI/NCCLS銅綠假單胞菌等糖不發(fā)酵革蘭陰性桿菌紙片法藥敏判斷標準試驗條件：培養(yǎng)基：M-H瓊脂接種物：菌落懸浮液0.5麥氏單位培養(yǎng)條件：352，空氣，16-18小時；嗜麥芽窄食單胞菌和洋蔥伯克霍爾德菌需培養(yǎng)20-24小時。質(zhì)控菌：大腸埃希菌 ATCC 25922銅綠假單胞菌 ATCC 27853 大腸埃希菌 ATCC 35218用于測定-內(nèi)酰胺酶抗菌藥物紙片含量ug判斷標準mm備注阿米卡星AMK3015-16慶大霉素GEN1013-14哌拉西林PIP10017R ，

15、18S銅綠假單胞菌頭孢他啶CAZ3015-1716-20洋蔥伯克霍爾德菌頭孢哌酮CFP3016-20氨曲南ATM3016-21亞胺培南IPM1014-15環(huán)丙沙星CIP516-20復(fù)方磺胺甲噁唑SXT-TMP1.25/23.7511-15替卡西林/克拉維酸TIC/CLA75/1014R ，15S銅綠假單胞菌頭孢哌酮/舒巴坦CFP/SUL75/3516-20哌拉西林/三唑巴坦PIP/SUL100/1017R， 18S銅綠假單胞菌頭孢吡肟FEP3015-17美羅培南MEM1014-1516-19洋蔥伯克霍爾德菌米諾環(huán)素3015-18左氧氟沙星LEV514-16注：1非發(fā)酵細菌屬除銅綠假單胞菌、不動

16、桿菌屬細菌、嗜麥芽窄食單胞菌、洋蔥伯克霍爾德菌外，均需用稀釋法進行藥敏試驗。2銅綠假單胞菌在治療過程中易產(chǎn)生耐藥，因此在治療3-4天后需重新進行藥敏試驗。3嗜麥芽窄食單胞菌紙片法藥敏只需報告：米諾環(huán)素、左氧氟沙星、復(fù)方磺胺甲噁唑；洋蔥伯克霍爾德菌只報告：頭孢他啶、美羅培南、米諾環(huán)素、復(fù)方磺胺甲噁唑。表14CLSI/NCCLS葡萄球菌屬細菌紙片法藥敏判斷標準試驗條件：培養(yǎng)基：M-H瓊脂接種物：菌落懸浮液0.5麥氏單位培養(yǎng)條件：33-35不能超過35，空氣，16-18小時；苯唑西林、萬古霉素結(jié)果需24小時觀察結(jié)果。質(zhì)控菌：金黃色葡萄球菌 ATCC 25923大腸埃希菌 ATCC 35218用于測定

17、-內(nèi)酰胺酶抗菌藥物紙片含量ug判斷標準mm備注慶大霉素GEN3013-14青霉素PEN10units29 S，28 R頭孢西丁FOX30金葡菌、路登葡萄球菌：20 S，19 R其他凝固酶陰性葡萄球菌：25 S，24 R對頭孢西丁耐藥需向臨床報告為MR細菌，同時報告萬古霉素結(jié)果。氨芐西林/舒巴坦AMP/SUL10/1012-14頭孢唑啉CEZ3015-17頭孢呋辛CXM3015-17萬古霉素VAN3015 S培養(yǎng)24小時觀察結(jié)果紅霉素ERY1514-22克林霉素(CLI)215-20復(fù)方磺胺甲噁唑SMZ-TZP1.25/23.7511-15磷霉素(FOS)2013-15利福平(RIF)517-1

18、9替考拉寧(TEC)3011-13左氧氟沙星(LEV)514-16呋喃妥因NIT30015-16尿液標本需加做注：1對于MR的葡萄球菌，氨芐西林、頭孢菌素類和其他-內(nèi)酰胺類抗生素應(yīng)報告耐藥。2需進行克林霉素誘導試驗D-試驗檢測，假設(shè)D-試驗陽性的葡萄球菌，應(yīng)報告克林霉素耐藥。3葡萄球菌屬細菌藥敏結(jié)果要嚴格控制在33-35不能超過35。4如出現(xiàn)對萬古霉素中度敏感或耐藥的菌株需進行MIC測定。表15 CLSI/NCCLS紙片擴散法*檢測葡萄球菌中由mecA基因介導的耐藥抗菌藥物細菌抑菌圈直徑mm備注頭孢西丁30ug金黃色葡萄球菌和路登葡萄球菌1920抑菌圈直徑19必須報告苯唑西林耐藥，20報告苯唑

19、西林敏感。凝固酶陰性葡萄球菌除路登葡萄球菌2425抑菌圈直徑24必須報告苯唑西林耐藥，25報告苯唑西林敏感。* 使用標準紙片擴散法條件，必須培養(yǎng)24小時觀察結(jié)果，如果18小時出現(xiàn)耐藥可報告結(jié)果。讀取頭孢西丁結(jié)果使用反射光。克林霉素誘導試驗D-試驗原理：克林霉素誘導試驗是指使用常規(guī)藥物敏感試驗方法對紅霉素耐藥并對克林霉素耐藥的葡萄球菌屬進行的測定，又稱為D-試驗。菌株：常規(guī)別離的葡萄球菌屬細菌?？咕幬铮杭t霉素 15g克林霉素 2g質(zhì)控菌株：金黃色葡萄球菌ATCC 25923；另外可用內(nèi)局部離到的D-試驗陽性和陰性的金黃色葡萄球菌。步驟：標準紙片擴散法1根據(jù)葡萄球菌屬細菌紙片擴散法所需的培養(yǎng)基、

20、接種物和培養(yǎng)條件。2紅霉素與克林霉素紙片邊緣到邊緣距離為15-26mm。3經(jīng)過培養(yǎng)后，觀察克林霉素靠近紅霉素紙片處的區(qū)域情況。結(jié)果觀察：當克林霉素的抑菌圈在靠近紅霉素紙片處發(fā)生變形，猶如英文字母“D時，稱為D-試驗陽性。結(jié)果報告：當D-試驗陽性，需向臨床報告克林霉素耐藥。備注：測克林霉素誘導型耐藥的D形試驗擴大到溶血鏈球菌A、B、C、D群和來自陰道及尿的B群鏈球菌。細節(jié)和葡萄球菌的類似。孕婦圍產(chǎn)期對B群鏈球菌預(yù)防用藥時選青霉素，氨芐西林，過敏時低危孕婦可用頭孢唑林，高危孕婦就要選克林霉素和紅霉素，但最近出現(xiàn)紅霉素及克林霉素的耐藥株，所以用藥前要有這兩藥的藥敏結(jié)果。在美國A群鏈球菌耐紅霉素的有1

21、0%，耐克林霉素的有7%，B群鏈球菌耐紅霉素的有25%，耐克林霉素的有15%。表16CLSI/NCCLS腸球菌紙片法藥敏判斷標準試驗條件：培養(yǎng)基：M-H瓊脂接種物：菌落懸浮液0.5麥氏單位培養(yǎng)條件：352，空氣，16-18小時；萬古霉素24小時觀察結(jié)果。質(zhì)控菌：金黃色葡萄球菌 ATCC 25923抗菌藥物紙片含量ug判斷標準mm備注慶大霉素GEN1207-9氨芐西林AMP1016R， 17S環(huán)丙沙星CIP516-20萬古霉素VAN3015-16紅霉素ERY1514-22呋喃妥因FUR30015-16替考拉寧TEC3011-13VRE增做如下藥敏：氯霉素CHL3013-17四環(huán)素TEC3015-

22、18磷霉素FOS2013-15利福平RIF517-19注：1當進行萬古霉素對腸球菌藥敏試驗時,藥敏平皿應(yīng)培育24小時,并用透射光觀察結(jié)果。2當萬古霉素抑制圈內(nèi)出現(xiàn)薄霧狀或任何生長現(xiàn)象均表示耐藥，如出現(xiàn)中介值和耐藥菌株需進行VRE菌株確認。表17CLSI/NCCLS肺炎鏈球菌紙片法藥敏判斷標準試驗條件：培養(yǎng)基：5%羊血M-H瓊脂接種物：菌落懸浮液0.5麥氏單位培養(yǎng)條件：352，5%CO2，20-24小時。 質(zhì)控菌：肺炎鏈球菌 ATCC 49619抗菌藥物紙片含量ug判斷標準mm備注青霉素1 ug苯唑西林20見注1。紅霉素1516-20克林霉素216-18左氧氟沙星514-16頭孢丙烯3015-1

23、7PISP、PRSP需用E-test方法增做如下藥敏：青霉素見注2頭孢曲松0.5 ug/ml1 ug/ml腦脊液標本非腦脊液標本萬古霉素1 ug/ml美羅培南0.25 ug/ml注：1當苯唑西林抑菌圈直徑19mm時，需加做青霉素E-test，確證PSSP、PISP、PRSP。2青霉素MIC：0.06 ug/mlPSSP0.125-1 ug/mlPISP2 ug/mlPRSP表18CLSI/NCCLS除肺炎鏈球菌以外的其他鏈球菌紙片法藥敏判斷標準試驗條件：培養(yǎng)基：5%羊血M-H瓊脂接種物：菌落懸浮液0.5麥氏單位培養(yǎng)條件：352，5%CO2，20-24小時。 質(zhì)控菌：肺炎鏈球菌 ATCC 496

24、19抗菌藥物紙片含量ug判斷標準mm備注青霉素GEN10units24紅霉素ERY1516-20克林霉素CLI216-18左氧氟沙星LEV514-18頭孢丙烯CFP3015-17頭孢曲松CRO302425-26-溶血-溶血萬古霉素(VAN)3017注：-溶血鏈球菌A、B、C、G群和來自陰道和尿液的B群鏈球菌應(yīng)測紅霉素誘導耐藥試驗D-試驗。假設(shè)D-試驗陽性應(yīng)報告臨床克林霉素耐藥。鏈球菌D-試驗方法同葡萄球菌相同，紅霉素紙片與克林霉素紙片邊緣12mm。表19 CLSI/NCCLS沙門菌、志賀菌紙片法藥敏判斷標準試驗條件：培養(yǎng)基：M-H瓊脂接種物：菌落懸浮液0.5麥氏單位培養(yǎng)條件：352，空氣，16

25、-18小時質(zhì)控菌：大腸埃希菌 ATCC 25922大腸埃希菌 ATCC 35218用于測定-內(nèi)酰胺酶抗菌藥物紙片含量ug判斷標準備注氨芐西林AMP1014-16氨芐西林/舒巴坦AMP/SUL10/1012-14頭孢曲松CRO3014-20注2環(huán)丙沙星CIP516-20氯霉素CHL3013-17復(fù)方磺胺甲噁唑SXT1.25/23.7511-15注：對于腸道內(nèi)沙門菌、志賀菌只需做氨芐西林、一種喹諾酮類、復(fù)方磺胺甲噁唑，并作為常規(guī)報告。但對于腸道外沙門菌需做氯霉素和一種三代頭孢菌素，并報告。對于16歲骨骼系統(tǒng)未發(fā)育完全的小兒應(yīng)報頭孢曲松的藥敏結(jié)果，不報環(huán)丙沙星和氯霉素。表20CLSI/NCCLS嗜血

26、桿菌屬紙片法藥敏判斷標準試驗條件：培養(yǎng)基：嗜血桿菌試驗培養(yǎng)基(HTM)接種物：菌落懸浮液0.5麥氏單位培養(yǎng)條件：352，5%CO2，16-18小時。 質(zhì)控菌：流感嗜血桿菌 ATCC 49247流感嗜血桿菌 ATCC 49766大腸埃希菌ATCC35218(測試阿西林/克拉維酸時)抗菌藥物紙片含量ug判斷標準mm備注氨芐西林AMP1019-21頭孢他啶CAZ3026氯霉素CHL3026-28美羅培南MEM1020四環(huán)素TEC3026-28頭孢丙烯CPR3015-17阿齊霉素1512藥敏結(jié)果修正規(guī)那么：美國NCCLS藥敏規(guī)那么指出，耐苯唑西林的金黃色葡萄球菌MRSA或耐苯唑西林的凝固酶陰性的葡萄球

27、菌MRCNS應(yīng)報告對所有頭孢類和其他-內(nèi)酰胺類如阿莫西林/克拉維酸，氨芐西林/舒巴坦耐藥。產(chǎn)超廣譜-內(nèi)酰胺酶ESBLs的革蘭陰性桿菌，應(yīng)報對所有三代頭孢菌素和氨曲南耐藥。耐甲氧西林葡萄球菌MRS的檢測：用30g頭孢西丁紙片擴散法確證。金黃色葡萄球菌的頭孢西丁抑菌圈直徑19mm，應(yīng)報告苯唑西林耐藥，頭孢西丁抑菌圈直徑20mm，報告苯唑西林敏感；凝固酶陰性葡萄球菌的頭孢西丁抑菌圈直徑24mm，應(yīng)報告苯唑西林耐藥，頭孢西丁抑菌圈直徑25mm，報告苯唑西林敏感。ESBLs檢測的篩選和確診試驗：CLSI/NCCLS規(guī)定肺炎克雷伯菌、產(chǎn)酸克雷伯菌、大腸埃希菌、奇異變形桿菌ESBLs的篩選試驗和確證試驗表1

28、2。目前，NCCLS推薦的紙片擴散法或MIC法是世界許多國家用于檢測ESBLs的表型標準方法。這兩個方法僅適用于肺炎克雷伯菌、產(chǎn)酸克雷伯菌、大腸埃希菌及奇異變形桿菌。當菌株產(chǎn)ESBLs時，不管其體外藥敏試驗是否敏感，均應(yīng)報告為對所有超廣譜頭孢菌素和氨曲南耐藥。ESBLs菌株的報告凡ESBLs菌株必須向臨床報告。應(yīng)注明ESBLs菌株對所有的青霉素類、頭孢菌素類抗生素和氨曲南耐藥。如實報告頭孢哌酮/舒巴坦SCF、哌拉西林/他唑巴坦TZP、替卡西林/克拉維酸TIM和亞胺培南IPM藥敏結(jié)果。臨床意義敏感S：表示被測細菌引起的感染，除禁忌癥外，可用該抗生素常用劑量而到達治療目的。中介I：表示被測菌株可通

29、過劑量受到抑制，或在藥物被生理性濃集的部位受抑制。由于微小的技術(shù)因素失控可以對結(jié)果解釋錯誤，所以這范圍只是抑菌環(huán)直徑介于敏感和耐藥之間的緩沖域。抑菌環(huán)落入中介范圍，其意義不明確，如果沒有其它可以替代的藥物，應(yīng)重復(fù)或再以稀釋法測定MIC。耐藥R：被測菌不能被該抗生素的常用劑量在組織內(nèi)或血液中的濃度到達抑制作用，且不管其劑量大小或細菌所在部位。不常見抗生素敏感試驗結(jié)果細菌或菌群類a未曾報告過的不常見表型，和/或因技術(shù)錯誤造成的結(jié)果類b在的規(guī)那么中可能不常見的表型，和/或因技術(shù)錯誤造成的結(jié)果腸桿菌科任何種亞胺培南-I或R阿米卡星-R氟喹諾酮類-R大腸埃希菌氨芐西林-SESBL確認陽性克雷伯菌屬氨芐西

30、林-SESBL確認陽性嗜麥芽窄食單胞菌碳青霉烯類-S復(fù)方磺胺甲噁唑-R腸球菌屬萬古霉素-R金黃色葡萄球菌萬古霉素-I或R凝固酶陰性葡萄球菌萬古霉素-I或R肺炎鏈球菌氟喹諾酮類-R萬古霉素c-NS青霉素-R3代頭孢菌素-R-溶血鏈球菌氨芐西林或青霉素c-NS萬古霉素c-NS草綠色鏈球菌萬古霉素-NSa. 當表中所列結(jié)果來自個別患者別離的細菌，應(yīng)用以下一條或多條予以證實：確保不常見結(jié)果不是因為抄寫錯誤、污染或用了有缺陷的試劑板、平皿或卡片。檢查患者過去的結(jié)果，確認是否是曾經(jīng)別離過的菌株和已經(jīng)得到證實的。確認菌株的鑒定正確性。重復(fù)藥敏試驗并確認結(jié)果，有時改換一種試驗方法重復(fù)結(jié)果是有幫助的。對于表中某

31、些抗生素只有敏感判斷標準的菌株，如果表現(xiàn)出不敏感表中列為NS,萬古霉素中介度或耐藥的葡萄球菌：確認菌株鑒定正確確認藥敏試驗結(jié)果保存菌株將菌株送參考實驗室，并用NCCLS參考稀釋方法試驗b. 當表中所列結(jié)果來自個別患者別離的細菌，如果不是耐藥規(guī)那么中常見的，應(yīng)該考慮按類中所列步驟進行驗證。c. 對這些抗生素/細菌組合，到目前為止，還未有耐藥記載。八、質(zhì)量控制培養(yǎng)基的質(zhì)控根據(jù)?中華人民共和國衛(wèi)生行業(yè)標準WS/T2322002商業(yè)性微生物培養(yǎng)基質(zhì)量檢驗規(guī)程?要求，常規(guī)使用培養(yǎng)基只需對淋球菌培養(yǎng)基進行室內(nèi)質(zhì)控質(zhì)控菌株使用標準菌株：淋病奈瑟菌43069或43070進行生長試驗，奇異變形桿菌43071或表

32、皮葡萄球菌12228做局部抑制試驗即可。血平板、麥康凱平板、伊紅美蘭平板、SS平板、沙保羅平板、營養(yǎng)肉湯、結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)基、支原體培養(yǎng)基等只需商家提供質(zhì)控證明即可。購置的培養(yǎng)基，必須檢查每批培養(yǎng)基，包括：平板的裂紋、充碟均勻、培養(yǎng)基裂紋、溶血、冷凍、過多的氣泡或者斑點、污染的檢查。凡購置的培養(yǎng)基，生產(chǎn)廠商必須提供質(zhì)控在控證明材料。2. 質(zhì)控菌株的保存及其工作質(zhì)控菌株的使用1質(zhì)控菌株的保存1培養(yǎng)基：無菌脫纖維羊血、脫脂牛奶、大豆胰蛋白消化肉湯TSB1015甘油2濃度：0.5個麥氏單位、淋球菌1.0個麥氏單位、0.51.0ml/支，轉(zhuǎn)種一次保證足夠一年的使用量。3溫度：-70保存4溶解轉(zhuǎn)種后丟棄

33、，處理送高壓蒸汽滅菌2工作質(zhì)控菌株最多下傳三代，用瓊脂斜面或平板保存于28，可用四周，每月啟用一支新標準菌株。3. 鑒定儀器及其配套試劑的質(zhì)控鑒定儀器及其配套試劑的質(zhì)控嚴格按照說明書進行。4. 藥敏紙片質(zhì)控質(zhì)控菌株應(yīng)按標準方法與臨床標本別離菌同步進行藥敏試驗。更換抗生素紙片或培養(yǎng)基時必需用相應(yīng)質(zhì)控菌株測試。采用藥敏K-B法進行室內(nèi)質(zhì)控。所有抗生素紙片在實行常規(guī)監(jiān)控一周一次質(zhì)控前應(yīng)用質(zhì)控菌株連續(xù)監(jiān)測20-30天，對每種藥，每種菌，連續(xù)20次或30次試驗中，結(jié)果不超出質(zhì)控范圍1個或3個，可轉(zhuǎn)為一周一次質(zhì)控的方法。只要抑菌圈直徑超出可接受范圍都必需校正。當失控原因不明時，可用相應(yīng)質(zhì)控菌株連續(xù)監(jiān)測5天

34、，如果全部到達可接受范圍，可恢復(fù)一周一次質(zhì)控。紙片法藥敏標準菌株質(zhì)控范圍，見表19。3 使用質(zhì)控菌株要求包括主要的菌屬和全部的抗生素譜，所以標準菌株要包括：金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、大腸埃希菌、肺炎克雷伯菌產(chǎn)ESBL菌株、糞腸球菌、肺炎鏈球菌。5. 鑒定血清和鑒定用試劑和紙片鑒定血清質(zhì)控每個季度進行一次鑒定用試劑質(zhì)控每天進行，包括觸酶、氧化酶、凝固酶、革蘭染液和抗酸染液。鑒定用紙片在有效期內(nèi)每個月進行一次，包括：奧普托欣、桿菌肽、-內(nèi)酰氨酶、因子、因子、因子。6. 藥敏紙片室內(nèi)質(zhì)控失控報告需要包含幾個方面：失控工程名稱記錄此次質(zhì)控使用的藥敏紙片、MH培養(yǎng)基、鹽水等的批號記錄失控值、失控菌株

35、和孵箱溫度分析失控原因：藥敏紙片效期和藥效、培養(yǎng)基效期和培養(yǎng)基厚度等、比濁儀、孵箱溫度、標準菌株污染或者變異、人為因素等，藥敏試驗過程涉及到的因素都應(yīng)在分析范圍之內(nèi)。糾正措施采取糾正措施后的結(jié)果最后的結(jié)論及其經(jīng)驗教訓，以后應(yīng)該注意的問題。操作者、室內(nèi)組長、科室主任簽名和日期。質(zhì)控菌株：金黃色葡萄球菌ATCC 25923大腸埃希菌ATCC 25922大腸埃希菌ATCC 35218銅綠假單胞菌ATCC 27853肺炎鏈球菌 ATCC 49619糞腸球菌 ATCC 29212表21 CLSI/NCCLS紙片法藥敏標準菌株質(zhì)控范圍抗菌藥物紙片含量大腸埃希菌金黃色葡萄球菌銅綠假單胞菌肺炎鏈球菌ATCC 259