細(xì)胞工程第四章植物組織器官培養(yǎng)技術(shù)課件

1、第四章 植物組織器官培養(yǎng)技術(shù) 知識(shí)目標(biāo)：掌握植物組織培養(yǎng)的基本概念和基本原理理解植物細(xì)胞脫分化與再分化現(xiàn)象掌握植物組織培養(yǎng)的基本程序。掌握植物脫毒與快速繁殖、花藥和花粉培養(yǎng)、植物胚胎培養(yǎng)和人工種子等技術(shù)。1植物組織培養(yǎng)概念 由植物組織或器官培養(yǎng)產(chǎn)生愈傷組織，進(jìn)而培養(yǎng)成完整植株。人工培養(yǎng)植物體一部分(即外植體 ) 生成完整植株。 第一節(jié) 植物組織培養(yǎng)的基本原理 一、植物組織培養(yǎng)的相關(guān)定義廣義和狹義概念有何區(qū)別？組培范圍不同，即外植體范圍不同。 2外植體explant：從植物體分離并用于離體培養(yǎng)的材料。.愈傷組織在離體培養(yǎng)時(shí)形成的具分生能力的一 團(tuán)不規(guī)則細(xì)胞，多在外植體切面上產(chǎn)生。.初代培養(yǎng)：芽、

2、莖段、葉片、花器等外植體在離體培養(yǎng)條件下誘導(dǎo)愈傷組織、側(cè)芽或不定芽、胚狀體過程。.繼代培養(yǎng)：更換新鮮培養(yǎng)基來繁殖同種類型的材料（愈傷組織、芽）。 .生根培養(yǎng)：將芽苗轉(zhuǎn)接到生根培養(yǎng)基上培養(yǎng)成為完整植株的過程。 .馴化移栽： 組培苗經(jīng)人工煉苗后移栽到馴化苗床上使之適應(yīng) 露地或保護(hù)地條件的過程。 .胚狀體embroid： 在離體培養(yǎng)過程中產(chǎn)生一種形似胚（具有明顯的根端和芽端），功能與胚相同的結(jié)構(gòu)。 石龍芮下胚軸培養(yǎng)產(chǎn)生胚狀體過程 二、植物組織培養(yǎng)的基本原理(一)植物細(xì)胞全能性 每一個(gè)植物細(xì)胞帶有該植物的全部遺傳信息，在適當(dāng)條件下可表達(dá)出該細(xì)胞的所有遺傳信息，分化出植物有機(jī)體所有不同類型的細(xì)胞，形成不

3、同類型的器官甚至胚狀體，直至形成完整再生植株。 參照動(dòng)物細(xì)胞研究分類類型，植物細(xì)胞也可分為三類 第一類是莖尖、根尖及形成層細(xì)胞，這類細(xì)胞始終保持分裂能力，從一個(gè)周期進(jìn)入另一個(gè)周期，為周期細(xì)胞。 第二類是篩管、導(dǎo)管、氣孔保衛(wèi)細(xì)胞等特化細(xì)胞，他們?yōu)橛谰檬シ至涯芰Φ募?xì)胞，為終端分化細(xì)胞。 第三類是表皮細(xì)胞及各種薄壁細(xì)胞，這類細(xì)胞在通常情況下不分裂，但在受到外界刺激后可重新啟動(dòng)分裂，稱為Go細(xì)胞。 （二）實(shí)現(xiàn)植物細(xì)胞全能性的條件 一個(gè)植物細(xì)胞向分生狀態(tài)回復(fù)過程所能進(jìn)行的程度，取決于它在自然部位上所處的位置和生理狀態(tài)。(三)植物細(xì)胞分化 細(xì)胞分化（differentiation），是指導(dǎo)致細(xì)胞形成不同

4、結(jié)構(gòu)，引起功能改變或潛在發(fā)育方式改變的過程。 分化是指植物體各個(gè)部分出現(xiàn)異質(zhì)性的現(xiàn)象，可以在細(xì)胞水平、組織水平或器官水平上表現(xiàn)出來 脫分化細(xì)胞分裂再分化個(gè)體再生細(xì)胞全能性 細(xì)胞全能性的表達(dá)是通過脫分化和在分化實(shí)現(xiàn)的，在大多數(shù)情況下，脫分化是全能性表達(dá)的前提，再分化是全能性表達(dá)的最終體現(xiàn) 脫分化也稱去分化，是指離體培養(yǎng)條件下生長的細(xì)胞、組織或器官經(jīng)過細(xì)胞分裂或不分裂逐漸失去原來的結(jié)構(gòu)和功能而恢復(fù)分生狀態(tài)，形成無組織結(jié)構(gòu)的細(xì)胞團(tuán)或愈傷組織或成方未分化細(xì)胞特性的細(xì)胞的過程。 愈傷組織 再分化：脫分化后具有分生能力的細(xì)胞再經(jīng)過與原來相同的分化過程，重新形成各類組織和器官的過程。（1）培養(yǎng)的植物細(xì)胞或組

5、織的脫分化，形成愈傷組織。（2）由新形成的愈傷組織形成一些分生細(xì)胞，隨后由其分化成不同的器官原基。（1）器官發(fā)生方式：先芽后根先根后芽根芽同步發(fā)生（四）離體培養(yǎng)中再生植株的兩條途徑脫分化再分化（2）體細(xì)胞胚胎發(fā)生 離體培養(yǎng)下沒有經(jīng)過受精過程，但經(jīng)過了胚胎發(fā)育過程所形成的胚的類似物（不管培養(yǎng)的細(xì)胞是體細(xì)胞還是生殖細(xì)胞），統(tǒng)稱為體細(xì)胞胚或胚狀體 (一)植物體細(xì)胞胚胎發(fā)生過程1體細(xì)胞胚從外植體上直接發(fā)生 誘導(dǎo)階段胚胎發(fā)育階段2經(jīng)過愈傷組織的體細(xì)胞胚發(fā)生 誘導(dǎo)愈傷組織形成愈傷組織胚性化球形胚期子葉胚期綜上所述，植物細(xì)胞組織培養(yǎng)的全過程可以簡單描述如下 體細(xì)胞胚和不定器官再分化完整植株外植體（細(xì)胞）愈傷

6、組織脫分化一、無菌外植體的獲得0.10.2 氯化汞（210分鐘）70 酒精數(shù)秒，轉(zhuǎn)入10 氯化鈣（210分鐘）或者轉(zhuǎn)入2 次氯酸鈉（1530分鐘） 消毒流程第二節(jié) 植物組織培養(yǎng)的基本步驟二 、初代培養(yǎng)物的建立無菌環(huán)境規(guī)范操作條件合適三 、形態(tài)發(fā)生和植株再生四 培養(yǎng)產(chǎn)物的觀察記載愈傷組織胚狀體芽根第三節(jié) 植物脫毒與快速繁殖一、植物脫毒和快速繁殖的意義1能夠有效保持優(yōu)良品種特性 離體無性繁殖主要是以植物營養(yǎng)器官為外植體，繁殖過程在人工控制的環(huán)境條件下，所以既不會(huì)造成性狀分離，同時(shí)還避免了病蟲害的浸染，從而可以很好地保持品種的優(yōu)良特性。 2生產(chǎn)無病毒種苗，防止品種退化 唐菖蒲病毒病 辣椒病毒病 3快

7、速繁殖新品種，加速優(yōu)良品種推廣 離體繁殖因?yàn)橹芷诙?13個(gè)月)，不受季節(jié)限制，因此繁殖系數(shù)高（幾十至幾百倍），其繁殖速度是任何其它方法所不能比擬的，所以通常將組織培養(yǎng)繁殖稱之為快繁(rapid clonal propagation)。這就大大地加快了優(yōu)良品種的推廣速度 。4節(jié)約耕地，提高農(nóng)產(chǎn)品商品產(chǎn)出率 對于那些以塊根、塊莖、鱗莖為繁殖器官的作物來講，每年相當(dāng)一部分產(chǎn)品要用作留種。如： 大蒜 留種量占產(chǎn)量的1/51/8。 馬鈴薯 留種量占產(chǎn)量的1/10。 貝母 留種量占產(chǎn)量的1/3。二、植物脫毒的原理和技術(shù)（一）熱處理脫毒（溫?zé)岑煼ǎ?.原理：當(dāng)植物組織處于高于正常溫度的環(huán)境（35-40）時(shí)，

8、組織內(nèi)部的病毒部分或全部鈍化，但寄主植物的組織很少或不會(huì)受到傷害。思考：熱處理的作用是什么？2.熱處理方法： 溫湯（浸漬）處理：適用于離體材料（如接穗）和休眠器官的處理。在50 左右的溫水中浸漬10min至數(shù)小時(shí)，使病毒失活。熱風(fēng)（熱空氣）處理 恒溫處理：將生長的盆栽植物移入溫?zé)岑熓覂?nèi)，一般在3540 。對活躍生長的莖尖效果較好，處理時(shí)間因植物而異。變溫處理：如馬鈴薯每天40 處理4h，可清除芽眼中馬鈴薯的葉片病毒，而且保持芽眼的活力。 缺陷：不能脫除所有病毒。例如在馬鈴薯中只能消除卷葉病毒。 注：熱處理需與其它方法配合應(yīng)用(二)莖尖培養(yǎng)脫毒1.莖尖培養(yǎng)脫毒原理 染病植株體內(nèi)病毒的分布不均勻，

9、越靠近莖頂?shù)母腥旧疃仍降?，生長點(diǎn)（約0.11.0mm）幾乎不含或含病毒很少。 原因:無維管束，病毒只能通過胞間連絲傳遞，不及細(xì)胞不斷分裂和生長的速度。因此可利用微莖尖培養(yǎng)脫毒。 莖尖大小與脫毒效果。莖尖培養(yǎng)的脫毒效果與莖尖大小呈反比;莖尖培養(yǎng)的成活率與莖尖大小呈正比。思考：什么樣的莖尖大小合適？帶1-3個(gè)葉原基的莖尖（0.3-0.5mm）作為外植體。材料選擇、消毒 微莖尖的剝?nèi)?接種2.莖尖培養(yǎng)方法材料選擇、消毒： 在植株上直接取或在室內(nèi)培養(yǎng)一段時(shí)間的植株上取頂芽或側(cè)芽然后消毒（或不消毒）。 微莖尖的剝?nèi)。?解剖鏡下剝?nèi)?。注意勿損傷生長點(diǎn)。接種：隨剝隨接，盡快接種。 培養(yǎng)：22左右，每天以16

10、h、15005000lx光照下培養(yǎng)。保證較高溫度和充足光照時(shí)間。繼代、生根培養(yǎng)：同器官培養(yǎng)。3.培養(yǎng)基與培養(yǎng)方式常用培養(yǎng)基： MS White、Morel 適當(dāng)提高生長素（0.10.5mg/L）與細(xì)胞分裂素濃度。有時(shí)可加活性炭。用NAA或IBA，Kt或BA， 不用2,4D。 GA適當(dāng)。4.影響微莖尖培養(yǎng)的因素外植體大小： 通常以帶1-3個(gè)幼葉原基的莖尖（約0.3-0.5mm)作外植體為宜。不同植物脫毒適宜的莖尖大小不同。 培養(yǎng)條件：增加光照 外植體的生理狀態(tài) 莖尖最好在活躍生長的芽上切取， 取芽的時(shí)間最好是在萌動(dòng)期較好。三、離體繁殖 離體繁殖(propagation in vitro)是在人工

11、控制的無菌條件下，使植物在人工培養(yǎng)基上繁殖的技術(shù)。目前已有近400種植物的離體繁殖已獲得成功，其中許多具有重要經(jīng)濟(jì)價(jià)值的花卉(如蘭花、菊花、石竹等)、水果(如草莓、無籽西瓜、葡萄、草莓和香蕉等)、經(jīng)濟(jì)作物(如馬鈴薯、甘蔗等)和林木(如桉樹、楊樹等)等，均已建立離體繁殖的種苗生產(chǎn)體系，取得了巨大的經(jīng)濟(jì)效益和社會(huì)效益。 （一）離體繁殖的一般技術(shù)1.外植體的選擇(1)根據(jù)培養(yǎng)目的選擇(2)考慮種質(zhì)、取材大小、時(shí)期和材料的生理狀態(tài)，具有代表性植物在自然條件下的繁殖特點(diǎn) 離體條件下莖芽的增殖方式 外植體的取材部位、大小和生理狀態(tài)。 2培養(yǎng)物的增殖 植物的種類和自然生長習(xí)性不同，其增殖方式及所采取的相應(yīng)技

12、術(shù)措施也不一樣。一般來講，培養(yǎng)物的增殖有以下4種方式 芽增殖特點(diǎn)主要表現(xiàn)在培養(yǎng)方法簡單，能高度保持遺傳穩(wěn)定性，能長期繼代繁殖。目前采用這一方式快速繁殖的植物有石竹、馬鈴薯、甘薯、草莓、葡萄和月季等。 不定芽增殖 從現(xiàn)存的芽以外的任何器官和組織上通過器官發(fā)生重新形成的芽稱之為不定芽。特點(diǎn)主要表現(xiàn)在繁殖系數(shù)高，有較好的遺傳穩(wěn)定性。 胚狀體增殖 特點(diǎn)是增長率高，胚的雙極性免去了生根環(huán)節(jié)，但胚狀體休眠的誘導(dǎo)和解除還難以把握，其成苗率還不高。因此，目前除一些特殊用途外(人工種子)，這一技術(shù)途徑還沒有用于植物的快速繁殖。 愈傷組織增殖 可以說，所有的植物通過組織培養(yǎng)的方法均可以誘導(dǎo)形成愈傷組織,愈傷組織再

13、進(jìn)一步分化即可獲得小植株。愈傷組織增殖的特點(diǎn)是成功率高，繁殖系數(shù)大，但遺傳穩(wěn)定性較差。 3生根培養(yǎng) 4生產(chǎn)用苗的培植 （二）離體繁殖的使用范圍離體繁殖常用于以下幾個(gè)方面：某些難以繁殖或繁殖系數(shù)很低的植物某些需要加速繁殖的特殊基因型如名貴花卉、優(yōu)良資源、果樹芽變體和轉(zhuǎn)基因植株等自然無性繁殖極易感染病毒的植物如馬鈴薯、甘薯、甘蔗、香蕉、石竹和百合等有性繁殖變異范圍過大而自然條件下又不易無性繁殖的植物 （三）離體繁殖的遺傳變異與控制1外源生長調(diào)節(jié)劑對品種典型性的影響2繼代次數(shù)與變異3增殖方式的合理選擇第四節(jié) 花藥及花粉培養(yǎng)一、基本概念與意義花藥培養(yǎng)指應(yīng)用組織培養(yǎng)技術(shù)，將花粉發(fā)育至一定階段的花藥接種到

14、人工培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)，以誘導(dǎo)其花粉粒改變發(fā)育進(jìn)程，形成花粉胚或愈傷組織，進(jìn)而分化成苗的技術(shù)。花粉培養(yǎng)則需將花粉從花藥中游離出來，再進(jìn)行離體培養(yǎng) 花藥及花粉培養(yǎng)1克服后代分離，縮短育種年限2選擇效率高3有利于隱性基因控制性狀的選擇4快速獲得自交系的超雄株5其他二、花藥培養(yǎng)技術(shù) 1 .花藥培養(yǎng)實(shí)質(zhì)： 器官培養(yǎng)2.花藥培養(yǎng)程序 材料預(yù)處理： 低溫冷藏、60鈷照射、乙烯利噴母株，提高出愈 率。表面滅菌： 70%酒精表面擦洗或按器官滅菌方法。接種： 接種程序見圖。注：不要直接夾花藥；接種密度宜高。3.形成途徑4.花藥材料的選擇 思考：花粉發(fā)育四個(gè)時(shí)期？ （1）花藥培養(yǎng)適宜的花粉發(fā)育時(shí)期：大多數(shù)植物單核期

15、，尤其是單核中、晚期?；ǚ郯l(fā)育時(shí)期的檢測方法：壓片染色法：采用醋酸洋紅或KI染色法。花器官形態(tài)特點(diǎn)觀察 （2）花藥材料的基因型、生理狀況 （即植物種類、品種、母株年 齡、營養(yǎng)狀況） 5.培養(yǎng)基的選擇（1）基本培養(yǎng)基：MS、N6、B5等 注：銨鹽濃度高抑制花粉愈傷組織的形成。 （2）激素：6-BAKT、ZT，2,4-D、NAA、IAA 愈傷組織誘導(dǎo)：基本培養(yǎng)基+2,4-D 1-3 分化培養(yǎng)基：基本培養(yǎng)基+ 6-BA 2-3+IAA0.2 -0.5 生根培養(yǎng)基：生長素 0.5-1或不加。（3）蔗糖：濃度對花粉愈傷組織誘導(dǎo)率有影響，多數(shù)為2-4%。誘導(dǎo)愈傷組織用高濃度，而愈傷組織分化成苗用較低濃度。

16、 （4）活性炭：促進(jìn)胚狀體發(fā)育，提高花粉質(zhì)量。 （5）有機(jī)附加物：添加有機(jī)物效果好。三、花粉培養(yǎng)技術(shù)1.花粉分離 自然散粉法 機(jī)械擠壓梯度離心法2.花粉預(yù)處理 低溫處理：花粉第1次有絲分裂期處理離體的花蕾效果好。 離心（靠重力作用）：在花蕾中取出花藥前1h，5下離心可提高單倍體植株的誘導(dǎo)率(如煙草、玉米)。3.培養(yǎng)基以尼許(Nitsch)培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基.4.花粉培養(yǎng)方法1.微室培養(yǎng)法 2.看護(hù)培養(yǎng)法 3.平板培養(yǎng)4.液體培養(yǎng)5.雙層培養(yǎng)微室培養(yǎng)法將含有花粉(50-80粒)的培養(yǎng)液低溫(4)接種于微室培養(yǎng)裝置中，20 下培養(yǎng)?？醋o(hù)培養(yǎng)法 3.平板培養(yǎng)4.液體培養(yǎng)5.雙層培養(yǎng)(三)單倍體植株的

17、染色體加倍 單倍體植株的鑒定A.直接鑒定;B.間接鑒定單倍體植株的加倍A.自然加倍;B.人工加倍;C.創(chuàng)傷法加倍第五節(jié) 植物胚胎培養(yǎng)胚胎培養(yǎng)：指對植物的胚，子房，胚珠，胚乳進(jìn)行離體培養(yǎng)，使其發(fā)育成完整植物的技術(shù)根據(jù)培養(yǎng)中所取外植體的部位不同，植物胚胎培養(yǎng)包括胚培養(yǎng)、胚珠培養(yǎng)、子房培養(yǎng)、胚乳培養(yǎng)一、胚培養(yǎng)1.優(yōu)點(diǎn)： 克服雜交育種中雜種胚的早期夭折克服珠心胚干擾，提高育種效率打破種子休眠，提高育種效率提高種子 萌發(fā)率2.成熟胚培養(yǎng) A.種子表面消毒后，在無菌條件下剝離出胚，接種于MS或MS+生長激素+(GA) B.培養(yǎng)基：MS+糖(1-2%)+生長輔助物質(zhì)(激素、AA、活性炭、維生素等)3.幼胚培

18、養(yǎng) A.種子表面消毒后，在無菌條件和高倍解剖鏡下切取完整胚，然后接種。 B.培養(yǎng)基：MS B5 Nitsch 無機(jī)鹽+糖(3-5%)+生長輔助物質(zhì)(維生素、AA、椰乳等) C.發(fā)育方式胚性發(fā)育(embryonal development) 幼胚接種到培養(yǎng)基上以后，仍然按照在活體內(nèi)的發(fā)育方式發(fā)育，最后形成成熟胚(有時(shí)甚至可能類似種子)，然后再按種子萌發(fā)途徑出苗形成完整植株，這種途徑發(fā)育的幼胚一般一個(gè)幼胚將來就是一個(gè)植株。早熟萌發(fā)(early mature sprouting) 幼胚接種后，離體胚不繼續(xù)胚性生長，而是在培養(yǎng)基上迅速萌發(fā)成幼苗，通常稱之為早熟萌發(fā)。 愈傷組織(callus) 在許多情

19、況下，幼胚在離體培養(yǎng)中首先發(fā)生細(xì)胞增殖，形成愈傷組織。4.影響因素：A.pH值在5.2-6.3，與植物有關(guān)。 B.溫度：多數(shù)胚25，有的需變溫或較低較高溫度。 C.光照：通常弱光培養(yǎng)。光暗交替對幼胚生長有利，光照不利于胚根生長。D.幼胚需高無機(jī)鹽、高AA、高蔗糖、高滲透壓。 E.液體培養(yǎng)基利于幼胚培養(yǎng)，固體培養(yǎng)基利于成熟胚培養(yǎng)二、胚珠培養(yǎng)1.胚珠培養(yǎng)：將胚珠從母體上分離出來，在人工控制的條件下進(jìn)行離體培養(yǎng)的，使其生長發(fā)育形成幼苗的技術(shù)。2.胚株培養(yǎng)在實(shí)際中的應(yīng)用受精的胚珠:打破種子休眠;挽救胚的發(fā)育未受精的胚珠:獲得單倍體植株3.培養(yǎng) 取材滅菌接種4.胚珠的發(fā)育途徑三、子房培養(yǎng)及其應(yīng)用 1.意

20、義誘變發(fā)生單倍體植株雜種植株的獲得為試管受精提供基礎(chǔ)技術(shù)2.摘取時(shí)間：在開花前15天摘下未授粉子房；或授粉后摘下子房。 3.滅菌：禾谷類用70%酒精擦洗幼穗；雙子葉植物花蕾用飽和漂白粉滅菌15分；一般植物的花蕾用70%酒精浸30秒，0.1%升汞1520分。無菌水沖洗，無菌濾紙吸干。4.接種： 無菌條件下剝開幼花，夾出子房并接種于培養(yǎng)基（MS、N6等）。 5.培養(yǎng)： T26,RH50-60%，16h散射光。四、胚乳培養(yǎng)及其應(yīng)用(自學(xué))(一)培養(yǎng)過程(二)培養(yǎng)基與培養(yǎng)條件(三)再生植株的染色體倍數(shù)(四)胚乳培養(yǎng)的應(yīng)用第六節(jié) 人工種子一、人工種子的概念 人工種子又稱合成種子或體細(xì)胞種子。任何一種繁殖

21、體，無論是在涂膜膠囊中包裹的、裸露的或經(jīng)過干燥的，只要能夠發(fā)育成完整的植株，均可稱之為人工種子。馬鈴薯人工種子 根據(jù)包被的需要程度可分為三類 裸露的或休眠的繁殖體 人工種皮包被的繁殖體 水凝膠包埋再包被人工種皮的繁殖體 二、繁殖體的類型及其生產(chǎn)(一)不同類型繁殖體比較體細(xì)胞胚：誘導(dǎo)和形成需要經(jīng)過至少兩個(gè)階段：第一階段，在含高生長素濃度的培養(yǎng)基中，誘導(dǎo)培養(yǎng)胚性細(xì)胞；第二階段，在較低生長素或無生長素的培養(yǎng)基中形成體細(xì)胞胚微芽：一般只需一個(gè)培養(yǎng)程序，但有時(shí)為了增加繁殖體的數(shù)量，也需進(jìn)行一定次數(shù)的繼代。 微型變態(tài)器官：需要經(jīng)過不同的誘導(dǎo)程序。 (二)繁殖體的生產(chǎn)1體細(xì)胞胚的規(guī)?；a(chǎn)對于作為人工種子繁

22、殖體的體細(xì)胞胚而言，基本要求是具有發(fā)育上的一致性。 此外還具有如下的特點(diǎn)：形態(tài)正常，具有完整的胚結(jié)構(gòu)；與母體植物的基因型基本相同；具有教好的成熟性，能耐一定程度的脫水2微型營養(yǎng)變態(tài)器官繁殖體的培養(yǎng)許多能夠產(chǎn)生塊莖、鱗莖、球莖等器官的植物，其營養(yǎng)變態(tài)器官通常又是這些植物的繁殖器官。離體培養(yǎng)條件下，這些變態(tài)器官亦可以通過一定的控制條件誘導(dǎo)產(chǎn)生 。 3芽繁殖體的培養(yǎng) 大多數(shù)情況下，微芽、不定芽的培養(yǎng)往往直接從外植體上直接誘導(dǎo)形成，培養(yǎng)方式簡單，且勿需高濃度的激素處理，因此，所產(chǎn)生的繁殖體能保持原有植物的品種特性。 三、人工種子包被完整的人工種子應(yīng)該由3個(gè)部分組成：繁殖體、人工胚乳和人工種皮。 人工種子包被的制作主要經(jīng)過繁殖體預(yù)處理、包埋和種皮包被等環(huán)節(jié)。 (一)繁殖體的預(yù)處理體細(xì)胞胚適度脫水干燥和強(qiáng)制休眠； 微型變態(tài)器官繁殖體表面消毒處理；芽為繁殖體的老化處理。(二)繁殖體的包埋幾種植物人工種子的附加成分及成苗率。海藻酸鈉作包埋介質(zhì)的操作程序是：在配制好的海藻酸鈉溶液中，按一定比例加入繁殖體并混勻，然后將其逐滴滴入2.0%2.5%的CaCl2溶液中，經(jīng)2030 min的離子交換作用，即能形成含有繁殖體并具有一定剛性的小球珠（bead），再用水漂洗20