月季的花藥離體培養(yǎng)

1、復習(fx)提問植物組織培養(yǎng)的原理？什么是細胞全能性？細胞具有全能性的物質基礎是？植物組織培養(yǎng)的一般過程？影響(yngxing)植物組織培養(yǎng)的因素有哪些？共三十二頁 草莓生產上傳統(tǒng)的繁殖方式易將所感染的病毒傳播給后代，導致產量降低。品質變差。運用微型繁殖技術可以培育出無病毒幼苗。草 莓微型繁殖的基本過程如下：外植體 愈傷組織 芽、根 植株請回答：（1）微型繁殖培育無病毒草莓苗時，一般選取_ 作為外植體，其依據是_ _ 。（2）在過程中，常用的MS培養(yǎng)基主要成分包括大量元素(yun s)、微量元素(yun s)和_，在配制好的培養(yǎng)基中，常常需要添加_，有利于外植體啟動細胞分裂形成愈傷組織。接種后

2、25d，若發(fā)現外植體邊緣局部污染，原因可能是_ 。（3）在過程中，愈傷組織在誘導生根的培養(yǎng)基中未形成根，但分化出了芽，其原因可能是_ 。莖尖、根尖莖尖、根尖不含病毒(bngd)有機物植物激素外植體消毒不徹底 培養(yǎng)基中生長素類物質和細胞分裂素類物質用量的比值偏低共三十二頁花藥離體培養(yǎng)P高桿抗病 DDTT矮桿感病 ddttF1高桿抗病 DdTt配子DTDtdTdtDTDtdTdtDDTTDDttddTTddtt純合體秋水仙素 需要的矮抗品種 單倍體育種第1年第2年P高桿抗病 DDTT矮桿感病 ddttF1高桿抗病 DdTtF2D_T_D_ttddT_ddttddTT 雜交育種第1年第2年第36年

3、需要的矮抗品種矮抗考點精講：單倍體育種縮短(sudun)育種年限共三十二頁課題(kt)2 月季的花藥培養(yǎng)共三十二頁 花中皇后月季又稱“月月紅”，自然花期5至11月，開花連續(xù)不斷 ，通常扦插就可以(ky)成活。 共三十二頁共三十二頁基礎知識（一）被子植物的花粉(hufn)發(fā)育雄蕊(xingru)花藥花絲:托起花藥，利于傳粉內含花粉1個花粉可發(fā)育成2個精子花蕊雌蕊共三十二頁基礎知識（一）被子植物(biz-zhw)的花粉發(fā)育1.花粉(hufn)發(fā)育的場所：花粉囊 閱讀教材37-38頁（一）被子植物的花粉發(fā)育，小組討論，總結花粉發(fā)育的流程圖 共三十二頁1個花粉(hufn)母細胞（小孢子母細胞）減數分裂

4、(jin sh fn li)4個花粉（小孢子）集合在一起小孢子四分體時期（四個單倍體細胞連在一起）彼此分離單核期(一個小孢子）單核居中期單核靠邊期有絲分裂雙核期(花粉粒)花粉管細胞核營養(yǎng)細胞(為花粉管生成、生長提供營養(yǎng))生殖細胞核生殖細胞有絲分裂2個精子共三十二頁思考:1個花粉母細胞最終可發(fā)育形成幾個(j )精子？有絲 4個營養(yǎng)細胞8個精子4個花粉管細胞核4個小孢子減數有絲4個生殖細胞核1花粉母細胞1個花粉(hufn)2個精子 1個花粉(hufn)母細胞8個精子練習：1.假如一種被子植物體細胞有20條染色那么它的小孢子母細胞、小孢子、花粉管細胞核、生殖細胞核各有多少條染色體？2.如果小孢子母細

5、胞的基因型為AB（兩對基因位于兩對同源 染色體上）則其小孢子的基因型是什么？ 以基因型為AB的小孢子為例，其花粉管細胞核和生殖細胞核的 基因型是什么？共三十二頁注意：二核花粉粒：成熟的花粉粒中，只含花粉管細胞核和生殖細胞核。（精子在花粉管中形成）三核花粉粒：有些植物的花粉，在成熟前，生殖細胞進行一次有絲分裂，形成兩個精子，這樣的花粉在成熟時，含有一個營養(yǎng)核和兩個精子。兩個精子和一個營養(yǎng)核的基因型相同。1花粉母細胞4個小孢子減分有分4個花粉管細胞核4個生殖細胞核有分8個精子共三十二頁例1：關于被子植物花粉發(fā)育的說法，不正確的是A、花粉粒是在花藥中的花粉囊里形成的B、被子植物精子的形成是直接減數分

6、裂的結果C、被子植物的花粉的發(fā)育要經歷四分體時期、單核期、雙核期等階段D、花粉粒在發(fā)育過程中，核先位于細胞(xbo)一側，再移到細胞(xbo)中央注：花粉母細胞經減數分裂形成4個單核花粉粒，每個花粉粒的細胞核進行(jnxng)一次有絲分裂形成1個花粉管細胞核和1個生殖細胞核，每個生殖細胞核再進行(jnxng)一次有絲分裂生成2個精子。BD共三十二頁（二）產生(chnshng)花粉植株的兩種途徑花粉(hufn)植株：利用花粉發(fā)育的植株，是單倍體植株胚狀體：P38原因：這兩種途徑之間并沒有絕對的界限，主要取決于培養(yǎng)基中激素的種類及其濃度配比共三十二頁部分花藥通過(tnggu)胚狀體途徑形成小植株煙

7、草(ynco)花藥培養(yǎng)胚狀體發(fā)育途徑共三十二頁愈傷組織(zzh)轉接種到再生培養(yǎng)基愈傷組織(zzh)分化形成再生植株水稻花藥培養(yǎng)愈傷組織發(fā)育途徑部分花藥產生愈傷組織接種在平板上的水稻花藥共三十二頁（三）影響花藥培養(yǎng)的因素1、材料的選擇（1）不同植物（2）同一植物的不同生理狀況（花期早期初花期）（3）合適的花粉發(fā)育期（單核居中期與靠邊期之間）此外，植株(zhzh)生長條件、材料低溫預處理、接種密度等2、培養(yǎng)基的組成共三十二頁材料的選擇： 花期早期時的花藥比后期的更容易產生花粉植株。一般，月季的花藥培養(yǎng)時間選在五月初到五月中旬(zhngxn)，即月季的初花期。 選擇合適的花粉發(fā)育時期也是提高誘導成

8、功率的重要因素。一般來說，在單核期，細胞核由中央移向細胞一側的時期，花藥培養(yǎng)成功率最高。 為了挑選到單核期的花藥，通常選擇完全未開放的花蕾。共三十二頁為什么花瓣松動會給材料的消毒帶來困難？答：花瓣松動后，微生物就可能侵入(qnr)到花藥，給材料的消毒帶來困難。共三十二頁影響因素(yn s)總結內部(nib)因素： 不同種類的植物誘導成功率不同同一植物不同生理狀況 誘導成功率不同花期：初花期花蕾：完全未開放花粉：單核靠邊期原因：之前：花藥質地幼嫩，易破碎 之后：花瓣松動，消毒困難生長旺盛、營養(yǎng)充足、誘導成功率高盛開或略開的花瓣松動、消毒困難單核期對離體刺激敏感共三十二頁外部(wib)因素：培養(yǎng)基

9、的組成激素(j s)的種類和配比親本植株的生長條件營養(yǎng)是否良好接種的密度一定范圍內，密度越大，成功率越高材料的低溫預處理誘導愈傷組織形成主要因素：材料的選擇、培養(yǎng)基的組成共三十二頁（四）實驗(shyn)操作（一）材料的選取(xunq)染色鏡檢（二）材料的消毒酒精、氯化汞、次氯酸鈣（三）接種和培養(yǎng)結果分析與評價共三十二頁（一）材料(cilio)選取 2、通過鏡檢來確定是否處于(chy)適宜的發(fā)育期。 方法：醋酸洋紅法(將染色體染成紅色) 焙花青-鉻礬法(花粉細胞核染成藍黑色)。1、從花期看：月季的初花期 從花粉看：單核期 從花蕾看：完全未開放的 花藥（載玻片上）1%的醋酸洋紅1滴用鑷柄將花藥搗碎

10、，蓋上蓋玻片鏡檢（花粉粒的細胞核被染成紅色） 花藥（在卡諾氏固定液中處理20min）取出，置于載玻片上焙花青鉻礬溶液染色蓋上蓋玻片鏡檢（花粉粒的細胞核被染成藍黑色）共三十二頁（二）材料(cilio)的消毒5、無菌水沖洗35次用于培養(yǎng)花藥，實際上多數(dush)未熟，由于它的外面有花萼、花瓣或穎片保護，通常處于無菌狀態(tài)，所以只要將整個花蕾或幼穗消毒即可。1、花蕾用體積分數為70%的酒精浸泡30秒2、無菌水清洗3、無菌吸水紙吸干花蕾表面的水分4、放入質量分數為0.1%的氯化汞溶液中24分鐘 （質量分數為1%的次氯酸鈣溶液或飽和漂白粉溶液）共三十二頁（三）接種(jizhng)和培養(yǎng) 1 滅菌后花蕾，

11、要在 下除去萼片和花瓣(hubn)，并立即將花藥接種到培養(yǎng)基上。 3 通常每瓶接種花藥 ，溫度控制在 左右， 。幼小植株形成后才 。 2 在剝離花藥時，要盡量 （否則接種后，容易從受傷部位產生二倍體的愈傷組織），同時還要徹底 ，因為與花絲相連的花藥不利于愈傷組織或胚狀體的形成。 一般經過20-30天培養(yǎng)后，會發(fā)現花藥開裂，長出愈傷組織或釋放出胚狀體。將愈傷組織及時轉移到分化培養(yǎng)基上，以便進一步分化出再生植株。 4 進一步鑒定和篩選：常常會出現染色體倍性的變化無菌條件不損傷花藥去除花絲7-10個25不需要光照需要光照主要原因是花粉管核和生殖核融合造成的共三十二頁實驗(shyn)操作 選材 材料消

12、毒 接種 培養(yǎng)(piyng) 鑒定、篩選單倍體無菌操作剝離花藥勿傷花藥徹底去除花絲避免從花藥損傷部位產生非花粉愈傷組織與花絲相連的花藥不利于愈傷組織的形成密度：710個/瓶轉移愈傷組織轉移到分化培養(yǎng)基胚狀體注意將幼小植株分開初花期、完全未開放的花蕾、單核靠邊期試劑：70%的酒精、0.1%的氯化汞、無菌水染色體倍性變化-花藥損傷，產生非花粉愈傷組織、花粉中營養(yǎng)核與生殖核融合共三十二頁植物組織培養(yǎng)技術(jsh)與花藥培養(yǎng)技術(jsh)的異同點項目相同點不同點植物組織培養(yǎng)技術1、離體的植物組織經脫分化形成愈傷組織，再分化成叢芽，誘導出根，然后進行移栽。2、培養(yǎng)基配制方法、無菌技術及接種操作等基本相同

13、。1、外植體為體細胞2、有絲分裂過程，染色體數目不變?；ㄋ幣囵B(yǎng)技術1、取材為花藥，培養(yǎng)的為單倍體幼苗，植株弱小，高度不育。2、用秋水仙素處理，使染色體加倍，恢復正常植株的染色體數，而且為純種。共三十二頁【方法歸納】花粉植株(zhzh)的產生與植物莖的組織培養(yǎng)的比較菊花莖的組織培養(yǎng)月季的花藥培養(yǎng)理論依據細胞的全能性基本過程脫分化、再分化影響因素選材、營養(yǎng)、激素、pH、溫度、光照等材料選取未開花植株的莖上部新萌生的側枝（體細胞）通常選擇完全未開放的花蕾（花粉粒）光照狀況每日用日光燈照12h開始不需光照，幼小植株形成后才需光照操作流程制備培養(yǎng)基外植體消毒接種培養(yǎng)移栽栽培選材材料消毒接種和培養(yǎng)篩選和誘

14、導移栽栽培選育共三十二頁1.下列關于被子植物花粉(hufn)的形成，說法正確的是A.花粉(hufn)是花粉(hufn)母細胞經有絲分裂形成的B.花粉的發(fā)育要經歷小孢子四分體時期、單核期和雙核期C.花粉發(fā)育經歷的四分體時期與減數分裂的四分體時期含義相同D.花粉母細胞形成花粉粒中精子的過程是一系列減數分裂的過程B共三十二頁2、(08年海南高考)某二倍體植物是雜合體，圖為其花藥中未成熟花粉在適宜的培養(yǎng)基上培養(yǎng)產生完整植株的過程。據圖回答： （1）圖中表示的是該花粉培養(yǎng)過程中的 _過程，表示的是_過程，X代表的是_，表示的是_ 過程，表示的是誘導_ 過程。（2）圖中從愈傷組織(zzh)形成完整植株的途

15、徑有兩條，具體通過那一條途徑主要取決于培養(yǎng)基成分中_ 的種類及其濃度配比，最后獲得的來源于為成熟花粉的完整植株都稱為 _ 植株（甲）。未成熟花粉經培養(yǎng)能形成完整植株，說明為成熟花粉具有_。脫分化(fnhu)再分化胚狀體分化生根激素單倍體細胞全能性共三十二頁（09廣州綜合測試）下圖是月季花藥離體培養(yǎng)產生花粉植株的兩種途徑，請據圖回答(hud)有關問題：1）選用的材料合適與否是成功誘導出花粉植株的重要因素，一般來說選用 期的花粉可提高成功率(gngl)。選擇花粉時，一般要通過 來確定花粉是否處于合適的發(fā)育期，這時需要對花粉的細胞核進行染色，常用的染色劑是 。單核鏡檢（顯微鏡觀察）醋酸洋紅共三十二頁2）上圖中花藥經脫分化產生胚狀體還是愈傷組織主要取決于培養(yǎng)基中 。3）胚狀體與愈傷組織在結構上的主要區(qū)別在于愈傷組織的細胞排列疏松無規(guī)則，是一種高度 的薄壁細胞，胚狀體與 發(fā)育形成的胚有類似的結構，即具有胚芽(piy)、胚軸和胚根。4）無菌技術也是成功誘導出花粉植株的重要因素，請說明下列各項需要消毒，還是需要滅菌。培養(yǎng)基，培養(yǎng)皿，接種環(huán)，花蕾，實驗操作者的雙手，三角錐形瓶。 （填編號）需要滅菌， （填編號）需要消毒。激素的種類(zhngli)及其濃度配比液泡化正常受精卵共三十二頁內容摘要復習提問。D_T_。考點精講：單倍體育種縮短育種年限。1個花粉母細胞（小孢子母細胞）?；ǚ酃芗毎藸I養(yǎng)細