豬偽狂犬病防治技術(shù)

1、 一、概述 偽狂犬病(Pseudorabies)是由偽狂犬病毒引起的多種家畜和野生動(dòng)物的一種急性傳染病。除豬以外的其他動(dòng)物發(fā)病后通常具有發(fā)熱、奇癢及腦脊髓炎等典型癥狀，均為致死性感染，但呈散發(fā)形式。豬是偽狂犬病毒的自然宿主和貯存者，仔豬和其他易感動(dòng)物一旦感染該病，死亡率高達(dá)100，成年母豬和公豬多表現(xiàn)為繁殖障礙以及呼吸道癥狀。本病廣泛分布于世界各地。并且近年來(lái)國(guó)外報(bào)道，豬、牛及綿羊發(fā)生本病逐年增加。在我國(guó)該病也廣泛存在，并嚴(yán)重發(fā)病，尤其是豬的偽狂犬病，給我國(guó)養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。 二、病原 偽狂犬病毒屬于皰疹病毒科(Herpesviridae)、豬皰疹病毒屬，病毒粒子為圓形，直徑1501

2、80nm，核衣殼直徑為105110nm。病毒粒子的最外層是病毒囊膜，它是由宿主細(xì)胞衍生而來(lái)的脂質(zhì)雙層結(jié)構(gòu)。囊膜表面有長(zhǎng)約810nm呈放射狀排列的纖突。 偽狂犬病毒是皰疹病毒科中抵抗力較強(qiáng)的一種。在37下的半衰期為7h，8可存活46天，而在25干草、樹(shù)枝、食物上可存活1030天，但短期保存病毒時(shí)，4較-15和-20凍結(jié)保存更好。病毒在pH49之間保持穩(wěn)定。5石炭酸經(jīng)2min滅活，但0.5石炭酸處理32天后仍具有感染性。0.51氫氧化鈉迅速使其滅活。對(duì)乙醚、氯仿等脂溶劑以及福爾馬林和紫外線照射敏感。 偽狂犬病毒V只有一個(gè)血清型，但不同毒株在毒力和生物學(xué)特征等方面存在差異。偽狂犬病毒具有泛嗜性，能在

3、多種組織培養(yǎng)細(xì)胞內(nèi)增殖，其中以兔腎和豬腎細(xì)胞(包括原I代細(xì)胞和傳代細(xì)胞系)最為敏感，并引起明顯的細(xì)胞病變，細(xì)胞腫脹變圓，開(kāi)始呈散在的灶狀，隨后逐漸擴(kuò)展，直至全部細(xì)胞圓縮脫落，同時(shí)有大量多核巨細(xì)胞形成。細(xì)胞病變出現(xiàn)快，當(dāng)病毒接種量大時(shí)，在1824h后即能看到典型的細(xì)胞病變。 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物也可用于病毒的分離。在兔、1日齡小鼠和組織培養(yǎng)之間對(duì)偽狂犬病毒的敏感性無(wú)顯著差異，但成年鼠與新生鼠相比有較強(qiáng)的抵抗力。雖然雞胚對(duì)偽狂犬病毒不很敏感，但應(yīng)用雞胚絨毛尿囊膜接種是最早用于病毒增殖和傳代的方法。 偽狂犬病毒基因組是線狀雙鏈DNA分子，大小約150kb，平均G+C含量高達(dá)74，具有典型的皰疹病毒基因組結(jié)構(gòu)特征

4、，由獨(dú)特長(zhǎng)區(qū)段、獨(dú)特短區(qū)段及位于US兩側(cè)的末端重復(fù)序列(TR)和內(nèi)部重復(fù)序列(IR)組成。三、流行病學(xué) 偽狂犬病毒在全世界廣泛分布。偽狂犬病自然發(fā)生于豬、牛、綿羊、犬和貓，另外，多種野生動(dòng)物、肉食動(dòng)物也易感。水貂、雪貂因飼喂含偽狂犬病毒的豬下腳料也可引起偽狂犬病的暴發(fā)。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中家兔最為敏感，小鼠、大鼠、豚鼠等也能感染。關(guān)于人感染偽狂犬病毒的報(bào)道很少，并且都不是以病毒分離為報(bào)道依據(jù)。如土耳其及我國(guó)臺(tái)灣曾報(bào)道有血清學(xué)反應(yīng)陽(yáng)性者。歐洲也曾報(bào)告數(shù)例因皮膚傷口接觸病料組織而感染，主要表現(xiàn)為局部有發(fā)癢，未曾報(bào)告有死亡。最新的報(bào)道見(jiàn)于1992年，在波蘭因直接接觸偽狂犬病毒而感染的工人，首先是手部先出現(xiàn)短暫

5、的搔癢，后擴(kuò)展至背部和肩部。 豬是偽狂犬病毒的貯存宿主，病豬、帶毒豬以及帶毒鼠類為本病重要傳染源。不少學(xué)者認(rèn)為，其他動(dòng)物感染本病與接觸豬、鼠有關(guān)。 在豬場(chǎng)，偽狂犬病毒主要通過(guò)已感染豬排毒而傳給健康豬，另外，被偽狂犬病毒污染的工作人員和器具在傳播中起著重要的作用。而空氣傳播則是偽狂犬病毒擴(kuò)散的最主要途徑，但到底能傳播多遠(yuǎn)還不清楚。人們還發(fā)現(xiàn)在鄰近有偽狂犬病發(fā)生的豬場(chǎng)周圍放牧的牛群也能發(fā)病，在這種情況下，空氣傳播是惟一可能的途徑。在豬群中，病毒主要通過(guò)鼻分泌物傳播，另外，乳汁和精液也是可能的傳播方式。 除豬以外的其他動(dòng)物感染偽狂犬病毒后，其結(jié)果都是死亡。豬發(fā)生偽狂犬病后，其臨診癥狀因日齡而異，成年

6、豬一般呈隱性感染，懷孕母豬可導(dǎo)致流產(chǎn)、死胎、木乃伊胎和種豬不育等綜合癥候群。15日齡以內(nèi)的仔豬發(fā)病死亡率可達(dá)100，斷奶仔豬發(fā)病率可達(dá)40，死亡率20左右；對(duì)成年肥豬可引起生長(zhǎng)停滯、增重緩慢等。 偽狂犬病的發(fā)生具有一定的季節(jié)性，多發(fā)生在寒冷的季節(jié)，但其他季節(jié)也有發(fā)生。四、臨床癥狀 偽狂犬病毒的臨診表現(xiàn)主要取決于感染病毒的毒力和感染量，以及感染豬的年齡。其中，感染豬的年齡是最主要的。與其他動(dòng)物的皰疹病毒一樣，幼齡豬感染偽狂犬病毒后病情最重。 新生仔豬感染偽狂犬病毒會(huì)引起大量死亡，臨診上新生仔豬第1天表現(xiàn)正常，從第2天開(kāi)始發(fā)病，35天內(nèi)是死亡高峰期，有的整窩整窩死光。同時(shí)，發(fā)病仔豬表現(xiàn)出明顯的神經(jīng)

7、癥狀、昏睡、嗚叫、嘔吐、拉稀，一旦發(fā)病，12日內(nèi)死亡。剖檢主要是腎臟布滿針尖樣出血點(diǎn)，有時(shí)見(jiàn)到肺水腫、腦膜表面充血、出血。15日齡以內(nèi)的仔豬感染本病者，病情極嚴(yán)重，發(fā)病死亡率可達(dá)100。仔豬突然發(fā)病，體溫上升達(dá)41以上，精神極度委頓，發(fā)抖，運(yùn)動(dòng)不協(xié)調(diào)，痙攣，嘔吐，腹瀉，極少康復(fù)。斷奶仔豬感染偽狂犬病毒，發(fā)病率在2040左右，死亡率在1020左右，主要表現(xiàn)為神經(jīng)癥狀、拉稀、嘔吐等。成年豬一般為隱性感染，若有癥狀也很輕微，易于恢復(fù)。主要表現(xiàn)為發(fā)熱、精神沉郁，有些病豬嘔吐、咳嗽，一般于48天內(nèi)完全恢復(fù)。 懷孕母豬可發(fā)生流產(chǎn)、產(chǎn)木乃伊胎兒或死胎，其中以死胎為主無(wú)論是頭胎母豬還是經(jīng)產(chǎn)母豬都發(fā)病，而且沒(méi)有

8、嚴(yán)格的季節(jié)性，但以寒冷季節(jié)即冬末春初多發(fā)。據(jù)近年來(lái)的報(bào)道，奇癢癥狀以往在豬罕見(jiàn)，但目前則常可見(jiàn)到。 偽狂犬病的另一發(fā)病特點(diǎn)是表現(xiàn)為種豬不育癥。近幾年發(fā)現(xiàn)有的豬場(chǎng)春季暴發(fā)偽狂犬病，出現(xiàn)死胎或斷奶仔豬患偽狂犬病后，緊接著下半年母豬配不上種，返情率高達(dá)90%，有反復(fù)配種數(shù)次都屢配不上的。此外，公豬感染偽狂犬病毒后，表現(xiàn)出睪丸腫脹、萎縮，喪失種用能力。 五、病理變化 偽狂犬病毒感染一般無(wú)特征性病變。眼觀主要見(jiàn)腎臟有針尖狀出血點(diǎn)，其他肉眼病變不明顯?？梢?jiàn)不同程度的卡他性胃炎和腸炎，中樞神經(jīng)系統(tǒng)癥狀明顯時(shí)，腦膜明顯充血，腦脊髓液量過(guò)多，肝、脾等實(shí)質(zhì)臟器?？梢?jiàn)灰白色壞死病灶，肺充血、水腫和壞死點(diǎn)。子宮內(nèi)感染

9、后可發(fā)展為溶解壞死性胎盤炎。 組織學(xué)病變主要是中樞神經(jīng)系統(tǒng)的彌散性非化膿性腦膜腦炎及神經(jīng)節(jié)炎，有明顯的血管套及彌散性局部膠質(zhì)細(xì)胞壞死。在腦神經(jīng)細(xì)胞內(nèi)、鼻咽黏膜、脾及淋巴結(jié)的淋巴細(xì)胞內(nèi)可見(jiàn)核內(nèi)嗜酸性包涵體和出血性炎癥。有時(shí)可見(jiàn)肝臟小葉周邊出現(xiàn)凝固性壞死。肺泡隔核小葉質(zhì)增寬，淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞浸潤(rùn)。 六、診斷鑒別 根據(jù)疾病的臨診癥狀，結(jié)合流行病學(xué)，可做出初步診斷，確診必須進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室檢查。同時(shí)要注意與豬細(xì)小病毒、流行性乙型腦炎病毒、豬繁殖與呼吸綜合征病毒、豬瘟病毒、弓形蟲(chóng)及布魯氏菌等引起的母豬繁殖障礙相區(qū)別。 1病毒分離鑒定病毒的分離是診斷偽狂犬病的可靠方法?；疾?dòng)物的多種病料組織如腦、心、肝、脾、

10、肺、腎、扁桃體等均可用于病毒的分離，但以腦組織和扁桃體最為理想，另外，鼻咽分泌物也可用于病毒的分離。病料處理后可直接接種敏感細(xì)胞，如豬腎傳代細(xì)胞(PK-15和IBRS-2)、倉(cāng)鼠腎傳代細(xì)胞(BHK-21)或雞胚成纖維細(xì)胞(CEF)，在接種后2472h內(nèi)可出現(xiàn)典型的細(xì)胞病變。若初次接種無(wú)細(xì)胞病變，可盲傳3代。不具備細(xì)胞培養(yǎng)條件時(shí)，可將處理的病料接種家兔或小鼠，根據(jù)家兔或小鼠的臨診表現(xiàn)做出判定，但小鼠不如家兔敏感。分離到病毒后再用標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性血清做中和試驗(yàn)以確診本病。 2組織切片熒光抗體檢測(cè)取患病動(dòng)物的病料如腦或扁桃體的壓片或冰凍切片，用直接免疫熒光檢查。其優(yōu)點(diǎn)是快速，在幾小時(shí)內(nèi)即可獲得可靠結(jié)果，對(duì)于

11、新生仔豬，其敏感性與病毒分離相當(dāng)，但對(duì)于育肥豬與成年豬，該法則不如病毒分離敏感。 3PCR檢測(cè)豬偽狂犬病病毒利用PCR可從患病動(dòng)物的分泌物如鼻咽拭子或組織病料中擴(kuò)增豬偽狂犬病病毒的基因，從而對(duì)患病動(dòng)物進(jìn)行確診。PCR與病毒分離鑒定相比，具有快速、敏感、特異性強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)，能同時(shí)檢測(cè)大批量的樣品，并且能進(jìn)行活體檢測(cè)，適合于臨診診斷。 4血清學(xué)診斷多種血清學(xué)方法可用于偽狂犬病的診斷，應(yīng)用最廣泛的有中和試驗(yàn)、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)、乳膠凝集試驗(yàn)、補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)及間接免疫熒光等。其中血清中和試驗(yàn)的特異性、敏感性都是最好的，并且被世界動(dòng)物衛(wèi)生組織(OIE)列為法定的診斷方法。但由于中和試驗(yàn)的技術(shù)條件要求高、時(shí)間長(zhǎng)，

12、所以主要是用于實(shí)驗(yàn)室研究。酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)同樣具有特異性強(qiáng)、敏感性高的特點(diǎn)，34h內(nèi)可得出試驗(yàn)結(jié)果，并可同時(shí)檢測(cè)大批量樣品，廣泛用于偽狂犬病的臨診診斷。另外，近幾年來(lái)，乳膠凝集試驗(yàn)以其獨(dú)特的優(yōu)點(diǎn)也在臨診上廣泛應(yīng)用，操作極其簡(jiǎn)便，幾分鐘之內(nèi)便可得出試驗(yàn)結(jié)果。 5鑒別診斷豬偽狂犬病病毒鑒別診斷方法是在使用基因標(biāo)志疫苗的基礎(chǔ)上應(yīng)用的一類診斷方法。由于PRV中存在多個(gè)非心需糖蛋白基因，缺失這些基因的病毒突變株不能產(chǎn)生被缺失基因所編碼的糖蛋白，但又不影響病毒在細(xì)胞上的增殖與免疫原性。將這種基因缺失標(biāo)志疫苗注射動(dòng)物后，動(dòng)物不能產(chǎn)生針對(duì)缺失蛋白的抗體。因此，可通過(guò)血清學(xué)方法將自然感染野毒的血清學(xué)陽(yáng)性豬與注苗

13、豬區(qū)分開(kāi)來(lái)。目前，缺失疫苗缺失的糖蛋白基因主要為gE和gG基因，也有缺失gC、gB基因的。針對(duì)缺失的糖蛋白已利用大腸桿菌或酵母等表達(dá)系統(tǒng)的表達(dá)產(chǎn)物建立了相應(yīng)的鑒別診斷方法：gE-ELISA(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn))、gG-ELISA、gC-ELISA、gB-ELISA以及gE-LAT(乳膠凝集試驗(yàn))、gG、LAT等，實(shí)驗(yàn)證實(shí)這些方法的特異性強(qiáng)、敏感性高，可用于臨診檢測(cè)，同時(shí)乳膠凝集還具有簡(jiǎn)單、快速的特點(diǎn)。目前，在我國(guó)已有g(shù)E-ELISA、gG-ELISA和gE-LAT、gG-LAT問(wèn)世。 七、防治措施 本病尚無(wú)特效治療藥物，緊急情況下，用高免血清治療，可降低死亡率。疫苗免疫接種是預(yù)防和控制偽狂犬病的根本措施，目前國(guó)內(nèi)外已研制成功偽狂犬的常規(guī)弱毒疫苗、滅活疫苗以及基因缺失疫苗(包括基因缺失弱毒苗和滅活苗)，這些疫苗都能有效地減輕或防止偽狂犬病的臨診癥狀，從而減少該病造成的經(jīng)濟(jì)損失。消滅牧場(chǎng)中的鼠類，對(duì)預(yù)防本病有重要意義。同時(shí)，還要嚴(yán)格控制犬、貓、鳥(niǎo)類和其他禽類進(jìn)入豬場(chǎng)，嚴(yán)格控制人員來(lái)往，并做好消毒工作及血清學(xué)監(jiān)測(cè)等，這樣對(duì)本病的防制也可起到積極的推動(dòng)作用。此外，對(duì)豬群采血做血清中和試驗(yàn)，陽(yáng)性者隔離，以后淘汰。以34周為間隔反復(fù)進(jìn)行，一直到兩次試驗(yàn)全部陰性為止。另外一種方式是培育健康豬，母豬產(chǎn)仔斷乳后，盡快分開(kāi)，隔離飼養(yǎng)，每窩小豬均須與其