艾滋病及HIV檢測(cè)培訓(xùn)

1、艾滋病及HIV檢測(cè)培訓(xùn)一、HIV的基本生物學(xué)特性屬于逆轉(zhuǎn)錄病毒科慢病毒屬。HIV在病毒分類中的定位是慢病毒屬中的人類免疫缺陷病毒組HIV分為HIV-1和HIV-2二個(gè)型別。HIV-1共有M組（主要亞型組）、O亞型組和N亞型組。M組又分為A、B、C、D、F1、F2、G、H、J、K共11個(gè)非重組亞型，另外近年來發(fā)現(xiàn)多個(gè)流行重組型（circulating recombinant form,CRFs），包括CRF01- CRF14。HIV 的 分 群和亞型A （ A1 A 2）BCDF1F2GHJKCRFCRF01-AECRF02-AGCRF03-ABCRF04-CPXCRF05-DFCRF06-CP

2、XCRF07-BCCRF08-BCCRF09-CPXCRF10-CDCRF11-CPXCRF12-BFCRF13-CPXCRF14-BGABCDEFGHIV-1 M組N組O組（O1-O3）HIV-2 HIV病毒體呈球形，直徑約100120nm。電鏡下成熟的HIV-1呈現(xiàn)一致密的圓柱狀核心和一個(gè)病毒包膜。病毒核心由病毒RNA、核心結(jié)構(gòu)蛋白和病毒復(fù)制所必須的酶類組成。HIV的RNA為兩條相同拷貝（完全同源）的正股RNA鏈。HIV對(duì)環(huán)境中物理因素和化學(xué)因素抵抗力均較弱，比HBV的抵抗力低得多。對(duì)HBV有效的消毒和滅活方法均適用于HIV。HIV對(duì)熱很敏感，對(duì)低溫耐受性強(qiáng)于高溫。因此，可以用高溫滅活病毒

3、，在低溫條件下保存病毒。在室溫（2227）液體環(huán)境下HIV可存活15天以上；經(jīng)56處理30min可使HIV在體外對(duì)人的T淋巴細(xì)胞失去感染性，但不能完全滅活血清中的HIV；經(jīng)過60 3小時(shí)或80 30min作用后不能檢出感染性病毒。HIV耐堿不耐酸HIV對(duì)化學(xué)因素很敏感室溫中0.5%次氯酸鈉或75%酒精只需1min即不能檢出RT酶活性；0.2%次氯酸鈉、0.1%家用漂白粉、0.1%戊二醛等5min即可滅活HIV；30%酒精溶液5min、20%酒精溶液10min可滅活HIV。對(duì)紫外線不敏感，離開人體可存活數(shù)小時(shí)至數(shù)天。二、艾滋病的傳播途徑 艾滋病毒存在于艾滋病感染者和艾滋病人的血液、精液、陰道宮頸

4、分泌物、乳汁、唾液、淚液、尿液、腦脊液、汗液、糞便、耳分泌液、支氣管分泌液等人體的分泌液中，其中以血液、精液、陰道宮頸分泌液艾滋病毒的含量最高，筑成了艾滋病傳染性很強(qiáng)的物質(zhì)基礎(chǔ)。艾滋病流行至今二十多年的科學(xué)研究證明，艾滋病在人群中的傳播只有三條路：性途徑、血液途徑和母嬰傳播。母親是怎樣將艾滋病病毒傳給自己的孩子的？ 母嬰傳播一般指感染艾滋病毒的母親傳給其胎兒或嬰兒的傳播方式。這種傳播可能發(fā)生在懷孕、分娩和哺乳期。研究報(bào)告指出，HIV感染母親所產(chǎn)的新生兒有1160可能發(fā)生感染。母嬰傳播有以下幾個(gè)階段：（1）宮內(nèi)感染：是胎兒生前在母親子宮中通過損傷胎盤進(jìn)入胎兒體內(nèi)，母親的胎盤、羊水中存在大量的艾滋

5、病病毒，可直接從胎兒嬌嫩的、未發(fā)育完全的皮膚中進(jìn)入胎兒體內(nèi)。（2）生產(chǎn)過程中感染 生產(chǎn)過程中由于胎兒通過產(chǎn)道受到反復(fù)撞擊和擠壓，血液和羊水等分泌物可被胎兒吸入體內(nèi)，也可通過皮膚損傷進(jìn)入體內(nèi)。研究發(fā)現(xiàn)，可在剛出生胎兒胃引流物中查出艾滋病病毒。所有這些發(fā)現(xiàn)表明，母嬰傳播可能有高達(dá)50的新生兒在出生時(shí)通過與母親生殖器官分泌液或血液接觸而發(fā)生感染。（3）哺乳期感染： 科學(xué)家研究了100多例非洲感染HIV的哺乳女性，發(fā)現(xiàn)有58的乳汁樣品中可檢測(cè)HIV，有時(shí)乳汁中感染性病毒數(shù)量很高，乳汁中病毒可通過嬰兒免疫不健全或損傷的口腔粘膜、消化道進(jìn)入體內(nèi)。 母嬰傳播中有30是在哺乳期感染的。 對(duì)感染HIV懷孕母親用

6、抗艾滋病毒預(yù)防服藥治療能降低母嬰傳播的感染率已得到肯定。三、HIV感染在體內(nèi)的動(dòng)態(tài)分期病毒進(jìn)入體內(nèi)在2天內(nèi)到達(dá)局部淋巴結(jié)，5天內(nèi)進(jìn)入血液循環(huán)。其結(jié)果是導(dǎo)致全身性播散，到達(dá)腦部和淋巴組織。從暴露于HIV到出現(xiàn)癥狀的時(shí)間一般是2-4周在急性感染的數(shù)天內(nèi)，出現(xiàn)高水平的病毒復(fù)制，血漿中可檢出107 /ml個(gè)病毒RNA分子。CD8+細(xì)胞數(shù)上升，伴有短暫的CD4+細(xì)胞計(jì)數(shù)下降。HIV抗體出現(xiàn)后，病毒血癥減輕，血漿中HIV RNA 的滴度下降，急性HIV感染的癥狀消失. 1、原發(fā)HIV感染期通常4-12周發(fā)生HIV抗體陽(yáng)轉(zhuǎn)。從HIV感染到產(chǎn)生抗體（或血請(qǐng)抗體陽(yáng)轉(zhuǎn)）稱為“窗口期”，95%的HIV感染都發(fā)生在感

7、染后的 5.8 個(gè)月內(nèi)，故一般認(rèn)為窗口期為3個(gè)月；高度懷疑者可追蹤至6個(gè)月。“ HIV感染早期”定義：血清抗體陽(yáng)轉(zhuǎn)和HIV感染6個(gè)月之間的階段。6個(gè)月時(shí)病毒載量達(dá)到一個(gè)“固定值”，早期抗病毒治療可降至很低，如果不進(jìn)行抗病毒治療，幾年內(nèi)不會(huì)有很大變化。此固定值和預(yù)后有很大關(guān)系。早期治療的目標(biāo)之一是重新設(shè)定固定值，使固定值保持較低水平。病人無臨床癥狀，體檢時(shí)無異常，少數(shù)可查到“持續(xù)性全身性淋巴腺病”（PGL），腫大的淋巴結(jié)至少發(fā)生在兩處,且不是腹股溝淋巴結(jié)。細(xì)胞內(nèi)的病毒大部分處于潛伏狀態(tài)，所以淋巴結(jié)中病毒濃度很高。淋巴組織是病毒的主要藏身處，外周血中的病毒載量相對(duì)不高。2、無癥狀感染期(潛伏期)3

8、、艾滋病前期（“ARC”或“B期”） 艾滋病前期癥狀包括被HIV感染后更常見更嚴(yán)重的癥狀（包括鵝口瘡、口腔毛狀黏膜白斑病、發(fā)熱、體重減輕等），但還不是艾滋病的典型癥狀。4、艾滋病期 當(dāng)患者出現(xiàn)典型癥狀時(shí)，CD4+細(xì)胞計(jì)數(shù)通常降至200/ul以下，血和淋巴結(jié)中的HIV又上升到相當(dāng)高的水平，同時(shí)抗病毒CD8+細(xì)胞反應(yīng)減弱。在艾滋病期病人血液中的HIV群體又一次變得相當(dāng)均一，通常是細(xì)胞融合（S1）表型為主，與T細(xì)胞嗜性有關(guān)。四、HIV感染的三種臨床結(jié)局和長(zhǎng)期存活 的相關(guān)因素： 在感染早期，其免疫功能未受損害，但在810年內(nèi)免疫控制能力逐漸下降，最后發(fā)展成艾滋病。病程快速進(jìn)展，CD4+細(xì)胞計(jì)數(shù)在2-5

9、年內(nèi)迅速下降,抗HIV的抗體水平很低，而且該抗體中和HIV的能力也較差?？焖龠M(jìn)展者最顯著的特征：HIV感染后一直維持較高的病毒載量，而且分離的HIV有均一性。3.長(zhǎng)期存活者（又稱長(zhǎng)期不進(jìn)展者）這些感染者能維持健康狀態(tài)12年以上，并且CD4+細(xì)胞計(jì)數(shù)維持正常。長(zhǎng)期存活者在感染者中的比例一般在810%，目前最長(zhǎng)已達(dá)20多年。3、尿液HIV抗體檢測(cè)標(biāo)本：除血液外還可用唾液檢測(cè)HIV（Orasure，如Salivacard），尿液檢測(cè)HIV 。1996年美國(guó)FDA首次批準(zhǔn)HIV-1尿檢EIA試劑，我國(guó)也正在研制。主要適用于靜脈注射毒品（IDUs）人群和其它高危人群的大面積流行病學(xué)調(diào)查。陽(yáng)性標(biāo)本仍需采血

10、做確認(rèn)試驗(yàn)才能確定HIV抗體陽(yáng)性。另外還有家庭用HIV檢測(cè)（Home Access System）。 樣品篩查檢測(cè)選用篩查試劑陽(yáng)性反應(yīng)陰性反應(yīng)復(fù) 測(cè)陰性報(bào)告原有試劑+另一種篩查試劑一陰一陽(yáng)均陰性反應(yīng)均陽(yáng)性反應(yīng)送確認(rèn)陰性報(bào)告4、HIV抗體篩查的流程圖1、免疫印跡式驗(yàn)（WB）： WB是將HIV病毒蛋白用SDS電泳，把分子量大小不等的蛋白帶分離開來，然后再把這些已經(jīng)分離的不同蛋白帶電轉(zhuǎn)移到硝酸纖維素膜上。將此膜切割成條裝，每一條硝酸纖維膜上均含有經(jīng)電泳分離過的HIV病毒抗原。 待檢血清樣品1：100稀釋，加到放置硝酸纖維膜的槽內(nèi)，恒溫震蕩，充分接觸反應(yīng)。血清中抗-HIV抗體，與膜條上的抗原帶相結(jié)合。

11、加入抗人-IgG酶結(jié)合物和底物后，即可使抗原-抗體結(jié)合帶呈現(xiàn)紫褐色。根據(jù)出現(xiàn)條帶情況判定結(jié)果。（二）HIV抗體確認(rèn)試驗(yàn) 表3 不同國(guó)際組織HIV抗體免疫印跡（WB）試驗(yàn)陽(yáng)性結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn)國(guó)際組織對(duì)HIV-1對(duì)HIV-2美國(guó)CDCgp41、gp120或gp160和P24中的任何兩條帶無美國(guó)FDAP24和P31，再加gp41或gp120/gp160之中任意一條無世界衛(wèi)生組織（WHO）要有兩條Env帶，無論有無Gag或Pol帶（也可能存在）要有兩條Env帶，無論有無Gag帶或Pol帶逆轉(zhuǎn)錄病毒血清學(xué)標(biāo)準(zhǔn)委員會(huì)P24或P31中的一條，并有一條Env帶無美國(guó)紅十字會(huì)Gag、Pol和Env帶各有一條無德國(guó)P

12、aul Ehrlich研究院有兩條帶，其中一條必須是Env帶無我國(guó)判定標(biāo)準(zhǔn)：（1）HIV-1抗體陽(yáng)性（+）有下列任何一項(xiàng)者，即可確認(rèn)：至少有二條env帶（gp41和gp160或gp120）出現(xiàn)，gp41和gp160，或gp41和gp120，或gp41和gp160/gp120。至少有一條env帶和p24帶同時(shí)出現(xiàn)。（2）HIV-2抗體血清學(xué)陽(yáng)性反應(yīng)（+） 符合WHO標(biāo)準(zhǔn)（有二條env帶，有或無gag帶），符合試劑盒標(biāo)準(zhǔn)，方可判為血清學(xué)陽(yáng)性反應(yīng)。（3）HIV抗體陰性（-）無HIV抗體特異帶出現(xiàn)，或僅有p17。（4）HIV抗體不確定（）：出現(xiàn)HIV特異性抗體帶，但帶型不足以確認(rèn)陽(yáng)性者。 2、免疫熒光

13、試驗(yàn)（IFA） 將HIV感染的淋巴細(xì)胞涂于玻片上，經(jīng)固定后即為試驗(yàn)用抗原片。待檢血清中的抗-HIV抗體與抗原結(jié)合后再與熒光素標(biāo)記的抗人免疫球蛋白結(jié)合，在熒光顯微鏡下可見到含草綠色熒光的細(xì)胞和多核巨細(xì)胞（胞漿熒光）。目前國(guó)內(nèi)尚無商品化產(chǎn)品，僅在少數(shù)有條件的實(shí)驗(yàn)室使用。（一）孕期 孕期產(chǎn)前檢查：應(yīng)在知情同意的情況下常規(guī)做HIV抗體篩查試驗(yàn)。最好選擇ELISA方法（無條件地區(qū)可用快速檢測(cè)）篩查。二、HIV檢測(cè)方法的選擇圖3 孕產(chǎn)期保健服務(wù)流程（適用于有充分的時(shí)間進(jìn)行復(fù)測(cè)和確認(rèn)試驗(yàn)者） 對(duì)產(chǎn)前檢查的孕婦進(jìn)行預(yù)防艾滋病母嬰傳播咨詢，獲得知情同意，采集樣本HIV抗體篩查試驗(yàn)第1種篩查試劑（高敏感性）陽(yáng)性

14、陰性第2種篩查試劑（高特異性）陽(yáng)性 陰性第3種篩查試劑（高特異性）不確定 陽(yáng)性 陰性提供疑似陽(yáng)性咨詢，建議做確認(rèn)試驗(yàn)確認(rèn)試驗(yàn)提供咨詢隨訪，建議3個(gè)月后再次做確認(rèn)試驗(yàn)出具“HIV抗體陽(yáng)性”報(bào)告提供咨詢、指導(dǎo)、隨訪出具“HIV抗體陰性”報(bào)告提供咨詢、指導(dǎo)、常規(guī)孕期保?。ǘ┊a(chǎn)時(shí) 孕期未接受HIV抗體檢測(cè)的產(chǎn)婦： 首先應(yīng)進(jìn)行咨詢，取得知情同意以后，可同時(shí)用兩種不同的快速檢測(cè)試劑進(jìn)行HIV抗體篩查試驗(yàn)。 根據(jù)檢測(cè)結(jié)果給予不同的咨詢和干預(yù)。若產(chǎn)婦已臨產(chǎn)，且只能用一種快速檢測(cè)試劑檢測(cè)，結(jié)果陽(yáng)性，即視為HIV抗體陽(yáng)性處理。圖4 產(chǎn)時(shí)保健服務(wù)流程（適用于沒有充分的時(shí)間進(jìn)行復(fù)測(cè)和確認(rèn)試驗(yàn)者）對(duì)產(chǎn)前未接受HIV抗

15、體檢測(cè)的即將/或臨產(chǎn)產(chǎn)婦進(jìn)行預(yù)防艾滋病母嬰傳播咨詢，獲得知情同意，采集樣本同時(shí)用兩種不同的快速檢測(cè)試劑進(jìn)行HIV抗體篩查試驗(yàn)若產(chǎn)婦已臨產(chǎn)，且只能用一種快速試劑檢測(cè)，結(jié)果陽(yáng)性，即視為HIV抗體陽(yáng)性處理檢測(cè)后咨詢，解釋結(jié)果檢測(cè)后咨詢，知情同意選擇干預(yù)措施正常分娩正常分娩產(chǎn)后進(jìn)行HIV確認(rèn)試驗(yàn)產(chǎn)后暫時(shí)無法進(jìn)行確認(rèn)試驗(yàn)時(shí)（三）產(chǎn)后 篩查試驗(yàn)陽(yáng)性的產(chǎn)婦在產(chǎn)后要進(jìn)行HIV確認(rèn)試驗(yàn)。根據(jù)檢測(cè)結(jié)果再進(jìn)行咨詢和干預(yù)。（四）嬰兒檢測(cè) 嬰兒應(yīng)于12個(gè)月進(jìn)行HIV抗體檢測(cè)，結(jié)果陰性則排除感染，納入正常兒童保?。魂?yáng)性者繼續(xù)追蹤隨訪，至18個(gè)月再次進(jìn)行HIV抗體檢測(cè)，結(jié)果陰性排除感染，納入正常兒童保?。魂?yáng)性嬰兒轉(zhuǎn)入當(dāng)?shù)匕?/p>

16、滋病綜合防治系統(tǒng)。 為配合治療，嬰兒HIV感染的早期診斷也可以采用核酸檢測(cè)。目前以2次核酸檢測(cè)結(jié)果作為診斷的依據(jù)，2次不同時(shí)間的樣本核酸檢測(cè)均為陰性診斷未感染，2次不同時(shí)間的樣本核酸檢測(cè)均為陽(yáng)性診斷為HIV感染。至18個(gè)月仍要進(jìn)行HIV抗體檢測(cè)加以確認(rèn)。 圖5 嬰兒檢測(cè)和隨訪服務(wù)流程如下：對(duì)艾滋病病毒感染的產(chǎn)婦進(jìn)行預(yù)防艾滋病母嬰傳播咨詢，指導(dǎo)喂養(yǎng)，常規(guī)兒童保健嬰兒12個(gè)月進(jìn)行HIV抗體篩查*試驗(yàn) 陰性 陽(yáng)性用另一種篩查*試劑再次檢測(cè) 陰性 陽(yáng)性排除兒童感染常規(guī)兒童保健18個(gè)月時(shí)再進(jìn)行HIV抗體篩查*試驗(yàn) 用另一種篩查*試劑再次檢測(cè) 確認(rèn)試驗(yàn) 陰性 陰性 陰性 陰性 陽(yáng)性 從事快速HIV檢測(cè)單位

17、必須遵守有關(guān)部門批準(zhǔn)購(gòu)買有效的試劑從事檢測(cè)人員經(jīng)過培訓(xùn)，有上崗證按規(guī)定對(duì)象檢測(cè)嚴(yán)格按廠家說明書操作滿足質(zhì)量保證要求做好檢測(cè)前后咨詢（一）實(shí)驗(yàn)室 1.艾滋病檢測(cè)工作必須在經(jīng)批準(zhǔn)的艾滋病實(shí)驗(yàn)室內(nèi)進(jìn)行。未設(shè)置艾滋病實(shí)驗(yàn)室的機(jī)構(gòu)或單位及未經(jīng)備案或批準(zhǔn)的艾滋病實(shí)驗(yàn)室不得開展相關(guān)的艾滋病檢測(cè)工作。 2.必須立即開展或已經(jīng)開展艾滋病檢測(cè)工作而又暫時(shí)不具備艾滋病篩查實(shí)驗(yàn)室設(shè)置條件的單位，作為一種過渡，可以暫時(shí)設(shè)立“艾滋病檢測(cè)點(diǎn)”?！鞍滩z測(cè)點(diǎn)”也必須達(dá)到安全防護(hù)的基本要求，并經(jīng)省衛(wèi)生行政部門批準(zhǔn)和備案。三、HIV檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室及管理要求（三）儀器設(shè)備 艾滋病實(shí)驗(yàn)室的儀器設(shè)備應(yīng)能滿足安全防護(hù)要求。使用國(guó)家規(guī)定需要強(qiáng)檢的儀器設(shè)備，必須由同級(jí)計(jì)量認(rèn)證部門定期檢定，非國(guó)家強(qiáng)檢的儀器設(shè)備應(yīng)定期維護(hù)和校準(zhǔn)。（四）檢測(cè)試劑 艾滋病檢測(cè)工作中所使用的檢測(cè)試劑，必