DB11-T 1806-2020實驗動物 寄生蟲檢測

1、ICS 65.020.30CCS B 44DB11北京市地方標(biāo)準(zhǔn)DB11/ T 18062020代替 DB11/T 828.22011，DB11/T 1053.22013，DB11/T 1460.12017，DB11/T 1460.22017，DB11/T1460.32017，DB 11/T 1460.42018，DB 11/T 1460.52018實驗動物 寄生蟲檢測Laboratory animalParasitological testing2020 - 12 - 24 發(fā)布2021 - 04 - 01 實施北京市市場監(jiān)督管理局發(fā) 布DB11/T 18062020DB11/T 18062

2、020III目次前言II范圍1規(guī)范性引用文件1術(shù)語和定義1等級分類2檢測要求2檢測程序7檢測方法8檢測規(guī)則11結(jié)果判定12結(jié)論與報告12附錄 A（規(guī)范性） 實驗雞的組織滴蟲檢測13附錄 B（規(guī)范性） 實驗鵝的毛滴蟲檢測14附錄 C（規(guī)范性） 實驗鴿的瘧原蟲檢測15附錄 D（規(guī)范性） 實驗魚的寄生蟲檢測16參考文獻(xiàn)17前言本文件按照GB/T 1.12020標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則 第1部分:標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則的規(guī)定起草。本文件代替DB11/T 828.22011實驗用小型豬 第2部分:寄生蟲學(xué)等級及監(jiān)測、DB11/T 1053.22013實驗用魚 第2部分:寄生蟲學(xué)等級及監(jiān)測、DB11/T 146

3、0.12017實驗動物 寄生蟲學(xué)等級及監(jiān)測 第1部分:實驗用豬、DB11/T 1460.22017實驗動物 寄生蟲學(xué)等級及監(jiān)測 第2部分: 實驗用牛、DB11/T 1460.32017實驗動物 寄生蟲學(xué)等級及監(jiān)測 第3部分:實驗用羊、DB 11/T 1460.42018實驗動物 寄生蟲檢測與評價 第4部分:實驗用狨猴、DB 11/T 1460.52018實驗動物 寄生蟲檢測與評價 第5部分:實驗用長爪沙鼠，除結(jié)構(gòu)調(diào)整和編輯性改動外，主要技術(shù)變化如下：增加了“實驗雪貂、實驗貓、實驗雞、實驗鴨、實驗鵝和實驗鴿”寄生蟲檢測相關(guān)內(nèi)容（見6.2.5、6.2.6、6.2.7、6.2.8）。本文件由北京市科

4、學(xué)技術(shù)委員會提出并歸口。本文件由北京市科學(xué)技術(shù)委員會組織實施。本文件起草單位：中國農(nóng)業(yè)大學(xué)、中國食品藥品檢定研究院、國家衛(wèi)生健康委科學(xué)技術(shù)研究所、中國科學(xué)院水生生物研究所、中國動物疫病預(yù)防控制中心、首都醫(yī)科大學(xué)、浙江省醫(yī)學(xué)科學(xué)院、中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院醫(yī)學(xué)實驗動物研究所、北京康藍(lán)生物技術(shù)有限公司、北京市實驗動物管理辦公室、北京實驗動物行業(yè)協(xié)會、北京市標(biāo)準(zhǔn)化研究院、中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院哈爾濱獸醫(yī)研究所、北京華阜康生物科技股份有限公司、吉林大學(xué)。本文件主要起草人：劉賢勇、李冠民、賀爭鳴、田克恭、鞏薇、陳洪巖、姜洪杰、索勛、李根平、王錫樂、劉文菊、齊靜、劉云波、魏強(qiáng)、向志光、劉先菊、黃瀾、李長龍、付瑞、岳秉飛、薩

5、曉嬰、王吉、杜小燕、陳振文、肖沖、馮育芳、袁寶、胡進(jìn)平、任文陟、樊子風(fēng)、宮鵬濤、楊利峰、鐘景川、樊晨茹、向碧琪、畢菲菲、王桂堂、李文祥、崔宗斌、孫德明等。本文件及其所代替文件的歷次版本發(fā)布情況為：首次發(fā)布分別為DB11/T 828.22011、DB11/T 1053.22013、DB11/T 1460.12017、DB11/T 1460.22017、DB11/T 1460.32017、DB 11/T 1460.42018、DB 11/T 1460.52018；本次為第一次修訂。DB11/T 18062020DB11/T 18062020 PAGE 5 PAGE 4實驗動物 寄生蟲檢測范圍本文件

6、規(guī)定了實驗動物的寄生蟲學(xué)等級分類、檢測要求、檢測程序、檢測方法、檢測規(guī)則、結(jié)果判定、結(jié)論與報告。本文件適用于實驗小型豬、實驗豬、實驗牛、實驗羊、實驗狨猴、實驗長爪沙鼠、實驗雪貂、實驗貓、實驗雞、實驗鴨、實驗鵝、實驗鴿、實驗魚（斑馬魚和劍尾魚）的寄生蟲檢測。規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T 18448.1 實驗動物 體外寄生蟲檢測方法GB/T 18448.2 實驗動物 弓形蟲檢測方法GB/T 18448.3 實驗動物 兔腦原

7、蟲檢測方法GB/T 18448.4 實驗動物 卡氏肺孢子蟲檢測方法GB/T 18448.6 實驗動物 蠕蟲檢測方法GB/T 18448.7 實驗動物 瘧原蟲檢測方法GB/T 18448.9 實驗動物 腸道溶組織內(nèi)阿米巴檢測方法GB/T 18448.10 實驗動物 腸道鞭毛蟲和纖毛蟲檢測方法GB/T18642豬旋毛蟲病診斷技術(shù)GB/T18644豬囊尾蚴病診斷技術(shù)GB/T18647動物球蟲病診斷技術(shù)GB/T23239伊氏錐蟲病診斷技術(shù)NY/T541獸醫(yī)診斷樣品采集、保存與運(yùn)輸技術(shù)規(guī)范NY/T1466動物棘球蚴病診斷技術(shù)NY/T1949隱孢子蟲卵囊檢測技術(shù) 改良抗酸染色法SN/T1225住白細(xì)胞蟲病

8、診斷方法 顯微鏡檢查法SN/T2975魚華支睪吸蟲囊蚴鑒定方法SN/T3485牛焦蟲病檢疫技術(shù)規(guī)范SN/T3499新孢子蟲病檢疫技術(shù)規(guī)范術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本文件。3.1實驗動物 laboratory animal經(jīng)人工飼育，對其攜帶的微生物和寄生蟲實行控制，遺傳背景明確或者來源清楚，用于科學(xué)研究、教學(xué)、生產(chǎn)和檢定以及其他科學(xué)實驗的動物。來源: GB 149252010, 3.13.2普通級實驗動物 conventional (CV) laboratory animal不攜帶所規(guī)定的人獸共患病病原、動物烈性傳染病病原和對科學(xué)實驗有重大干擾的病原的實驗動物。3.2.1無特定抗原抗體普通

9、級實驗動物 specific antigen & antibody-free conventional (CV) laboratory animal普通級實驗動物中未免疫特定的疫苗，且經(jīng)檢測不攜帶實驗要求排除的特定病原微生物抗原抗體的實驗動物，稱為無特定抗原抗體普通級實驗動物。3.3無特定病原體級實驗動物 specific pathogen free (SPF) laboratory animal除普通級實驗動物應(yīng)排除的病原外，不攜帶主要潛在感染或條件致病和對科學(xué)實驗干擾大的病原的實驗動物。3.4無菌級實驗動物 germ free (GF) laboratory animal無可檢出的一切生命

10、體的實驗動物。等級分類根據(jù)對微生物和寄生蟲控制的程度，實驗動物分為普通級實驗動物、無特定病原體級實驗動物和無菌級實驗動物三個等級。檢測要求外觀檢查對待檢實驗動物的精神狀態(tài)、行為、被毛、天然孔分泌物進(jìn)行外觀檢查。寄生蟲檢測項目實驗豬和實驗小型豬各等級寄生蟲檢測項目按照表 1 的規(guī)定執(zhí)行。表1 實驗豬和實驗小型豬各等級寄生蟲檢測項目動物等級寄生蟲檢測要求普通級體外寄生蟲（Ectoparasites）弓形蟲（Toxoplasma）旋毛蟲（Trichinella）豬囊尾蚴（Cysticercus）無特定病原體體外寄生蟲（Ectoparasites）弓形蟲（Toxoplasma）旋毛蟲（Trichine

11、lla）豬囊尾蚴（Cysticercus）球蟲（Coccidia）小袋纖毛蟲（Balantidium）賈第蟲（Giardia）阿米巴原蟲（Amoeba）隱孢子蟲（Cryptosporidium）蠕蟲（Helminths）無菌級任何可檢出的生命體注：“”表示必檢項，要求陰性。實驗牛和實驗羊各等級寄生蟲檢測按照表 2 的規(guī)定執(zhí)行。表2 實驗牛和實驗羊各等級寄生蟲檢測項目動物等級寄生蟲實驗牛檢測要求實驗羊檢測要求普通級體外寄生蟲（Ectoparasites）棘球蚴（Echinococcus）弓形蟲（Toxoplasma）無特定病原體級體外寄生蟲（Ectoparasites）棘球蚴（Echinococ

12、cus）弓形蟲（Toxoplasma）球蟲（Coccidia）新孢子蟲（Neospora）梨形蟲（Piroplasma）賈第蟲（Giardia）錐蟲（Trypanosome）蠕蟲（Helminths）隱孢子蟲（Cryptosporidium）無菌級任何可檢出的生命體注：“”表示必檢項，要求陰性；“”表示需要時檢測項目，要求陰性。實驗狨猴各等級寄生蟲檢測項目按照表 3 的規(guī)定執(zhí)行。表3 實驗狨猴各等級寄生蟲檢測項目動物等級寄生蟲檢測要求普通級體外寄生蟲（Ectoparasites）弓形蟲（Toxoplasma）無特定病原體級體外寄生蟲（Ectoparasites）弓形蟲（Toxoplasma）鞭

13、毛蟲（Flagellates）蠕蟲（Helminths）球蟲（Coccidia）瘧原蟲（Plasmodium）無菌級任何可檢出的生命體注：“”表示必檢項目，要求陰性。實驗長爪沙鼠各等級寄生蟲檢測項目按照表 4 的規(guī)定執(zhí)行。表4 實驗長爪沙鼠各等級寄生蟲檢測項目動物等級寄生蟲檢測要求普通級體外寄生蟲（Ectoparasites）弓形蟲（Toxoplasma）無特定病原體級體外寄生蟲（Ectoparasites）弓形蟲（Toxoplasma）纖毛蟲（Ciliates）鞭毛蟲（Flagellates）蠕蟲（Helminths）卡氏肺孢子蟲（Pneumocystis carinii）兔腦原蟲（Ence

14、phalitozoon cuniculi）無菌級任何可檢出的生命體注：“”表示必檢項，要求陰性。實驗雪貂各等級寄生蟲檢測項目按照表 5 的規(guī)定執(zhí)行。DB11/T 18062020DB11/T 1806202078表5 實驗雪貂各等級寄生蟲檢測項目動物等級寄生蟲檢測要求普通級體外寄生蟲（Ectoparasites）弓形蟲（Toxoplasma）無特定病原體級體外寄生蟲（Ectoparasites）弓形蟲（Toxoplasma）蠕蟲（Helminths）球蟲（Coccidia）鞭毛蟲（Flagellates）無菌級任何可檢出的生命體注：“”表示必檢項，要求陰性。實驗貓各等級寄生蟲檢測項目按照表 6

15、 的規(guī)定執(zhí)行。表6 實驗貓各等級寄生蟲檢測項目動物等級寄生蟲檢測要求普通級體外寄生蟲（Ectoparasites）弓形蟲（Toxoplasma）華支睪吸蟲（Clonorchis sinensis）無特定病原體級體外寄生蟲（Ectoparasites）弓形蟲（Toxoplasma）華支睪吸蟲（Clonorchis sinensis）纖毛蟲（Ciliates）鞭毛蟲（Flagellates）蠕蟲（Helminths）兔腦原蟲（Encephalitozoon cuniculi）球蟲（Coccidia）無菌級任何可檢出的生命體注：“”表示必檢項，要求陰性。實驗雞、實驗鴨、實驗鵝和實驗鴿各等級寄生蟲檢測

16、項目按照表 7 的規(guī)定執(zhí)行。表7 實驗雞、實驗鴨、實驗鵝和實驗鴿各等級寄生蟲檢測項目動物等級寄生蟲實驗雞檢測要求實驗鴨檢測要求實驗鵝檢測要求實驗鴿檢測要求普通級體外寄生蟲（Ectoparasites）蠕蟲（Helminths）弓形蟲（Toxoplasma）表 7 實驗雞、實驗鴨、實驗鵝和實驗鴿各等級寄生蟲檢測項目（續(xù)）動物等級寄生蟲實驗雞檢測要求實驗鴨檢測要求實驗鵝檢測要求實驗鴿檢測要求無特定病原體級體外寄生蟲（Ectoparasites）蠕蟲（Helminths）弓形蟲（Toxoplasma）住白細(xì)胞蟲（Leucocytozoon）阿米巴原蟲（Ameba）隱孢子蟲（Cryptosporidi

17、um）組織滴蟲（Histomonas）球蟲（Coccidia）毛滴蟲（Trichomonas）瘧原蟲（Plasmodium）無菌級任何可檢出的生命體注：“”表示必檢項，要求陰性；“”表示需要時檢測項目，要求陰性。實驗魚各等級寄生蟲檢測項目按照表 8 的規(guī)定執(zhí)行。表8 實驗魚各等級寄生蟲檢測項目動物等級寄生蟲檢測要求普通級微孢子蟲（Pseudoloma neurophilia）卵圓鞭毛蟲（Piscinoodinium pillulare）多子小瓜蟲（Ichthyophthirius multifiliis）頭槽絳蟲（Bothriocephalidae）無特定病原體級微孢子蟲（Pseudoloma

18、 neurophilia）卵圓鞭毛蟲（Piscinoodinium pillulare）多子小瓜蟲（Ichthyophthirius multifiliis）頭槽絳蟲（Bothriocephalidae）斜管蟲（Chilodonella）車輪蟲（Trichodina）杯體蟲（Apiosoma）粘孢子蟲（Myxozoan）指環(huán)蟲（Dactylogyrus）絨毛偽毛細(xì)線蟲（Pseudocapillaria tomentosa）三代蟲（Gyrodactylus）駝形線蟲（Camallanidae）錨頭鳋（Lernaea）無菌級任何可檢出的生命體注：“”表示必檢項，要求陰性。檢測程序?qū)嶒炐⌒拓i、實驗豬

19、、實驗牛、實驗羊、實驗狨猴、實驗長爪沙鼠、實驗雪貂、實驗貓、實驗雞、實驗鴨、實驗鵝和實驗鴿檢測程序外觀檢查實驗小型豬、實驗豬、實驗牛、實驗羊、實驗狨猴、實驗長爪沙鼠、實驗雪貂、實驗貓、實驗雞、實驗鴨、實驗鵝和實驗鴿檢測程序按照圖 1 的規(guī)定執(zhí)行。編號麻醉毛發(fā)、羽毛或皮屑血液新鮮糞便檢測結(jié)果判定判定結(jié)論圖1 實驗動物寄生蟲檢測程序麻醉應(yīng)根據(jù)不同動物種類、采集部位決定是否需要麻醉。需要麻醉時，應(yīng)考慮不同種類實驗動物的耐受劑量，可采用吸入性麻醉或注射麻醉，麻醉過程中應(yīng)隨時注意實驗動物的反應(yīng)。實施麻醉人員應(yīng)經(jīng)過相應(yīng)培訓(xùn)并具備相應(yīng)的能力。釆血方法以及毛發(fā)、羽毛或皮屑、新鮮糞便的采樣方法參照 NY/T 5

20、41 進(jìn)行。檢測結(jié)果存疑，需要進(jìn)一步確診時，應(yīng)結(jié)合臨床癥狀和前期檢測結(jié)果，可采集動物組織或特定樣本進(jìn)行進(jìn)一步檢測。實驗魚檢測程序麻醉外觀檢查實驗魚檢測程序按照圖2的規(guī)定執(zhí)行。實驗魚的麻醉應(yīng)方便于檢查、采用和滿足動物福利倫理的要求。編號剖檢及體內(nèi)寄生蟲檢查和取材體表寄生蟲檢查和取材解剖鏡和顯微鏡檢查結(jié)果判定判定結(jié)論圖 2 實驗魚寄生蟲學(xué)檢測程序檢測方法實驗豬和實驗小型豬寄生蟲學(xué)檢測方法按照表 9 的規(guī)定執(zhí)行。DB11/T 18062020DB11/T 18062020 PAGE 17 PAGE 16表9 實驗豬和實驗小型豬寄生蟲學(xué)檢測方法寄生蟲檢測方法體外寄生蟲GB/T 18448.1旋毛蟲GB

21、/T 18642弓形蟲GB/T 18448.2豬囊尾蚴GB/T 18644球蟲GB/T 18647小袋纖毛蟲GB/T 18448.10賈第蟲GB/T 18448.10阿米巴原蟲GB/T 18448.9隱孢子蟲NY/T 1949蠕蟲GB/T 18448.6實驗牛和實驗羊寄生蟲學(xué)檢測方法按照表 10 的規(guī)定執(zhí)行。表10 實驗牛和實驗羊寄生蟲學(xué)檢測方法寄生蟲檢測方法體外寄生蟲GB/T 18448.1棘球蚴NY/T 1466弓形蟲GB/T 18448.2隱孢子蟲NY/T 1949球蟲GB/T 18647梨形蟲SN/T 3485新孢子蟲SN/T 3499賈第蟲GB/T 18448.10錐蟲GB/T 23

22、239蠕蟲GB/T 18448.6實驗狨猴寄生蟲學(xué)檢測方法按照表 11 的規(guī)定執(zhí)行。表11 實驗狨猴寄生蟲學(xué)檢測方法寄生蟲檢測方法體外寄生蟲GB/T 18448.1弓形蟲GB/T 18448.2瘧原蟲GB/T 18448.7蠕蟲GB/T 18448.6鞭毛蟲GB/T 18448.10球蟲GB/T 18647實驗長爪沙鼠寄生蟲學(xué)檢測方法按照表 12 的規(guī)定執(zhí)行。表12 實驗長爪沙鼠寄生蟲學(xué)檢測方法寄生蟲檢測方法體外寄生蟲GB/T 18448.1弓形蟲GB/T 18448.2兔腦原蟲GB/T 18448.3蠕蟲GB/T 18448.6鞭毛蟲和纖毛蟲GB/T 18448.10卡氏肺孢子蟲GB/T 1

23、8448.4實驗雪貂寄生蟲學(xué)檢測方法按照表 13 的規(guī)定執(zhí)行。表13 實驗雪貂寄生蟲學(xué)檢測方法寄生蟲檢測方法體外寄生蟲GB/T 18448.1弓形蟲GB/T 18448.2蠕蟲GB/T 18448.6鞭毛蟲GB/T 18448.10球蟲GB/T 18647實驗貓寄生蟲學(xué)檢測方法按照表 14 的規(guī)定執(zhí)行。表14 實驗貓寄生蟲學(xué)檢測方法寄生蟲檢測方法體外寄生蟲GB/T 18448.1華支睪吸蟲SN/T 2975弓形蟲GB/T 18448.2鞭毛蟲和纖毛蟲GB/T 18448.10蠕蟲GB/T 18448.6兔腦原蟲GB/T 18448.3球蟲GB/T 18647實驗雞、實驗鴨、實驗鵝和實驗鴿寄生蟲

24、檢測方法按照表 15 的規(guī)定執(zhí)行。表15 實驗雞、實驗鴨、實驗鵝和實驗鴿寄生蟲檢測方法寄生蟲檢測方法體外寄生蟲GB/T 18448.1弓形蟲GB/T 18448.2球蟲GB/T 18647表 15 實驗雞、實驗鴨、實驗鵝和實驗鴿寄生蟲檢測方法（續(xù)）寄生蟲檢測方法阿米巴原蟲GB/T 18448.9蠕蟲GB/T 18448.6隱孢子蟲NY/T 1949住白細(xì)胞蟲SN/T 1225組織滴蟲附錄 A毛滴蟲附錄 B瘧原蟲附錄 C實驗魚寄生蟲學(xué)檢測按照附錄 D 的規(guī)定執(zhí)行。檢測規(guī)則檢測頻率每3個月應(yīng)至少檢測1次。抽樣抽樣要求按寄生蟲和微生物采樣要求聯(lián)合抽樣。抽樣月齡符合表16的要求。表16 實驗動物抽樣月

25、齡動物種類抽樣月齡實驗小型豬6實驗豬2實驗牛6實驗羊2實驗狨猴6實驗長爪沙鼠2實驗貓6實驗雪貂6實驗雞1實驗鴨1實驗鵝1實驗鴿1實驗魚應(yīng)選擇 3 月齡以上的成魚，必要時同時取飼養(yǎng)環(huán)境水樣用于檢測；應(yīng)在不同的水環(huán)境內(nèi)隨機(jī)抽樣。抽樣方法抽樣方法按照NY/T 541的規(guī)定執(zhí)行。抽樣數(shù)量實驗魚抽樣數(shù)量：同一水環(huán)境實驗魚數(shù)量少于100尾，則抽樣5尾；大于等于100尾，則按5%比例抽取，最大抽樣量為30尾。其他動物抽樣數(shù)量符合表17的要求。表17 實驗動物抽樣數(shù)量群體大?。ㄖ?頭/羽）抽樣數(shù)量（只/頭/羽）10051005001050015送檢要求樣品和送檢單一同送達(dá)具備檢測能力的實驗室，送檢單應(yīng)寫明檢品

26、名稱、品系、等級、數(shù)量及檢測項目等內(nèi)容。結(jié)果判定抗體檢測血清樣品經(jīng)間接血凝實驗（ Indirect Hemagglutination Assay ， IHA ）、酶聯(lián)免疫吸附測定（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay，ELISA）或間接免疫熒光（Indirect Fluorescence Assay，IFA） 檢測，血清抗體陰性判為合格。蟲體和蟲卵檢查經(jīng)檢測，未檢出蟲體、蟲卵，判為合格。病原體核酸 聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（Polymerase Chain Reaction, PCR）檢測經(jīng)檢測，未見陽性結(jié)果判為合格。結(jié)論與報告結(jié)論按照檢測規(guī)則，檢測指標(biāo)均合格，依據(jù)表1表8

27、，判為符合相應(yīng)等級的實驗動物。按照檢測規(guī)則，若檢測指標(biāo)有1項（含）以上不合格，依據(jù)表1表8，判為不符合相應(yīng)等級的實驗動物。報告根據(jù)檢測結(jié)果出具檢測報告。附 錄 A（規(guī)范性）實驗雞的組織滴蟲檢測儀器設(shè)備和材料顯微鏡，PCR儀，凝膠電泳儀，凝膠成像儀，測序儀，載玻片，蓋玻片，生理鹽水，15%的甲醛固定液，乙醇，二甲苯，蘇木素，鹽酸，伊紅，中性樹脂，石蠟，姬姆薩染液，動物組織基因組提取試劑盒，DNA聚合酶，dNTP，聚合酶緩沖液，瓊脂糖等。檢查步驟A. 2.1 外觀檢查從精神狀態(tài)、行為、被毛和天然孔分泌物對實驗雞進(jìn)行外觀檢查。A. 2.2 剖檢和病理檢查剖檢實驗雞，進(jìn)行病理學(xué)大體觀察。觀察肝臟是否腫

28、大，表面是否有黃褐色壞死灶；觀察盲腸是否腫脹，腸腔內(nèi)是否有干酪樣物。A. 2.3 蟲體檢查宜采用以下三種方法：取剖檢的實驗雞盲腸，除去內(nèi)容物后取盲腸粘膜表面的刮取物于載玻片上，滴加40的生理鹽水稀釋，顯微鏡下觀察是否有活動的組織滴蟲蟲體存在。取剖檢的實驗雞的肝組織涂片進(jìn)行姬氏染色，顯微鏡下觀察是否有組織滴蟲蟲體存在。取剖檢的實驗雞的肝臟和盲腸組織制作組織切片并進(jìn)行H.E.染色，顯微鏡下觀察是否有組織滴蟲蟲體存在。A2.4 核酸檢測取剖檢的實驗雞肝臟或盲腸組織樣品，提取基因組DNA，用針對火雞組織滴蟲18SrRNA基因序列（GenBank: HG008098.1）的特異性引物對（5- GGCGA

29、AAGCATCTATCAAGTGG -3; 5-CTCGTCGGCATAGTTTAAGGTAGG-3）進(jìn)行PCR檢測，擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行凝膠電泳并測序分析。檢測結(jié)果若有火雞組織滴蟲感染，典型病理變化為肝臟腫大，呈深紫褐色，表面有大小不一的黃褐色壞死灶，壞死灶中央稍有下陷，有的壞死灶周圍有出血帶；盲腸外觀明顯腫大，觸之堅硬，呈香腸狀，粗細(xì)不均，腸腔內(nèi)有干酪樣物充塞，可懷疑為陽性，需通過下列任意一種方法驗證：若有火雞組織滴蟲感染，盲腸粘膜刮取物或肝臟抹片在顯微鏡油鏡下可見單個或成簇分布的蟲體，大小為6 m20 m?；蚪M織切片中發(fā)現(xiàn)蟲體，呈不規(guī)則圓形或橢圓形，胞質(zhì)中有囊泡狀核。蟲體呈圓形，淡玫瑰色，有細(xì)胞

30、質(zhì)和細(xì)胞核，判為陽性。反之則為陰性。若有火雞組織滴蟲感染，PCR擴(kuò)增獲得的片段大小為106 bp，所測得的DNA序列應(yīng)為火雞組織滴蟲的18S rRNA基因序列，判為陽性。反之則為陰性。附 錄 B（規(guī)范性）實驗鵝的毛滴蟲檢測儀器設(shè)備和材料生物顯微鏡，生理鹽水，載玻片，蓋玻片。檢測步驟用生理鹽水浸濕的棉簽刮取實驗鵝口腔或嗉囔粘液，置于載玻片上制成壓片，在400倍光學(xué)顯微鏡暗視野觀察。檢測結(jié)果在鏡下看到有呈圓形或梨狀可活動的蟲體，前端有 4 根比蟲體長 23 倍的鞭毛，且有活動性，結(jié)果為陽性；反之為陰性。附 錄 C（規(guī)范性）實驗鴿的瘧原蟲檢測儀器設(shè)備和材料生物顯微鏡，載玻片，蓋玻片，甲醇，姬氏染液。檢測步驟厚、薄血膜的涂制取4 L5 L鴿血，使血滴與平置的載玻片接觸，再由里向外一個方向旋轉(zhuǎn)，轉(zhuǎn)24圈，涂成直徑0.8 cm1 cm大小圓形厚血膜。在同一玻片的另一區(qū)域，取約1 L1.5 L的血量，使血滴與平置的載玻片接觸，并形成2535夾角，待血液向兩側(cè)擴(kuò)展