「實驗筆記」流式細(xì)胞術(shù)實驗過程中的操作要點

1、務(wù)卩怎涇T祠耳匕任至事蟲CgjHJir旳*灌色實驗筆記流式細(xì)胞術(shù)實驗過程中的操作要點流式細(xì)胞術(shù)可以同時分析單個細(xì)胞的多個參數(shù)。目前廣泛應(yīng)用于細(xì)胞表面和細(xì)胞內(nèi)分子表達特征的分析，界定不同種類的細(xì)胞群，測定分離出的亞類純度，分析細(xì)胞的大小和總量等方面，在流式流式細(xì)胞術(shù)實驗過程中，以下操作要點一定要注意，避免影響實驗結(jié)果。1、上機前處理外13血、骨髓血*1怖豊峠價察取齡幣h詁J鬥亍諷春諺行焉佩&fj-iv.s?叮相*希:斯詫出口爲(wèi)逍肓閶世皿期匹冊噴萍仿萄的宙注階埠宦丄堀腳浦比小心熒光淬滅操作時必須嚴(yán)格按照孵育時間，如果抗體孵育時間過長，熒光是會逐漸淬滅的。那如果不得不推遲實驗怎么辦?可以把試管放在冰

2、里面，這樣會稍稍延長淬滅的時間。注意染色順序在進行多熒光染色的時候相同的細(xì)胞會因為染色順序不同而導(dǎo)致熒光強度的差異。解決辦法為：預(yù)實驗。做一系列的不同染色順序的樣本，通過對染色前和染色后的各種樣本進行比較分析，判斷染色順序?qū)?xì)胞造成的影響。選好染色方案染色方案不合理也可能會導(dǎo)致熒光染色信號太弱。解決的方案：預(yù)實驗。在正式開始實驗之前，通過預(yù)實驗，設(shè)計出一個完美的染色方案。（考慮試劑種類，試劑質(zhì)量，試劑用量，孵育時間，洗滌次數(shù)，染料濃度，染色時間及染色溫度等其他因素。）做好陰性對照及同型對照試驗細(xì)胞陰性對照可以顯示細(xì)胞基準(zhǔn)的熒光水平。同型對照則是為了查看抗體非特異性結(jié)合的水平。選擇同型對照需要注

3、意采用相同物種、相同亞類、相同染料、相同濃度，否則，檢測的時候會出現(xiàn)亂七八糟的同型對照結(jié)果。ferivrddttct呀甲.th?nftntgreSt殳即2:Gateanthot：cellsAnd：w?theinstrurn?ns-the即和如！吟叭早CPPTral(unstsinffdcdteji5：tiDetelm強恥Ct昭匍代c?fwllssnediwttiHieisotopecfintidI(nor-sfeGdicbJnding選擇合適的抗體通用原則是：為表達最弱的抗原選擇染色指數(shù)最高的熒光素。根據(jù)使用的流式細(xì)胞儀性能、激光器、濾光片種類來選擇。對于多色實驗，需選擇發(fā)射光譜重疊小的染料。

4、2、參數(shù)設(shè)定數(shù)據(jù)的獲取必須是在儀器性能的校準(zhǔn)均合格的基礎(chǔ)上進行。儀器散射光和熒光信號的光電倍增管電壓、增益、顏色補償?shù)葏?shù)的設(shè)定會直接影響結(jié)果。電壓電壓的調(diào)節(jié)需根據(jù)陰性對照管來調(diào)節(jié)。閾值可以以任意參數(shù)及多個參數(shù)的組合作為閾值;大多數(shù)樣本都可以設(shè)定FSC/SSC;閾值以下的信號不存儲;可以根據(jù)陰性對照管來調(diào)節(jié)。目的是將不需要的雜質(zhì)信號，噪音信號，無用的細(xì)胞信號等扣除，吏收集到的都是有用信號。S-IllilrrtpliocyiesSO1Q0150FBC-A補償流式細(xì)胞分析中經(jīng)常要用到2種以上的熒光標(biāo)記抗體進行染色而目前所使用的多種熒光染料發(fā)射譜間有一定重疊。熒光補償則可以從探測器種除去匹配熒光以外的任何熒光信號。補償方式：任意兩個通道之間都可以調(diào)節(jié)。補償?shù)恼{(diào)節(jié)：根據(jù)單染對照管來調(diào)節(jié)。TABINKaui-AilEvents501001502002S0SS-L35O5SFSC-A口I噸NeulrophibFITCCompensationG5A0CLW2Tolowercluster?increaseih%sulMractmlrncWmmb24.8ofUteFiresuUcactMlfromPE6.0%o