不同物種的DNA提取方法

1、不同物種的DNA提取方法摘要DNA作為遺傳微粒，為生物體的遺傳信息復(fù)制和傳遞做出了巨大的 貢獻(xiàn)，而1953年J.Watson和F.Crick提出的雙螺旋結(jié)構(gòu)模型不僅解釋了有關(guān)DNA 的性質(zhì)，而且也清楚地解釋了 DNA的各種生物功能，進(jìn)而使DNA的研究進(jìn)入 到了分子水平。然而DNA是如何具體在生物體內(nèi)發(fā)揮其作用的，到現(xiàn)在還是一 個(gè)熱門課題，為了研究其作用，就需要從各種物種中提取DNA，由于不同物種 結(jié)構(gòu)的復(fù)雜性不同，導(dǎo)致提取DNA的方法也是各不相同，為此，我整理了一些 物種的DNA提取方法。關(guān)鍵詞：物種、DNA提取1、月季DNA的提取方法：之所以提取高質(zhì)量的月季DNA有難度，是 因?yàn)槠潴w內(nèi)富含多

2、糖及多酚類的物質(zhì)，在一般的DNA提取方法中，很難被 分離，這就嚴(yán)重干擾了提取月季DNA的純度以及完整性。為了解決這個(gè)問 題，北京市園林科學(xué)研究所采取五種提取方法，在其最后的實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明： Draper法提取月季DNA的純度最高，完整性最好。2、大麥小孢子DNA的提取方法：要想分離提取小孢子的DNA，就需 要降解小孢子壁，而小孢子壁由外壁和內(nèi)壁組成，內(nèi)壁主要由纖維素和果膠 組成，這類物質(zhì)能夠被相應(yīng)的酶所水解，而外壁的主要成分是類胡蘿卜素和 類胡蘿卜酯的氧化多聚化的衍生物，化學(xué)物質(zhì)非常穩(wěn)定，到目前為止，還沒 有相應(yīng)的酶可以水解。因此外壁便成為提取高質(zhì)量的大麥小孢子DNA的一 個(gè)“攔路虎”。對(duì)此，萊

3、陽農(nóng)學(xué)院展開了研究，他們通過“收集大麥的花藥、“分離小孢子”、“分離小孢子”。最后“DNA的提取”等一系列的步驟，在 最后的統(tǒng)計(jì)結(jié)果中，發(fā)現(xiàn)CTAB法和微量快速提取法取得不錯(cuò)的效果，而且 DNA的得率和質(zhì)量幾乎一樣。這也證明了上述兩種方法是有效而可行的，當(dāng) 然在這個(gè)研究過程，首次采用超聲波法進(jìn)行破壁，收到出乎意料的效果，也 為CTAB法和微量快速提取法提供了必要的條件。所謂的CTAB，其中文名 是十六烷基三甲基漠化銨，是一種陽離子去污劑，具有從低離子強(qiáng)度溶液中沉 淀核酸與酸性多聚糖的特性。在高離子強(qiáng)度的溶液中(0.7mol/L NaCl),CTAB 與蛋白質(zhì)和多聚糖形成復(fù)合物，只是不能沉淀核酸

4、.通過有機(jī)溶劑抽提，去除 蛋白、多糖、酚類等雜質(zhì)后加入乙醇沉淀即可使核酸分離出來。3、海綿動(dòng)物DNA的提取方法：海綿動(dòng)物作為最古老的原生動(dòng)物，科學(xué) 家對(duì)它的研究還不夠透徹，而對(duì)于分子水平上的研究更是少之又少。因此提 取高質(zhì)量的海綿動(dòng)物DNA是更進(jìn)一步研究的重要環(huán)節(jié)。然而，由于海綿動(dòng) 物含有許多共生細(xì)菌、藻類、蝦類等，這使得在提取其DNA的時(shí)候很容易 混入其他生物的DNA，給研究帶來很大的影響。廈門大學(xué)為了解決這個(gè)困擾， 采用了 SDS酚-氯仿法、SDS高鹽法、CTAB法3種方法作為比較，并對(duì)最后 的結(jié)果進(jìn)行了分析，得出了 CTAB法是提取高質(zhì)量海綿動(dòng)物DNA的有效方 法，并且提出了用乙醇固定海

5、產(chǎn)動(dòng)物能夠幫助其DNA的提取更加快速和有 效。4、北方土壤真菌DNA的提取方法：真菌作為分解者，在生態(tài)系統(tǒng)中扮 演著無可替代的角色，同時(shí)是維持生態(tài)系統(tǒng)平衡的重要一員，要探究土壤真 菌是如何影響生態(tài)系統(tǒng)以及相互之間的關(guān)系，最直接的方法就是提取其全部 DNA，利用相關(guān)技術(shù)進(jìn)行分析。但是，由于真菌的細(xì)胞壁是由大量的幾丁質(zhì) 和多糖物質(zhì)組成的，嚴(yán)重干擾DNA高質(zhì)量的提取，為了順利解決這個(gè)問題， 中國科學(xué)院沈陽應(yīng)用生態(tài)研究所的吳敏娜博士等人通過傳統(tǒng)的土壤真菌 DNA的提取方法進(jìn)行了改進(jìn)，并在具體的實(shí)驗(yàn)中得到了良好的效果。其改進(jìn) 方法的大致操作為-65C65C凍融3次，纖維素酶、蝸牛酶和溶菌酶（6、3和 1

6、mg - ml-1）作用 180min，2%SDS 于 65C裂解 30min。5、梨DNA的提取方法：由于梨本身含有大量的多糖和酚類，在提取過 程中會(huì)干擾DNA的絮狀沉淀，導(dǎo)致DNA的純度受到影響。烏云塔娜等人圍 繞如何提高梨DNA高純度提取的問題展開研究，通過7個(gè)品種的梨為實(shí)驗(yàn) 材料，采用了 SDS法、CTAB法、SDS-CTAB法、改良的CTAB法、高鹽 低pH值法、分步離心法6種方法進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，記錄下各種方法提取到的DNA 純度和質(zhì)量進(jìn)行比較，表明分步離心法是提取梨DNA的最佳方法。6、亞麻DNA的提取方法：亞麻作為一種純天然的纖維，具有吸汗、透 氣性良好和對(duì)人體無害等顯著特點(diǎn)，在服裝、

7、紡織行業(yè)越來越受到重視，有 良好的發(fā)展前景，許多農(nóng)民也開始大量種植，然而由于亞麻的種植要求比較 高，抗病性差，經(jīng)常導(dǎo)致歉收。近年來，科學(xué)院研究發(fā)展的“花粉管通道技 術(shù)育種”理論，可以將一些外源基因?qū)胄←?、大豆一些作物中，以增?qiáng)它 們的抗病性、提早成熟等。對(duì)此科學(xué)家也為了解決亞麻的問題對(duì)如何導(dǎo)入外 源基因展開研究。但亞麻種子含有大量的果膠，果膠和DNA 一樣，也是在 堿性條件下能夠溶于一般的有機(jī)溶劑如乙醇，采用一般的去除方法是行不通 的。王玉富等人就此展開實(shí)驗(yàn)，探討哪種方法最適合提取高質(zhì)量的亞麻DNA， 他們采用了氯仿一異戊醉一核糖核酸酶法、CTAB法、高鹽低pH法3種方法 來進(jìn)行試驗(yàn)，經(jīng)過嚴(yán)

8、謹(jǐn)?shù)膶?shí)驗(yàn)過程，并在最后的統(tǒng)計(jì)結(jié)果中表明高鹽低pH 法是最適合提取該物種的DNA方法，該方法加大了提取液的比例，使提取過 程中液體的粘度下降，利于DNA與雜質(zhì)的分離;用低pH的醋酸鉀沉淀蛋白質(zhì), 比用氯仿一異戊醇分層反復(fù)抽提去除蛋白質(zhì)方便、省時(shí)，提取液中加入了 PVP, 有利于色素等雜質(zhì)的去除?？偨Y(jié)與討論通過上述的幾種物種DNA的提取方法表明，不同物種由于其本身細(xì)胞 結(jié)構(gòu)、成分不同以及可能會(huì)受到其他生物的影響，導(dǎo)致采用的方法也是各不 相同，因此對(duì)于一種物種來說，如何高質(zhì)量的提取其DNA，不僅需要分析該 物種的細(xì)胞成分，如何去除除DNA外的其他雜質(zhì)，而且還需要采用多種不 同的方法去嘗試，最后統(tǒng)計(jì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果來證實(shí)哪種方法是行之有效的。參考文獻(xiàn)【1】王玉富等.亞麻總DNA快速提取方法的研究口】.中國麻作，1997,19(1):19 21【2】吳敏娜等.提取北方土壤真菌DNA的一種方法【J】.生態(tài)學(xué)，2007-04-30【3】王建紅等.月季葉片DNA提取方法的研究口】.北京園林，2003-09-