T-VEC資料翻譯20180515

1、Scientific discussio科學(xué)論述介紹黑色素瘤是常見的惡性月中瘤，在男性和女性中 發(fā)病率分別排名第六和第七位：在歐洲2012年一 年中，男性發(fā)病率為39.6%,女性為42.5%,男性死亡率約為8.8%,女性死亡率為6.9%,平均年齡為 59歲。黑色素瘤有以下幾種類型：淺表播散性黑色素瘤、惡性雀斑痣樣黑色素瘤、肢端黑色素瘤和結(jié) 節(jié)性黑色素瘤等。臨床上根據(jù)黑色素瘤表征進(jìn)行分類，通常以 ABCD規(guī)則界定，其中人=不對(duì)稱， B=邊界，C=顏色，口=直徑以及大小、顏色和深度的病變進(jìn)展。黑色素瘤病變的典型特征包括：非 對(duì)稱，邊緣不規(guī)則，顏色改變，大于等于5mm直徑呈結(jié)節(jié)生長(zhǎng)。黑色素瘤的病理分

2、期是基于 AJCC分期系統(tǒng)，包括前哨淋巴結(jié)分期。AJCC分期提供有關(guān)病變厚度（布雷斯洛）、有絲分裂率和潰瘍的信 息、所涉及的淋巴結(jié)數(shù)目以及病變退變或進(jìn)展到局部部位（皮下浸潤(rùn)、淋巴結(jié)）或遠(yuǎn)處病變是否存在血清LDH升高的現(xiàn)象。黑色素瘤患者的臨床分期主要依據(jù)體檢、影像學(xué)檢查和活檢（檢查原發(fā)腫 瘤的位置和大小、淋巴結(jié)浸潤(rùn)程度以及轉(zhuǎn)移月中瘤的所在位置來(lái)判定。根據(jù)月中瘤的病理特點(diǎn)，臨床可 分為0期、I期（A、B）、II期（A、B、C）、III期（A、B、C）和IV期（表2）。I和II期主要局限于原發(fā) 月中瘤的部位，第三階段涉及區(qū)域淋巴結(jié)擴(kuò)散，第四階段涉及遠(yuǎn)端擴(kuò)散，其中M1A定義遠(yuǎn)離皮膚向皮下或淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移

3、，M1B轉(zhuǎn)移到肺，M1c轉(zhuǎn)移到任何的其他內(nèi)臟部位或遠(yuǎn)端部位并伴有血清LDH升高現(xiàn)象（表1）。90%的黑色素瘤被診斷為沒(méi)有任何轉(zhuǎn)移的原發(fā)月中瘤，并且此類月中瘤患者75-85%的能特異性10年生存。10年生存期中30-70%的伴有區(qū)域淋巴結(jié)微轉(zhuǎn)移，30-50%伴有衛(wèi)星（定義為距原 發(fā)月中瘤最大2cm）和在途（位于原發(fā)月中瘤2cm以及距離第一個(gè)引流淋巴結(jié)2cm）轉(zhuǎn)移，20-40%有臨床明 顯的區(qū)域淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。在未治療的患者中，伴有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移瘤的平均生存期僅為6-9個(gè)月，盡管存在相當(dāng)大的差異。每當(dāng)可疑皮膚病灶被去除，都要進(jìn)行組織學(xué)活檢來(lái)確定病理特征以及月中瘤生長(zhǎng)階段和侵襲的程 度。在某些情況下，手術(shù)切除

4、適用于限制性和局部病灶，并結(jié)合放療和IFN-丫治療。對(duì)于全身性轉(zhuǎn)移性疾?。↖V期），手術(shù)、放療和全身治療都適用。目前批準(zhǔn)的全身治療方案包括：? ipilimumab （Yervoy）,這種藥物能阻礙CTLA-4的免疫蛋白，被批準(zhǔn)用于未經(jīng)治療的不可切除 或轉(zhuǎn)移性黑色素瘤成人患者，臨床統(tǒng)計(jì)已顯示，此藥與gp10阱目比，顯著提高了生存率（overallsurvival , OS） （10.1 月:6.4月;HR: 0.66; p= 0.003）。? nivolumab （Opdivo）, 一種抗PD1單克隆抗體，用于治療成人晚期（不可切除或轉(zhuǎn)移性）黑色素瘤; 在治療黑色素瘤中，平均 OS14: 10

5、.84（HR=0.46;（95% CI: 0.31, 0.69; p=0.000085小embrolizumab,本品為抗PD1人源化單克隆抗體，用于治療成人晚期（不可切除或轉(zhuǎn)移性）黑色素瘤。與 ipilimumab ,平均無(wú)進(jìn)展生存期（progression-free survival, PFS）為 5.5: 2.8 個(gè)月，（HR=0.58;95%CI: 0.46, 0.72; p0.00001)和 4.1: 2.8個(gè)月(HR=0.58; 95%CI: 0.47, 0.72; p7 irnim:TlLOI-2.0dL AJlIkUtf! LlkcFJlkll.l b wth bJucnitM

6、jETJ1.01 -4.1.a. nklwnS Likertkiti. h rathmlzemtkH：11討力el widlou： ukerdanhH wit.Ii ml；e-Eit we，匚】 皿 二rHnnNo. tlf EFtUdJtU： HldniXcidj.1 mcrutadc nas;KUDNJA國(guó)山1 sdea： 一口*口1：439* h? tiuTrirrrkii乩m(xù)l skn, sdxxitanrCDiUi 心口 rmdnJ khIzljIwis忤 omulMlhI wel|；MmfllMl工A11 ntiwr-nrtidljsp-i;hrfirmalA nr d棺忸a rn

7、rr j ricKFlmlPtlBUpriciicJ. wish pcniiiiiw. Msrun &*正01幅104總協(xié) Al mLzn卻hJ,ran4.D： du1iLi?cd-atl tr JKnBind nixJc biopr nd ciuriFLdlijin Lrp-lwi Jciwcic eif I i： ajrioi cut I.lM KForrcUrfetci qx Itrinoi m JrtetUbls rwiiJ rptf-urtoBM cnqiiratdK Shcnpeutic E ph*jtniEiYn odjl iiKtaip* 弋金/設(shè) q%AJCT,AwrlcaH

8、 |ntn。Gini1aMFP.ii Umkct：苴.iwH 11HI I i-h. 11 iar9Hu4.T分期厚度（mm）潰瘍/有絲分裂T1a尢潰瘍啟絲分裂率 1/mm2T21.012.0無(wú)潰瘍八 一,一b.有潰瘍T32.014.0a無(wú)潰瘍T44b.有潰瘍a無(wú)潰瘍 b.有潰瘍N分期轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)數(shù)目N00N/AN11a病理診斷sb臨床診斷t2-3 N2a病理診斷s）4個(gè)或者移行轉(zhuǎn)移灶、衛(wèi)星灶、轉(zhuǎn)移結(jié)節(jié)等b1i名床診斷tN3c移行轉(zhuǎn)移灶/無(wú)轉(zhuǎn)移結(jié)節(jié)的衛(wèi)星灶M分期部位1lLDH情況M0無(wú)轉(zhuǎn)移N/AM1a遠(yuǎn)處皮膚、皮下或結(jié)節(jié)狀轉(zhuǎn)移正常M1b肺轉(zhuǎn)移正常其他內(nèi)臟轉(zhuǎn)移正常M1c任何遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移升高(linkd

9、l Edging3Patholo9k Stdgingt1THHOMO0nsNOMOSUgelAIlaNOMO1ATiaNOMOSUgelBI1bNOMOIBTibNOMOT2aNOMO口NOMOSt鄧 IIAT2bNOMQIIAfT2bNOMOBaNOMQT3aNO闌SugellBT3bNOMQIIBT彌NOMOI4a闌MQ珈NOMOStage IK14bMQIKT4bNOMOSu9elllAnyT.上陽(yáng)MOIIIAT14aNldMOT14dNaMOIIIBT14bNh闌T14bMOT14aN1bMOT14aN2bMOT14a肋fMIKI TMbNibMDTl-4b儂MO117bN2c闌Any

10、TN3闌Stage VAny!AnyNMlIVA/TAnyNMlTable 2；Staging of melanoma of the skin ( AJCC 7th edition)ANATOMK 5TAE/*ROHO$rK GROUPS刈達(dá)卡巴嗪(DTIC)化療，此藥在歐盟國(guó)家作為轉(zhuǎn)移性黑色素瘤患者的標(biāo)準(zhǔn)治療已有很多年。結(jié) 果顯示，為期3至6個(gè)月的化療，有效率為11%至25%,平均生存期為4.5至6個(gè)月。對(duì)于篩選和檢測(cè)出BRAF V 600突變陽(yáng)性的黑色素瘤月中瘤，系統(tǒng)治療方案包括：TVemurafenib, BRAF抑制劑，批準(zhǔn)用于成人 BRAF V 600突變陽(yáng)性或轉(zhuǎn)移性黑色素瘤患者，與

11、 DTIC 比較，無(wú)進(jìn)展生存期分別為 6.9: 1.6個(gè)月(HR 0.38, 95%CI: 0.32-0.46, p0.0001),平均 OS 13.6: 9.7個(gè)月(HR: 0.70, 95%CI: 0.570.87, p0.0001)。Tlabrafenib (達(dá)布拉夫尼布)，BRAF激酶抑制齊1J,批準(zhǔn)用于成人BRAF V 600突變陽(yáng)性或轉(zhuǎn)移 性黑色素瘤患者；與達(dá)卡巴嗪相比，它的平均 PFSJ 6.9: 2.7個(gè)月(HR 0.38, 95%CI: 0.32-0.46, p0.0001), 12個(gè)月的 OS分別為 70%: 63% (HR: 0.70, 95%CI: 0.57-0.87,

12、 p0.0001)?trametinib (曲美替尼)，MEK抑制劑，經(jīng)批準(zhǔn)為治療單藥并可與達(dá)布拉夫尼布聯(lián)合使用，治 療成人不可切除或者BRAF V 600突變陽(yáng)性黑色素瘤患者，聯(lián)合使用與單獨(dú)使用曲美替尼相比，PFS為4.8: 1.5個(gè)月；與達(dá)卡巴嗪相比平均 OS為15.6 : 11.3個(gè)月。Talimogene LaherparepvecH一種源于HSV-1的月中瘤免疫療法，T-vec行了修飾，使其在月中瘤內(nèi) 復(fù)制，并產(chǎn)生免疫刺激蛋白人GM-CSFo引起月中瘤細(xì)胞死亡和月中瘤源抗原的釋放。據(jù)研究，T-vec與GM-CSF一起促進(jìn)全身抗月中瘤免疫反應(yīng)和效應(yīng)T細(xì)胞反應(yīng)。治療后原發(fā)月中瘤完全消退的

13、小鼠對(duì)隨后的 月中瘤再攻擊具有抵抗力。從野生型HSV-1到T-vec的修飾包括ICP34.用PICP 47的刪除。這是由于隨著T-vecB染，抗病毒 免疫反應(yīng)將開始攻擊正常細(xì)胞，且研究證實(shí)月中瘤細(xì)胞易被ICP34.5缺陷的HSV-1病毒(包括T-vec)損傷并導(dǎo)致死亡。ICP 47的缺失可以阻止抗原提呈分子的下調(diào)，并增加 HSV US 11基因的表達(dá)，從而促 進(jìn)病毒在月中瘤細(xì)胞中的復(fù)制(SmPC 5.1節(jié))。此外，還插入了人粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子 （GM-CSF）的編碼序列，取代了 ICP34.5。GM-CSF是一種細(xì)胞因子，通過(guò)其對(duì)抗原提呈細(xì)胞的作用,參與刺激免疫應(yīng)答。GM-CSF能激活

14、樹突狀細(xì)胞，增加抗原提呈，增強(qiáng)細(xì)胞介導(dǎo)的和體液免疫應(yīng)答。適應(yīng)免疫系統(tǒng)激活，月中瘤細(xì)胞溶解有助于局 部和全身免疫-調(diào)動(dòng)系統(tǒng)對(duì)遠(yuǎn)端月中瘤的破壞，并可能通過(guò)免疫監(jiān)視形成免疫記憶從而對(duì)月中瘤進(jìn)行長(zhǎng)期 監(jiān)視（圖1）0此外，在設(shè)計(jì)（T-vec）臨床試驗(yàn)時(shí)，一項(xiàng)單臂第二階段研究的結(jié)果表明，T-vec術(shù)后接受GM-CSF治療的患者OS和DFS明顯延長(zhǎng)（與配對(duì)的以往對(duì)照組相比），而且這種治療對(duì)GM-CSF具有良 好的依從性。Figure 1： Proposed Mechanisrrii of Action for Talimogens LaherparepvecSelective virdl replicati

15、onTmmor cdl& r uplure for jnSystemk tumor-tptdFieMath of distant tumoriln tumor tissueoncolytic effectIm munc responsecells.Local effect: SystEmic effect:Tumor Cell LysisTumorpedfic Immune Response申請(qǐng)人申請(qǐng)下列適應(yīng)癥：“-vec適用于治療具有區(qū)域或遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移性黑色素瘤的成人（見5.1節(jié)）”。最后擬議的指示如下：治療不能切除的區(qū)域或遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移（黑色素瘤的IIIB, IIIC和IVM1a期）的成人患者，沒(méi)有

16、骨，腦， 肺或其他內(nèi)臟疾?。ㄒ?.4和5.1節(jié)）。T-vec的治療用藥應(yīng)由一位對(duì)月中瘤治療經(jīng)驗(yàn)豐富的合格醫(yī)生來(lái)發(fā)起和監(jiān)督。藥劑學(xué)（SmPC section 4.2）Imlygic裝在一次使用的小瓶中，每瓶1毫升裝量，有兩種不同濃度：6? 10 （1 million） PFU/mL -只適用于初次劑量.8? 10 （100 million） PFU/mL -所有后續(xù)劑量.每次治療的總注射量最多可達(dá)4mL。當(dāng)濃度為106（100萬(wàn)）PFU/mL時(shí)，初始推薦劑量最高可達(dá) 4mL。隨后的劑量應(yīng)以108（1億）PFU/mL的濃度最多注射4mL的Imlygic。建議的Imlygic給藥時(shí)間表見 表 1,見

17、 SmPd4.2節(jié)。Quality aspect敲量方面Introduction 介紹T-vec是一種來(lái)源于野生型HSV-1基因組的月中瘤免疫治療藥物，它是一種修飾后減毒的、非整合的HSV-1,能在月中瘤內(nèi)有效復(fù)制，并產(chǎn)生免疫刺激蛋白GM-CSF0T-vec病灶內(nèi)注射的治療策略是通過(guò)其在癌細(xì)月fi中復(fù)制而產(chǎn)生直接的溶瘤作用（oncolytic effect）,結(jié)果是月中瘤細(xì)胞裂解并局部釋放潛在的月中瘤抗原。并通過(guò)局部表達(dá)人GM-CSF來(lái)促進(jìn)抗原遞呈，從 而促進(jìn)全身抗月中瘤免疫反應(yīng)。T-vec藥品作為一種無(wú)菌無(wú)防腐劑的溶液注射液，規(guī)格濃度為106PFU/mL或者108PFU/mL ,藥品每瓶可使

18、用裝液量為1.0 mL,在-80C 10 C下儲(chǔ)存、運(yùn)輸、供應(yīng)。106 PFU/mL作為給患者一次的初始劑量，目的是使隨后給藥前能夠血清轉(zhuǎn)換（血清轉(zhuǎn)化現(xiàn) 象：血清試驗(yàn)從陰性轉(zhuǎn)為陽(yáng)性的變化，表示對(duì)感染反應(yīng)中或?qū)γ庖咦饔梅磻?yīng)中形成抗體）。108pfu/mL劑量用于隨后的剩余治療。該產(chǎn)品通過(guò)皮下、皮下和結(jié)節(jié)內(nèi)的瘤內(nèi)注射。在任何一種情況下， 建議使用最多4mL的劑量。Active Substanc的效成分General information 總說(shuō)明總說(shuō)明詳盡地介紹了命名、結(jié)構(gòu)和一般性質(zhì)。T-vec是在野生型HSV-1基因組兩部分區(qū)域改造而成的（新分離株JS1）.修飾HSV-1自然天性而 產(chǎn)生表性變化

19、，并呈現(xiàn)T-vec的治療效果如下：硼除ICP34.5功能基因，從而抑制病毒在正常組織中的復(fù)制。?刪除ICP 47基因，使US 11基因得以上調(diào)，導(dǎo)致ICP34.5缺失的HSV的能繼續(xù)復(fù)制，而不降低它 對(duì)月中瘤細(xì)胞選擇性。硼除ICP47確保MHC I類抗原的展示，使CD8+T細(xì)胞能夠進(jìn)行免疫監(jiān)視（自己查閱： 早期T細(xì) 胞必須與表達(dá)MHC-I或II類抗原的胸腺上皮細(xì)胞接觸才能分別分化成 CD8+或CD4+T細(xì)胞）?在ICP34.5入人GM-CSF基因，產(chǎn)生并釋放具有生物學(xué)活性的hGM-CSF,刺激全身細(xì)胞毒性 免疫反應(yīng)，旁殺末端的月中瘤細(xì)胞。每個(gè)hGM-CSF表達(dá)框由巨細(xì)胞病毒的主要早期啟動(dòng)子 （

20、CMV）、編碼HGM-CSF的cDNA和牛生長(zhǎng) 激素多腺喋吟化信號(hào)（PA）組成。下面給出了 T-vec基因組的示意圖：Figure 2： Schematic representation of talimogene laherparepvec genome仆 人Rl RsU 號(hào)RsThe lalimoene laherparep-zec genome is shown with the positions of the ICP34.5 and 1CP47 deletions marked as A34.5 and M?, respectively. The genome is composed

21、 of a unique long region (Ui) flanked by long repeats (R。and a unique short region (U$) flanked by short repeats (Rs), The site of the hGM-CSF cassette insertion is shown in pink and expanced to show the composition of the hGM-CSF expression cassette： the CMV promoter, hGM-CSF gDNA and a pAsignal.Ma

22、nufacture, characterisation and process control造、特征和過(guò)程控制Manufacturer生產(chǎn)單位參與生產(chǎn)、檢驗(yàn)、儲(chǔ)存的地址以及他們的職責(zé)詳細(xì)記錄在檔案里，并且經(jīng) GMP驗(yàn)證Description of manufacturing process and process controfe. 丁芳4口丁 芳梓制1的中曲術(shù)生產(chǎn)工藝充分描述了 T-vec的制造過(guò)程，包括制造步驟、操作參數(shù)和過(guò)程控制方面的信息。提交 了關(guān)于批公式和批次大小以及流程圖的充分信息（圖3）。此處沒(méi)有圖。生產(chǎn)工藝可以概括為細(xì)胞擴(kuò)增、病毒轉(zhuǎn)染以及生產(chǎn)（轉(zhuǎn)瓶）、收獲、回收以及純化步驟。

23、純化 階段包括：核酸內(nèi)切酶消化、過(guò)濾澄清、超濾 /過(guò)濾（UF/DF）,（查閱：UF超濾是以壓力為推動(dòng)力的 膜分離技術(shù)之一。以大分子與小分子分離為目的，膜孔徑在201000A。之間。DF:深層過(guò)濾膜的孔徑比微孔濾膜大，通常用作預(yù)過(guò)濾。），兩種色譜柱層析（IEX , ion exchanged子交換，SEC, Size exclusion chromatograph分子排阻層析）和最終的無(wú)菌過(guò)濾。在藥品生產(chǎn)過(guò)程中，在這一步之后 沒(méi)有額外的過(guò)濾。所述無(wú)菌過(guò)濾步驟為所述藥物產(chǎn)品提供終端無(wú)菌過(guò)濾。T-vec生產(chǎn)工藝的規(guī)模由單次的預(yù)期體積來(lái)確定，收貨液是從生產(chǎn)滾瓶生產(chǎn)結(jié)束時(shí)精液中收集來(lái) 的，一般為40 L

24、。單批的收獲液經(jīng)純化以生產(chǎn)單一批次產(chǎn)品。Control of material雙 料控制申請(qǐng)方提供了有關(guān)T-vec生產(chǎn)工藝中的原材料的詳細(xì)資料。標(biāo)準(zhǔn)的克隆技術(shù)用于構(gòu)建質(zhì)粒：1）刪除兩個(gè)拷貝的ICP34.5基因功能,并將hGM-CSF基因插入 ICP34.5位點(diǎn)；2）刪除ICP 47基因。經(jīng)限制性內(nèi)切酶分析或DNA測(cè)序證實(shí)質(zhì)粒結(jié)構(gòu)正確。檔案中對(duì)克 隆步驟作了充分的詳細(xì)的細(xì)節(jié)說(shuō)明。S1 /34.5-/47-/hGM-CSF T-vec重組病毒初步構(gòu)建于BHK細(xì)胞中。經(jīng)過(guò)了一系列轉(zhuǎn)染和同源重組后, 該細(xì)胞系隨后被改變?yōu)閂ero細(xì)胞。材料詳細(xì)描述了最后一代T-vec的產(chǎn)生過(guò)程。止匕外，資料中病毒的 特

25、征也有充分的闡述。對(duì)于（T-vec）的商業(yè)化生產(chǎn)，申請(qǐng)人使用了三個(gè)工作細(xì)胞庫(kù)，它們分別來(lái)自兩個(gè)不同的主細(xì)胞庫(kù)（MCB Lot 2003-0049（最初在 BioReliance生產(chǎn)）；MCB Not 5000-00001,它們都來(lái)自于同一親代 WHO 的Vero細(xì)胞庫(kù)。新的和舊的MCB和WCVS者件艮據(jù)ICH Q5D和ICH Q5A（R1）指導(dǎo)準(zhǔn)則以及Eur.博士專 著和一般案文，進(jìn)行了足夠的表征和檢定。比較表征結(jié)果表明，新舊細(xì)胞庫(kù)的性質(zhì)基本相似。在商 業(yè)生產(chǎn)期間，最先的生產(chǎn)細(xì)胞庫(kù)將被使用，直到庫(kù)存耗盡。因此，建立多個(gè)細(xì)胞庫(kù)的做法是可以接 受的，盡管這并不完全符合兩層細(xì)胞庫(kù)系統(tǒng)的一般預(yù)期做法。

26、（個(gè)人理解：一般是兩個(gè)庫(kù)同時(shí)使用）Control of critical steps and intermediates拜步驟禾口中間休的捽,I生產(chǎn)工藝通過(guò)關(guān)鍵主要操作參數(shù)（輸入?yún)?shù)）和關(guān)鍵工藝中實(shí)時(shí)控制（IPC,輸出性能參數(shù)）進(jìn)行控 制。雖然這一分類不符合ICH術(shù)語(yǔ)，但對(duì)于這一特定產(chǎn)品的控制策略來(lái)說(shuō)，它被認(rèn)為是可以接受的 基于工藝?yán)斫夂彤a(chǎn)品質(zhì)量考慮，建立了工藝雜質(zhì)、安全相關(guān)和微生物控制以及工藝一致性測(cè)試。Process validations 藝驗(yàn)證T-vec商業(yè)化制造工藝（工藝C）已在BioVex Inc. , Woburn工廠（AWM）進(jìn)行了驗(yàn)證。當(dāng)在規(guī)定的操 作參數(shù)范圍內(nèi)執(zhí)行時(shí)，該工藝

27、被證明是穩(wěn)健的，執(zhí)行一致的，并符合預(yù)先確定的性能參數(shù)驗(yàn)收標(biāo)準(zhǔn)。Manufacturing process developmefi彷寸程開發(fā)在T-vec的開發(fā)過(guò)程中，主要采用了三種生產(chǎn)工藝。這些生產(chǎn)工藝命名為A、B和C三種工藝。工藝A只生產(chǎn)了三批產(chǎn)品，這些批次用于非臨床毒理學(xué)研究，以及早期I期研究。工藝B產(chǎn)品被應(yīng)用于另外的非臨床毒理學(xué)研究和II期臨床研究。商業(yè)產(chǎn)業(yè)化使用的是 C工藝，與III期臨床的工藝相同。使用不同工藝制造的批次之間的可比性已得到充分證明。證明控制方法可控。Characterisation1對(duì)于T-vec的表征，申請(qǐng)方已經(jīng)考慮了病毒結(jié)構(gòu)（大小、密度、SEC純度）、基因組序列、蛋

28、白質(zhì)和多糖含量以及生物學(xué)特性，并進(jìn)行了充分的相關(guān)研究。Specification范在應(yīng)用檔案中列出了用于保證T-vec質(zhì)量的試驗(yàn)方法和驗(yàn)收標(biāo)準(zhǔn)。申請(qǐng)方已對(duì)檢驗(yàn)方法的合理標(biāo) 準(zhǔn)進(jìn)行評(píng)估?；谶@一評(píng)估，某些特定測(cè)試，如與工藝相關(guān)的雜質(zhì)和安全測(cè)試，已移向上游，并把 不合格界限列入關(guān)鍵的過(guò)程控制。雖然沒(méi)有采用傳統(tǒng)的控制策略，但總體來(lái)說(shuō)，控制策略是可以接 受的。Analytical method野析方法根據(jù)商業(yè)規(guī)范，對(duì)每批藥品的每一種分析方法進(jìn)行了總結(jié)，給出了滿意的方法驗(yàn)證結(jié)果。Batch analysis比量分析從商業(yè)化生產(chǎn)設(shè)備上得來(lái)的36批GMP生產(chǎn)藥品的批次數(shù)據(jù)分析來(lái)支持臨床項(xiàng)目，所有數(shù)據(jù)用于 建

29、立規(guī)范驗(yàn)收標(biāo)準(zhǔn)或用作參考標(biāo)準(zhǔn)，這些數(shù)據(jù)提交并揭示了批次之間的一致性。Reference materials1目關(guān)資料充分闡述了當(dāng)前和未來(lái)參考標(biāo)準(zhǔn)的案例驗(yàn)證，并闡述了相關(guān)的試驗(yàn)。Stability穩(wěn)定性鑒于實(shí)際的連續(xù)化生產(chǎn)工藝，藥品的儲(chǔ)存已確定為工藝的保持時(shí)間（013,在53C）o因此,在檔案中不包括該藥品的穩(wěn)定性數(shù)據(jù)。Comparability exercise for Active Substan毒的可比性研究如上文關(guān)于工藝過(guò)程開發(fā)的章節(jié)所述，在產(chǎn)品開發(fā)過(guò)程中，三種主要的生產(chǎn)工藝已被用于生產(chǎn)T-veCo對(duì)于從工藝A到工藝B的變化，可比性評(píng)估的結(jié)果是在最初的臨床試驗(yàn)申請(qǐng)時(shí)提交的，但未包括在最初

30、的MA申請(qǐng)中。然而，這些可比性數(shù)據(jù)是應(yīng)要求提交的。充分表述了工藝B和工藝C之間的數(shù)據(jù)可比性、工藝C儀器設(shè)備調(diào)整之前和調(diào)整之后的可比性、使用不同制造工藝生產(chǎn)的批次之間 的可比性。New Active Substance StatusQuality Aspects勾建新病毒-質(zhì)量方面Imlygic是一種由野生型單純皰疹病毒1型（HSV-1）基因組（新分離株JS1; ECAAC登錄號(hào)01010209） 衍生的抗月中瘤免疫療法藥品。它是一種減毒的、非整合的HSV-1 ,經(jīng)修飾后可在月中瘤內(nèi)有效復(fù)制，并產(chǎn)生免疫刺激蛋白GM-CSFoImlygic在歐盟可以被認(rèn)為是一種新的活病毒，因?yàn)樗郧霸谠摰貐^(qū)或其任

31、何成員國(guó)中還沒(méi)有被批準(zhǔn)為一種醫(yī)療產(chǎn)品Finished Medicinal Produc缺產(chǎn)品Description of the product and pharmaceutical development產(chǎn)品和藥品開發(fā)說(shuō)明Description and composlion of drug produc出品的描述和成分T-ve孤一種用來(lái)瘤內(nèi)注射的、裝在小瓶?jī)?nèi)呈冷凍液狀態(tài)的、無(wú)菌、一次性使用、無(wú)防腐劑的藥 品。每一小瓶含有1.0mL的可釋藥量，產(chǎn)品解凍后效價(jià)為106pfu/mL或108pfu/mL。T-vec在磷酸鈉緩 沖液中配制的，以氯化鈉為滲透壓調(diào)節(jié)因子，山梨醇和肌醇為穩(wěn)定劑。配方中的所有

32、輔料均符合美 國(guó)藥典（USP）、英國(guó)藥典（BP）、日本藥典（JP）或歐洲藥典（PhEur）中規(guī)定，如32P.40甫料控制）所示Pharmaceutical developmen制藥開發(fā)充分描述了藥品開發(fā)過(guò)程，商業(yè)化提法的理由是合理的。Manufacturing process developmen制藥工藝開發(fā)檔案中關(guān)于使用不同工藝生產(chǎn)的藥品批次之間的可比性，從細(xì)節(jié)層面進(jìn)行了討論。并充分證明 了使用不同制造工藝制造的批次之間的可比性。Manufacture of the product and process controls 制造和過(guò)程控制Manufacturer牛 產(chǎn)單位參與藥品生產(chǎn)、檢測(cè)和

33、儲(chǔ)存的場(chǎng)所及其職責(zé)都列于檔案并提供GMP證書。Description of manufacturing process and process control制I告工藝和過(guò)程控制的苗述藥品成品生產(chǎn)工藝前面已充分描述?？傊?，在瓶裝106 pfu/mL和108 pfu/mL藥品生產(chǎn)過(guò)程中，活病毒是需要提前用稀釋緩沖液無(wú)菌稀釋至目標(biāo)濃度，使產(chǎn)品解凍后的效力達(dá)到106 pfu/mL或108pfu/mL。最終配制的藥液進(jìn)行無(wú)菌灌裝，然后用塞子和蓋子無(wú)菌密封。藥物經(jīng)過(guò)目視檢查和初級(jí)貼簽后，利用受控冷凍程序進(jìn)行冷凍后儲(chǔ)存在 -80 C10Co為冷凍操作系統(tǒng)已建立溫度波動(dòng)范圍，數(shù) 據(jù)證實(shí)這些范圍/界限是適用的

34、。Process validation 工序驗(yàn)證根據(jù)一項(xiàng)經(jīng)過(guò)批準(zhǔn)的協(xié)議和預(yù)定義的驗(yàn)收標(biāo)準(zhǔn)，這兩種規(guī)格產(chǎn)品的生產(chǎn)工藝已經(jīng)在商業(yè)生產(chǎn)現(xiàn) 場(chǎng)進(jìn)行了驗(yàn)證。所有批次也都滿足了發(fā)布規(guī)范的要求。止匕外，對(duì)確認(rèn)批次的裝量體積進(jìn)行裝量檢查， 確認(rèn)一致性。Control of excipients 本甫料捽窗I所有輔料均符合Ph.EurM求，是廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥制劑中的。Product specification 品技術(shù)規(guī)格在應(yīng)用檔案中列出了用于控制和放行 T-vec產(chǎn)品的檢驗(yàn)方法和驗(yàn)收標(biāo)準(zhǔn)。T-vec藥物產(chǎn)品的放行 檢驗(yàn)是充足的。為了測(cè)試效力，使用了三個(gè)單獨(dú)的檢驗(yàn)方法。它們一起評(píng)估病毒的關(guān)鍵生物學(xué)功能： 對(duì)靶細(xì)胞白

35、感染、hGM-CSF的表達(dá)量和hGM-CSF的生物學(xué)活性。藥品的質(zhì)量是通過(guò)評(píng)估感染性顆粒 與病毒蛋白的比值來(lái)控制的。由于已建立了病毒總蛋白與總病毒顆粒之間的相關(guān)關(guān)系，因此，病毒總蛋白可作為評(píng)估病毒總顆粒的替代方法。因此，感染顆粒與總顆粒的比值也通過(guò)對(duì)感染顆粒與病毒蛋白的比值的評(píng)估來(lái)替代。作為一個(gè)放行控制，申請(qǐng)方正按照Ph.EUR 2.9.20M試可見微粒。Analytical methods 分析方法對(duì)用于藥品批量放行分析方法進(jìn)行了充分的描述，并驗(yàn)證了其有效性。Batch analysis量分析提供了臨床項(xiàng)目使用批次的批量分析數(shù)據(jù)和在商業(yè)化生產(chǎn)的批次的批量分析數(shù)據(jù)。59批灌裝藥物（36比活病毒

36、）中，包括43批108 pfu/mL規(guī)格的，16批106 pfu/mL規(guī)格的。批次數(shù)據(jù)顯示了批次間的 一致性。Reference material參考材料除了現(xiàn)有參考標(biāo)準(zhǔn)BP1104HA之外，還有將來(lái)參考標(biāo)準(zhǔn)的測(cè)試和認(rèn)證也是充分的。Container closure systemfa 材包裝容器系統(tǒng)由一個(gè)2mL 13毫米環(huán)狀烯姓聚合物（COP）塑料樹脂小瓶、一個(gè)13毫米氟聚合物膠 塞、一個(gè)交聯(lián)硅頂和一個(gè)可翻轉(zhuǎn)防轉(zhuǎn)灰塵鋁蓋組成。所有產(chǎn)品包材的制造均符合美國(guó)藥典（USP）和歐洲藥典（PhEur）的要求。Stability of the product 品穩(wěn)定性所提供的穩(wěn)定Tt數(shù)據(jù)支持在SmPC中的

37、保質(zhì)期。為評(píng)估藥品的穩(wěn)定性，申請(qǐng)方利用大量的商業(yè)生 產(chǎn)的藥品批次進(jìn)行了實(shí)時(shí)、真實(shí)的穩(wěn)定性研究。該數(shù)據(jù)包括42批108 pfu/mL和16批106pfu/mL。從最早的7批108 pfu/mL和最早的3批106 pfu/mL產(chǎn)品中獲得了 48個(gè)月的穩(wěn)定性數(shù)據(jù)。充分討論了研究中所 用的分析方法的穩(wěn)定性。根據(jù)實(shí)時(shí)、真實(shí)研究的結(jié)果，在-80 C長(zhǎng)期儲(chǔ)存48個(gè)月是可以接受的。除了實(shí)時(shí)的、真實(shí)的穩(wěn)定性研究外，申請(qǐng)人還提供了極限條件下的穩(wěn)定性數(shù)據(jù)，這些數(shù)據(jù)來(lái)自于在加速和極限溫度儲(chǔ)存條件，以及光暴露、解凍溫度和解凍后5的儲(chǔ)存研究。正如預(yù)期的那樣，在評(píng)估的溫度下儲(chǔ)存的樣品白穩(wěn)定性下降，降解速度106 PFU/m

38、L批次快于108 PFU/mL批次。根據(jù)解凍溫度研究和5c長(zhǎng)期貯藏實(shí)驗(yàn)確定了解凍和使用條件：室溫解凍最長(zhǎng)時(shí)間30 min后，108 PFU/mL5C保存不超48小時(shí)、106PFU/mL5 C保存不超12小時(shí)是可以接受的批準(zhǔn)后的穩(wěn)定項(xiàng)目和質(zhì)量保證 是充分的。根據(jù)歐盟GMP準(zhǔn)則，任何已確認(rèn)的不符合規(guī)格的結(jié)果或顯著的負(fù)面結(jié)果，均應(yīng)向調(diào)查員 和EMA報(bào)告。Comparability exercise for finished medicinal drug prodUCK產(chǎn)品的可比性研究活病毒和產(chǎn)品加工、可分析的、非臨床和臨床可比性數(shù)據(jù)已經(jīng)提交。對(duì)藥物產(chǎn)品進(jìn)行了評(píng)估，包括 每種可比性研究和相似性的穩(wěn)定性

39、評(píng)估，商業(yè)和臨床試驗(yàn)配方之間評(píng)估，都顯示了可比性。Adventitious agentS卜源物Non-viral adventitious agents 病毒外源物T-vec的生產(chǎn)過(guò)程包括控制措施，以防止污染和保持微生物控制。安進(jìn)公司對(duì)從工作細(xì)胞庫(kù)和工 作病毒種子庫(kù)（WVSS）到最終產(chǎn)品生產(chǎn)T-vec的所有原料進(jìn)行了檢驗(yàn)，以確定是否有任何原材料是動(dòng) 物來(lái)源的，還是與動(dòng)物來(lái)源的材料有產(chǎn)品接觸。申請(qǐng)人根據(jù) 關(guān)于盡量減少通過(guò)人和獸醫(yī)藥物產(chǎn)品傳 播動(dòng)物海綿狀腦病藥物風(fēng)險(xiǎn)的指導(dǎo)說(shuō)明（EMA/410/01中的原則，對(duì)傳染性海綿狀腦?。═SE）風(fēng)險(xiǎn)進(jìn) 行了評(píng)估。根據(jù)評(píng)估結(jié)果，與T-ve討目關(guān)的TSE風(fēng)險(xiǎn)被確

40、定為可以忽略不計(jì)。Viral adventitious agents病毒類外源物鑒于病毒的固有特性，通常用于生物純化過(guò)程中的病毒清除步驟會(huì)使所需的產(chǎn)品失活或去除掉。 因此，在T-vec制造過(guò)程中，病毒安全性的方法是基于多層風(fēng)險(xiǎn)緩解，包括嚴(yán)格控制原料和起始材料， 使用具有經(jīng)證實(shí)安全狀況的細(xì)胞 （Vero）,適當(dāng)?shù)腸GMP程序和設(shè)施設(shè)計(jì)特征，對(duì)細(xì)胞庫(kù)、病毒種子庫(kù)、 生產(chǎn)產(chǎn)品細(xì)胞、生產(chǎn)代次限制下的病毒進(jìn)行廣泛的病毒檢測(cè)，并在生產(chǎn)工藝關(guān)鍵點(diǎn)進(jìn)行病毒檢測(cè)。這種多層次的方法來(lái)盡量減少病毒污染的風(fēng)險(xiǎn)，為生產(chǎn)提供安全保證。應(yīng)要求，申請(qǐng)人已刪除在病毒收獲階段進(jìn)行的病毒污染物體內(nèi)測(cè)試。根據(jù)風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估，申請(qǐng)人將 保持

41、對(duì)每一生產(chǎn)批次進(jìn)行現(xiàn)有的病毒污染物體外檢測(cè)。這一做法得到認(rèn)可。總之，對(duì)外源性物質(zhì)的安全性評(píng)價(jià)進(jìn)行了適當(dāng)?shù)奶接懞统浞值年U述。GMOGMO, T-VEC （JS1/ICP34.5-/ICP4HGM-CSF）是一種非致病的重組單純皰疹病毒 1型 （HSV-1）。T-vec是通過(guò)修飾野生型HSV-1基因組（新分離株JS1）而產(chǎn)生，刪除病毒基因組的兩個(gè) ICP34.5拷貝和ICP47拷貝，并在ICP34.5區(qū)域插入人GM-CSF的表達(dá)基因。（見環(huán)境風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估）。Post approval change management protdWl 匕變更管理協(xié)議作為MA申請(qǐng)的一部分，Amgen已經(jīng)提交了一個(gè)經(jīng)過(guò)批

42、準(zhǔn)的變更管理協(xié)議 （PACMP）。PACMP的 目的是擴(kuò)大t-vec的細(xì)胞建造過(guò)程。在獲得市場(chǎng)授權(quán)和 PACMP批準(zhǔn)后，協(xié)議中所描述的更改將通過(guò) 舊 類型的變更申請(qǐng)程序進(jìn)行介紹。所提議的修改已得到充分的介紹和討論。申請(qǐng)者已同意所要求的小修改和/或澄清，最后更新的PACMP將按照ECTD的結(jié)束順序提交。Discussion on chemical, pharmaceutical and biological aspeCtS、 藥學(xué)和生物方面的討 論質(zhì)量檔案文件充分描述了活病毒和藥物產(chǎn)品的特征、生產(chǎn)和控制。所提供的信息表明，該活病 毒和藥物產(chǎn)品的連續(xù)批量生產(chǎn)達(dá)到了一個(gè)明確的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。對(duì)該產(chǎn)品的非病

43、毒和病毒安全性進(jìn)行了 正確的評(píng)價(jià)，并對(duì)其安全性進(jìn)行了論證。Conclusions on the chemical, pharmaceutical and biological aspects、藥學(xué)和生物方面 的結(jié)論根據(jù)SMPC中定義的條件，IMLIGIC的質(zhì)量是可接受的。已經(jīng)研究了與臨床的均一性相關(guān)的 物理化學(xué)和生物學(xué)方面，并以令人滿意的方式進(jìn)行控制。以確保病毒/TSE安全的數(shù)據(jù)已被提呈。CHMP認(rèn)可CAT對(duì)化學(xué)、制藥和生物學(xué)方面的結(jié)論的評(píng)價(jià)。Recommendation（s） for future quality development 來(lái)質(zhì)量發(fā)展的建議鑒于最高行政當(dāng)局有義務(wù)適當(dāng)考慮技術(shù)和科

44、學(xué)進(jìn)步，CAT委員會(huì)針對(duì)進(jìn)一步調(diào)查提出兩點(diǎn)建議。CHM贊同CA倭員會(huì)的關(guān)于未來(lái)的質(zhì)量發(fā)展建議的評(píng)估。Non-clinical aspects2.3非臨床部分介紹The nonclinical pharmacology and toxicology programs have included studies designed to evaluate the mechanismof action, biodistribution and shedding, general safety of talimogene laherparepvec following single and repeat

45、administration, and effects on embryo-foetal development.In vivo pharmacodynamics studies were performed inin vivonude (xenograft studies) or immunocompetent (syngeneic studies) BALB/c mice. A mouse surrogate HSV-1 vectorencoding the murine GM-CSF (OncoVEX; JS1/34.5-/47-/mGM-CSF) was developed and u

46、sed for themouse studies because of the inability of human GM-CSF to bind to mouse GM-CSF receptor. Such studies includethe analysis of anti-tumour effect of OncoVEXon mice previously exposed to wild type HSV-1. Nonclinicalpharmacokinetic evaluation included studies addressing biodistribution, viral

47、 shedding, and replication oftalimogene laherparepvec. The nonclinical toxicology studies consisted of general toxicity studies up to 12 weeks in mice and an embryo-foetal development study in mice. Additional single dose studies were also conducted in rats and dogs. Pivotal repeat-dose toxicology,

48、biodistribution, and embryo-foetal development studies wereperformed in accordance with Good Laboratory Practice (GLP) regulations.非臨床藥理學(xué)和毒理學(xué)項(xiàng)目包括T-vec的作用機(jī)制、生物分布和降解非臨床藥理學(xué)和毒理學(xué)項(xiàng)目包括評(píng)估talimogene laherparepvec 的作用機(jī)制、生物分布和脫落、單次和重復(fù)給藥后的總體安全性以及對(duì)胚胎發(fā)育的影響。體內(nèi)藥效學(xué)研究在裸鼠（異種移植研究）或免疫活性（同源研究）BALB/c小鼠中進(jìn)行。編碼小鼠 GM-CSF （onc

49、omgm-csf;jsr /34.5-/47-/mGM-CSF） 由于人GM-CSF不能與小鼠GM-CSF受體結(jié)合。這些研究包括分析致癌煩惱GM-CSF對(duì)先前暴露于野生型HSV-1的小鼠的抗腫瘤作用。非臨床藥代動(dòng)力學(xué)評(píng)價(jià)包括研究talimogene laherparepvec的生物分布、病毒脫落和復(fù)制。非臨床毒理學(xué)研究包括長(zhǎng)達(dá)12周的小鼠一般毒性研究和小鼠胚胎發(fā)育研究。在大鼠和狗身上也進(jìn)行了額外的單劑量研究。關(guān)鍵的重復(fù)劑量毒理 學(xué)、生物分布和胚胎胚胎發(fā)育研究是根據(jù)良好的實(shí)驗(yàn)室實(shí)踐（GLP）條例進(jìn)行的.藥理學(xué)，藥物學(xué)Primary pharmacodynamic studies藥效學(xué)研究In v

50、itro體外實(shí)驗(yàn)應(yīng)用細(xì)胞病理學(xué)效應(yīng)(CPE)法評(píng)價(jià)OncoVEX GM-CSF對(duì)腫瘤細(xì)胞體外裂解作用。觀察了 T-vec對(duì)一系列的人腫瘤細(xì) 胞株(黑色素瘤、結(jié)直腸、乳腺、腦、咽、前列腺、鱗狀細(xì)胞)的體外殺傷作用。在 MOI= 0.1和1感染T-vec條件下,對(duì)細(xì)胞感染后24、48h分別用臺(tái)盼藍(lán)染色法進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)分析其裂解作用(細(xì)胞死亡百分比)。選擇單個(gè)培養(yǎng)時(shí)間(24h或48h),對(duì)每株細(xì)胞死亡率最大的細(xì)胞株進(jìn)行ELISA法測(cè)HGM-CSF結(jié)果如表3所示，并顯示了劑量和時(shí)間的依賴性反應(yīng)。黑色素瘤細(xì)胞株(SK-MEL-28)又寸T-vec的感染高度敏感，感染 24h后MOI 0.1和1細(xì)胞死亡率分

51、別為48噴口89% ,感染48h后細(xì)胞死亡率分別為84噂口100%感染24h后，在MO為0.1和1的條件下，黑色素瘤細(xì)胞株(SK-MEL-分別分泌 HGM-CSF 69 ng/mL和 140 ng/mL。Cellular mediated immune response in A20 tumour bearing mice treated with JS1/34.5-/47- (Study 4648-00071)Measurement of CT26-specific cytotoxic T- lymphocytes after intra-tumoral injection of mouse

52、 surrogate into CT26 tumour bearing female BALB/c mice (Study R20130079)These studies investigated the T cell immune response in mice bearing A20 tumors treated with JS1/34.5-/47- (OncoVEX backbone). Immune-response was measuredex vivo by the T-lymphocyte activation as a response toIFN ? release and

53、 by development of specific cytotoxic T-cells using cytotoxic T-lymphocyte assay (CTL). The IFN?release was stimulated most notably in splenocytes isolated from the mice treated with mouse surrogate and incubated with A20 tumour cells (Figure 3). The stimulation of IFN? release was seen at the earli

54、est time pointtested (3 days) and remained high during the study duration (up to 7 days). Moderate levels of IFN? release wasdetected at 5 days insplenocytes isolated from the JS1/34.5-/47- treated mice as a specific response to the A20 tumour cells. Splenocytes were incubated with A20 tumour cells

55、(+A20) or without (-A20).Table 3: In vitro efficiency of talimogene laherparepvec (shown as cancer cell death%)Table 3:In vitro efficiency of talimogene laherparepvec (shown as cancer cell death%)Cell Line24 HR Incubation45 HR incubationMO 1-0 JMOI-1MOI-0.1MOh1% cell 加QThhGM-C8F (ng/mL% cell deathhG

56、M CSF |n 承 niL)% celli deathhGM-CSF1MmL)% cell deathhGM-CSF (ng/mL)FalDu36.421.9ioa2135100nt100ntHT291533.8E8.3176284.6nt100ntSK MEL-2848.3693S4.1140.689.4nt100ntU-87 MG0nt54.4nt47.137.195.241.4MDA-MB-231127nt136nt0153.96442839FaDu: human squamous cell carcinoma (pliai-ynx) cell line HT29: human col

57、orectal cancer cell line/ SK-MEzL-29： human melanonna cell linej U-S7 MG: human gliobllatoma cell line, MDA-MB-231: human breast adenocarcinoma cell line.FaDu :人鱗狀細(xì)胞癌(咽部)細(xì)胞系； HT29:人類結(jié)直腸癌；SK-MEL-28:人黑色素瘤細(xì)胞；U-87 MG:人類膠質(zhì)母細(xì)胞瘤；MDA-MB-231:人乳腺癌Figure 3: IFN ? release from splenocytes (including T-cells) is

58、olated from JS1/34.5-/47- (OncoVEX backbone, hGM-CSF-deficient talimogene laherparepvec), mouse surrogate (OncoVEX mouseGM-CSF) or vehicle (PBS)-treated mice, or untreated na? ve miceFigure 3:IFNY release from splenocytes (including T-cells) isolated from JS1/34.5-/47-(OncoVEX bckboner hGM-CSF-defic

59、ient talimogene laherparepvecL mouse surrogate (OrcoVEX mouseGM-CSF) or vehicle (PBS) -treated mice, or untreated nafve miceIn vivoEfficacy of Talimogene Laherparepvec in the B16F10- muNectin1 Melanoma Syngeneic Tumour Model in FemaleC57BL/6 Mice ( Study R20150003)Tumours were initiated by SC implan

60、tation of 1 x 105 B16F10/mNectin-1 tumour cells into the right flank ofC57BL/6 mice. After 10 days, animals (n=10) received 3 intratumoural doses of 5 x 106 PFU (50 g L) of talimogenelaherparepvec (or other viral constructs or vehicle) on days 10, 13, and 16. The animals in the control group receive