ASTM-E2149-2010翻譯-測定動態(tài)接觸條件下固定化抗菌劑抗微生物活性的試驗方法

1、測定動態(tài)接觸條件下固定化抗菌劑抗微生物活性的試驗方法.范圍本試驗方法用于評價非濾瀝的抗菌活性，動態(tài)條件下的抗菌處理試樣。這 種燒瓶震蕩測試是為了常規(guī)質(zhì)量控制和篩選試驗，以克服在使用傳統(tǒng)抗菌試驗 方法評價底物結(jié)合的抗菌劑時遇到的困難。這些困難包括確保接種體接觸要處 理的表面（如AATCC 100-2004 ,在不同接觸時間的靈活性，在靜態(tài)條件下的 不適當使用（如AATCC 147-2004 ,靈敏度和重現(xiàn)性。本測試方法可以適用于評估許多類型的處理原材料和廣泛范圍的微生 物。在本試驗方法中所使用的原材料可以承受各種物理/化學(xué)的應(yīng)力，而且可以適應(yīng)各種測試中的污染，比如硬水、蛋白質(zhì)，血液，血清，各種化

2、學(xué)品與其他 污染物。表面抗菌活性是通過對比同時測試的試驗樣品的結(jié)果來確定的。浸出抗菌的能力是通過測試前和測試后的兩方面因素確定的。本測試方法只能由通過微生物技術(shù)訓(xùn)練的人員執(zhí)行。數(shù)值用SI單位制做為標準。標準中不會使用其他計量單位。本標準可能涉及危險材料、操作和設(shè)備。本標準不會列舉所有與使用有 關(guān)的安全問題。本標準使用者有責(zé)任建立合適的安全和健康的實施方式，確定 使用前法規(guī)限制的適用性。.相關(guān)文件AATCC5：件AATCC 147-2004紡織品的抗菌性一平行劃線法AATCC 100-2004抗菌紡織品的評價方法.測試方法總結(jié)底物結(jié)合非瀝濾抗菌劑的抗菌活性，是通過細菌直接接觸活性化學(xué)試劑 來確定

3、的。此項測試所得到的抗菌活性，是通過處理試樣在高濃度的菌懸液中 振蕩接觸一小時后確定。其中懸浮液通過接觸培養(yǎng)前后的連續(xù)稀釋，最后對比 在懸浮液中存活生物體的數(shù)目，與之前正常試樣中的存活生物體數(shù)目，計算得 到減少百分數(shù)（或者是10g10數(shù)值）。.意義和應(yīng)用然后在通常使用情況下，由于化學(xué)鍵的作用，抗菌劑不會自由擴散到它 們的環(huán)境中。通常的紡織品測試方法是不適合對固定抗菌劑作評價的，例如 AATCC147-200鉆種方法，它是直接在處理后織物上使用已過濾好的抗菌劑。 這種測試方法通過在測試期間不斷的攪拌，保證了細菌與處理過的纖維，織 物，或其他原材料的良好接觸。被測試物種的代謝狀態(tài)直接影響抗菌劑效果

4、或是試劑濃度的測量。被測 試物種對特定滅菌劑的敏感性會通過生命周期發(fā)生改變。在緩沖液中的一小時 接觸時間可以使物種的新陳代謝時間暫時停滯。本測試方法同時規(guī)定了被測試 物種的生長條件和與原材料的接觸時間，以減少微生物在成長過程中的多變 性。對非浸出劑的液態(tài)抗菌活性分析可以提供完全濕潤測試原材料。隨著表 面潤濕活性劑的使用，可以減少使用疏水和親水性原材料時帶來的負面影響。這種測試方法不適合直接對比浸出與非浸出抗菌劑活性劑。在液態(tài)環(huán)境 下，浸出劑可以以不同的速率釋放活性成分。此時，浸出劑的抗菌活性可能會 在連續(xù)稀釋后還殘存于懸浮液中，并在接觸時間后繼續(xù)發(fā)揮作用，除非在實驗 結(jié)束時可以完全分離。對這些

5、影響因素的控制不包括在此項測試方法內(nèi)，因此 必須有其它方法來確定浸出抗菌劑的殘留。本試驗適用于評價破壞或修正樣品，條件是必須能對其有足夠的控制。注1 -破壞可能包括衣物洗滌，穿著與磨損，輻射與蒸汽滅菌，紫外線照 射，溶劑處理，溫度敏感變化，或類似的物理或化學(xué)處理。.設(shè)備帶孔瓊脂，直徑8mm;空氣置換吸管，100 -1000山，帶一次性吸管；分析天平，用于稱量化學(xué)品和原材料，移液管，用于量取培養(yǎng)液；玻璃器皿：具塞250mL錐形燒瓶，耐高溫；試管，18X 150mmC框細菌測試專用，用于測試生物增長和連續(xù)稀 釋；保溫裝置，能夠保持溫度為35笈；腕式振蕩器，能夠連續(xù)振蕩細菌與底液；分光光度計，能夠測

6、量的吸光度 475nm;無菌血清移液管，50mL與100mL;消毒器，任何可以制造無菌條件的蒸汽消毒器；旋渦混合器，在溶液稀釋過程中攪拌稀釋液；水浴鍋，用于短期存儲液化瓊脂，維持在 45至50C。.試劑緩沖液一用分析級化學(xué)品配制以下溶液的制備從試劑級化學(xué)品。緩沖液 （0.25M磷酸二氫鉀）：每6個月至少配置一次新溶液：稱取34 0.1g磷酸二氫鉀，倒入1000mL燒杯中，加入500mL去離子水。用NaOH 溶液調(diào)節(jié)pH值至3 / 5士0.1。加入去離子水稀釋至1000mL,倒入燒井K中，在4c條件下保存。緩沖 液（0.3mM磷酸二氫鉀）：每2個月至少配置一次新溶液：用無菌移液管吸取0.01mL

7、的緩沖液，移至燒瓶中，加入 800mL去離子水稀釋。加塞，消毒， 在室溫下保存。介質(zhì)胰蛋白酶大豆培養(yǎng)基，根據(jù)客戶的要求制備；平皿計數(shù)瓊脂，根據(jù)客戶的要求制備；潤濕劑，試劑必須預(yù)先通過測試，不會影起細菌數(shù)量的增多或減少。 DCQ2-5211 對于0.01 %的緩沖稀釋溶液必須是有效的。.測試用細菌大腸埃希氏菌，美國標準菌庫，No.25922;測試菌體的培養(yǎng)應(yīng)通過良好的微生物測試，并保證純度。連續(xù)和準確 的測試需要一個純凈，無污染的測試環(huán)境。通過良好的電鍍消毒技術(shù)避免污 染。定期通過平板劃線分離法檢查菌種純度，觀察大腸埃希氏菌與革蘭氏染色 菌落的特征。注2原始的方法，ASTM E2149-01指定克雷伯菌作為試驗的有機體。本 試驗方法中使用大腸桿菌因為它更容易處理，而且是一種更普遍接受的測試類 型有機體。.參數(shù)表面處理或條件必須確定。樣品需要做預(yù)先處理以保證在測試時間內(nèi)能 達到最大活性，而且需要與之前相同處理過的樣品相比較；重量，尺寸，樣品的材料必須確定。試樣需要通過最大限度的攪拌來制備，使得它們可以真實反映測試中表 面面積的比值。.細菌培養(yǎng)液的制備測試前，在35 忑的胰蛋白酶大豆培養(yǎng)液中振蕩培養(yǎng)大腸桿菌1