消毒劑效力驗(yàn)證

1、消毒劑效力驗(yàn)證 能消除以細(xì)胞繁殖形態(tài)出現(xiàn)的微生 物污染的化學(xué)物質(zhì)。消毒劑的定義：抗菌劑（Antiseptic)化學(xué)殺菌劑 (Chemical Disinfectant)清潔劑 (Cleaning Agent)消毒劑 (Disinfectant)衛(wèi)生洗滌劑 (Sanitizing Agent)殺孢子劑 (Sporicidal Agent)滅菌劑 (Sterilant Agent)消毒劑的分類定義（USP29 ）能消除以細(xì)胞繁殖形態(tài)出現(xiàn)的微生 物污染的化學(xué)物質(zhì)。消毒劑的定義： 消毒劑可以殺死孢子 化學(xué)消毒劑的消毒效果取決于其濃度 消毒劑是“無(wú)菌”的 把消毒劑潑灑在表面是一個(gè)有效的消毒方式 消毒劑的

2、實(shí)驗(yàn)室評(píng)估是不可靠的對(duì)消毒劑的部分誤解：理想的消毒劑： - 抗菌譜廣 - 低毒或無(wú)毒 - 無(wú)腐蝕性，無(wú)污染 - 有洗滌作用 - 穩(wěn)定性好 - 作用迅速 - 作用持久 - 價(jià)格低廉影響消毒劑評(píng)估的因素： - 菌種 - 接種 - 培養(yǎng)基組分 - 培養(yǎng)時(shí)間/溫度 - 接觸時(shí)間 - pH值 - 中和劑的種類 - 滲透壓 - 表面張力 - 回收率 - 樣品量 - 培養(yǎng)基性質(zhì) - 測(cè)試/驗(yàn)證方法 消毒劑驗(yàn)證的目的： 通過(guò)特定的微生物與某消毒劑在規(guī)定的使用濃度下，接觸規(guī)定的時(shí)間后，對(duì)微生物進(jìn)行培養(yǎng)、計(jì)數(shù)，考察消毒劑的消毒/殺菌效果。消毒劑驗(yàn)證步驟：第一步：在實(shí)驗(yàn)室對(duì)代表細(xì)菌在規(guī)定的使用濃度和 規(guī)定的作用時(shí)間

3、進(jìn)行確認(rèn)。第二步：用于潔凈區(qū)域不同材質(zhì)的載體，進(jìn)行模擬 試驗(yàn)，作環(huán)境驗(yàn)證。第三步：完成驗(yàn)證報(bào)告，形成SOP。 驗(yàn)證用菌種：金黃色葡萄球菌、銅綠色假單胞菌、枯草桿菌、生孢梭菌、白色念珠菌、黑曲霉。菌種選擇的原則:代表性,普遍性,易存活、低或非致病性,標(biāo)準(zhǔn)菌種。(環(huán)境中常見(jiàn)的污染菌)。菌種的要求：不得超過(guò)5代。采用適宜的方法保存。驗(yàn)證菌種：挑戰(zhàn)微生物(USP 29)AOAC挑戰(zhàn)菌典型環(huán)境分離菌殺菌劑：大腸埃希菌ATCC 11229金黃色葡萄球菌ATCC 6538銅綠假單胞菌ATCC 15442殺菌劑：藤黃微球菌，表皮葡萄球菌，杰氏棒桿菌 ，泡囊假單胞菌 殺真菌劑：白色念珠菌ATCC 10231或2

4、091產(chǎn)黃青霉ATCC 11709黑曲霉菌 ATCC 16404殺真菌劑：產(chǎn)黃青霉，黑曲霉菌 殺孢子劑：枯草芽孢桿菌ATCC 19659殺孢子劑：球形芽孢桿菌 ，蘇云金芽孢桿菌 消毒劑驗(yàn)證的準(zhǔn)備試驗(yàn)合格中和劑的選擇篩選常見(jiàn)干擾物的中和劑或滅活方法 2010年版中國(guó)藥典 附錄109頁(yè)干擾物可選用的中和劑或滅活方法戊二醛亞硫酸氫納酚類、乙醇、吸附物稀釋劑醛類稀釋劑、甘氨酸、硫代硫酸鹽季銨類化合物（QACs）、對(duì)羥基苯甲酸酯、卵磷脂、聚山梨醇酯汞類制劑亞硫酸氫納、巰基乙酸鹽、硫代硫酸鹽雙胍類化合物卵磷脂碘酒、洗必泰類聚山梨醇酯鹵化物硫代硫酸鹽乙二胺四乙酸（EDTA）鎂或鈣離子磺胺類對(duì)氨基苯甲酸-內(nèi)酰

5、胺類抗生素-內(nèi)酰胺酶中和劑毒性試驗(yàn)：將10100 CFU的微生物加入到中和劑中薄膜過(guò)濾，沖洗，培養(yǎng)，計(jì)數(shù)與菌液對(duì)照組比較，回收率應(yīng)70中和劑效力試驗(yàn)將消毒劑和中和劑混合（記錄時(shí)間）加入10100 CFU微生物薄膜過(guò)濾，沖洗，培養(yǎng)，計(jì)數(shù)與菌液對(duì)照組比較，回收率應(yīng)70 驗(yàn)證方法 - 薄膜過(guò)濾法 菌懸液和消毒劑直接混合，在不同的時(shí)間間隔條件下過(guò)濾，培養(yǎng)后評(píng)價(jià)。 驗(yàn)證準(zhǔn)備： - 測(cè)試菌液準(zhǔn)備 用于驗(yàn)證的菌懸液稀釋至106108 CFU/ml左右 - 消毒劑稀釋至規(guī)定濃度。 分裝10ml于若干無(wú)菌試管中； 試管上標(biāo)注消毒時(shí)間：“1分鐘組” ，“5分鐘組” ， “10分鐘組”或其他要求的時(shí)間段。 - 稀釋

6、劑：無(wú)菌純水驗(yàn)證步驟（1）：- 接種 接種各驗(yàn)證菌種至盛有待驗(yàn)證消毒劑的試管（使接后濃度104 CFU/ml)，混合均勻，并立即開(kāi)始計(jì)時(shí)。- 中和、過(guò)濾將消毒劑傾入100ml中和劑中，混合，稀釋（如需要），過(guò)濾，然后用100ml中和劑清洗濾膜，過(guò)濾3次。- 陽(yáng)性對(duì)照 用無(wú)菌水代替消毒劑，步驟同上。驗(yàn)證步驟（2）： -培養(yǎng)和計(jì)數(shù) 取下濾膜放入規(guī)定的培養(yǎng)基平板，在規(guī)定的 溫度、時(shí)間培養(yǎng)后，記數(shù)。和陽(yáng)性對(duì)照相比，微生物數(shù)量下降應(yīng)至少3個(gè) 對(duì)數(shù)值（細(xì)菌芽孢至少2個(gè)對(duì)數(shù)值）。驗(yàn)證步驟（3）：表面挑戰(zhàn)試驗(yàn)-根據(jù)設(shè)施的實(shí)際情況，選擇不同材質(zhì)的載體。玻璃，不銹鋼，塑料薄膜，乳膠，墻面涂料，地面材質(zhì)接種，并確認(rèn)

7、實(shí)際數(shù)量接觸殺菌、中和、過(guò)濾 薄膜過(guò)濾法-1薄膜過(guò)濾法應(yīng)優(yōu)先采用封閉式薄膜過(guò)濾器,也可使用一般薄膜過(guò)濾器。 薄膜過(guò)濾器的濾膜孔徑應(yīng)為不大0.45m，直徑約為50mm根據(jù)供試品及其溶劑的特性選擇濾膜材質(zhì)薄膜過(guò)濾法-2使用時(shí)應(yīng)保證濾膜在過(guò)濾前后的完整性。 濾器及濾膜應(yīng)采用適宜的方法進(jìn)行滅菌。水溶性供試液過(guò)濾前先將少量的沖洗液過(guò)濾以潤(rùn)濕濾膜。油類供試品，其濾膜和過(guò)濾器在使用前應(yīng)充分干燥。為發(fā)揮濾膜的最大過(guò)濾效率，應(yīng)注意保持供試品溶液及沖洗液覆蓋整個(gè)濾膜表面。供試液經(jīng)薄膜過(guò)濾后，若需要用沖洗液沖洗濾膜，每張濾膜每次沖洗量為100ml，沖洗液、沖洗量及沖洗方法同方法驗(yàn)證試驗(yàn)。每片濾膜的總過(guò)濾量不宜過(guò)大，以避免濾膜上的微生物受損傷。薄膜過(guò)濾法-3中國(guó)藥典 附錄109頁(yè)，修訂：薄膜過(guò)濾法采用薄膜過(guò)濾法，濾膜孔徑應(yīng)不大于0.45m，直徑（約）一般為50mm，若采用其它直徑的濾膜，沖洗量應(yīng)進(jìn)行相應(yīng)的調(diào)整。總沖洗量不得超過(guò)1000ml(每片濾膜的總過(guò)濾量不宜過(guò)大)，以避免濾膜上的微生物受損傷。正確使用消毒劑（1）稀釋消毒劑時(shí)只用無(wú)菌水設(shè)備使用后作徹底清潔；使用前作徹底消毒將環(huán)境常見(jiàn)菌列入驗(yàn)證范疇輪流使用不同的消毒劑消毒后，只能用可以消除污染的清潔工具正確使用消毒劑（2）使用消毒劑的人員要接受相關(guān)的培訓(xùn)嚴(yán)格遵守“人流”、“物流”