臨床實驗室管理學(xué)：1.臨床實驗室生物安全修改版

1、臨床實驗室生物安全臨床實驗室的主要危害源包括三個方面：物理危害源化學(xué)危害源生物危害源前兩者的特性：1、可感知，易避免；2、危害范圍有限；3、危害持續(xù)時間短。一、慘痛的歷史教訓(xùn)歷史上，實驗室感染的事件曾多次發(fā)生，實驗室人員曾為此付出了沉重的代價。這些感染的主要原因是：防護意識不強；操作失誤，防護條件不足。例一：1956年，前蘇聯(lián)的一個實驗室曾有9支裝有感染了委內(nèi)瑞拉馬腦炎病毒的鼠腦的安瓿被打破。由于沒采取必要的措施，結(jié)果在幾天內(nèi)造成24名工作人員感染。例二： 1961年莫斯科一家研究所的實驗人員從流行性出血熱疫區(qū)捕捉到一些野鼠帶回實驗室。由于疏忽，這些野鼠被放在了室內(nèi)暴露的場所。不久，實驗室相繼

2、有63人出現(xiàn)發(fā)熱癥狀，開始被誤診為流感，1周內(nèi)又增加了30人，才開始懷疑到是流行性出血熱。例三： 1967年，歐洲的三個城市為研制疫苗，從烏干達等地進口了一批黑長尾猴，而這些猴子攜帶一種特殊的病毒，引起了13名工作人員患病，并使這種疾病在德國馬爾堡等地區(qū)流行，馬爾堡病毒由此而得名。例四： 1979年4月,前蘇聯(lián)斯維爾德洛夫斯克實驗室的泄露事故。 當(dāng)?shù)氐纳镂淦鲗嶒炇野l(fā)生了爆炸，約10公斤的炭疽芽孢粉劑泄露，爆炸釋放出大量的細菌毒霧，造成附近1000多人發(fā)病，數(shù)百人死亡。例五：1998年，我國某大城市的某高校在使用大白鼠進行試驗時，有兩名學(xué)生被大白鼠咬傷，還有一些學(xué)生在給實驗老鼠放血、解剖的過程

3、中，未按照要求戴手套操作，結(jié)果在29名實驗人員中，有 9人感染了流行性出血熱。例六： 2001年，在英國波布特萊爾實驗室東北方向50公里的布倫特伍德地區(qū)發(fā)生了口蹄疫。據(jù)分析和證實，口蹄疫病毒是從波布特萊爾實驗室里泄漏出來，經(jīng)過空氣傳播到布倫特伍德的地區(qū)，從而造成了大規(guī)模的口蹄疫爆發(fā)。例七：2003年9月，一名27歲的研究生在新加坡國立大學(xué)生物安全二級實驗室，因不恰當(dāng)?shù)膶嶒灣绦颍艿轿髂崃_河病毒樣本與非典冠狀病毒的交叉感染。例八： 2010年12月19日下午，東北農(nóng)業(yè)大學(xué)應(yīng)用技術(shù)學(xué)院畜禽生產(chǎn)教育班學(xué)生在動物醫(yī)學(xué)學(xué)院實驗室進行“羊活體解剖學(xué)實驗”。共5個班級28人感染布魯氏菌病，其中包括27名學(xué)生

4、（14名男生，13名女生）、1名老師。黑龍江省教育廳就東北農(nóng)大布病事故處置提出如下指導(dǎo)意見：“通過對學(xué)生走訪和現(xiàn)場實地調(diào)查，專家組認定該事故是一起因?qū)W校相關(guān)責(zé)任人在實驗教學(xué)中違反有關(guān)規(guī)定造成的重大教學(xué)責(zé)任事故，學(xué)校對事故承擔(dān)全部責(zé)?！睂κ鹿氏嚓P(guān)責(zé)任人也做出了嚴(yán)肅處理：對兩名實驗指導(dǎo)教師分別給予了降級、記大過處分，調(diào)離教師崗位；對兩名實驗員及1名實驗指導(dǎo)教師分別給予了記大過、記過處分；停發(fā)上述5人本年度校內(nèi)津貼和年終一次性獎金，兩年內(nèi)不得晉升專業(yè)技術(shù)職務(wù)，并分別追償經(jīng)濟責(zé)任1至5萬元人民幣；免去了該校動物醫(yī)學(xué)學(xué)院院長和院黨總支書記職務(wù)。此外，官方文件中還提到，校方表示愿意承擔(dān)治療的全部費用，并“

5、將根據(jù)患病學(xué)生三個療程結(jié)束后的治療結(jié)果，盡快拿出賠償?shù)壬坪髥栴}的解決方案”。（據(jù)中國青年報）經(jīng)反復(fù)多次與學(xué)生及家長協(xié)商，學(xué)校提出了善后問題處理的解決方案：一是由學(xué)校承擔(dān)學(xué)生本次治療期間的醫(yī)療費及住院伙食補助費。二是經(jīng)司法醫(yī)學(xué)鑒定，若出現(xiàn)由本次布病引起的傷殘，學(xué)校按傷殘等級賠償標(biāo)準(zhǔn)予以全額賠償，鑒定費用由學(xué)校承擔(dān)。三是經(jīng)權(quán)威醫(yī)院(三級甲等醫(yī)院?？?診斷，布病復(fù)發(fā)或由本次布病感染轉(zhuǎn)入慢性期，學(xué)校依法支付治療期間的醫(yī)療費等相關(guān)費用；如出現(xiàn)并發(fā)癥，經(jīng)司法醫(yī)學(xué)鑒定并發(fā)癥的出現(xiàn)與本次布病感染存在因果關(guān)系，學(xué)校依法支付治療期間的醫(yī)療費等相關(guān)費用；如出現(xiàn)由此次布病引發(fā)的不孕不育，學(xué)校依法承擔(dān)法律賠償責(zé)任。四是

6、學(xué)生按照醫(yī)院醫(yī)囑定期做針對布病的復(fù)查，由學(xué)校承擔(dān)檢查費、交通費等相關(guān)費用。五是通過給予學(xué)生一次性補助3萬元，以及免除一年學(xué)費6000元、畢業(yè)時提供創(chuàng)業(yè)基金1萬元、給予營養(yǎng)費(康復(fù)費)1萬元、爭取社會捐助5000元等形式，累計給予學(xué)生補助6.1萬元。六是學(xué)生完成學(xué)業(yè)畢業(yè)時，學(xué)校將積極幫助推薦工作。二、微生物風(fēng)險度評估病原微生物實驗室生物安全管理條例實驗室生物安全通用要求（GB19489-2004）WHO生物安全手冊（第三版，2004）四類在通常情況下不會引起人類或者動物疾病的微生物。 級（低個體危害，低群體危害）不會導(dǎo)致健康工作者和動物致病的細菌、真菌、病毒和寄生蟲等生物因子。級（ 無或極低的個

7、體和群體危險）不太可能引起人或動物致病的微生物。三類能夠引起人類或者動物疾病，但一般情況下對人、動物或者環(huán)境不構(gòu)成嚴(yán)重危害，傳播風(fēng)險有限，實驗室感染后很少引起嚴(yán)重疾病，并且具備有效治療和預(yù)防措施的微生物。 級 (中等個體危害，有限群體危害)能引起人或動物發(fā)病，但一般情況下對健康工作者、群體、家畜或環(huán)境不會引起嚴(yán)重危害的病原微生物。實驗室感染不導(dǎo)致嚴(yán)重疾病，具備有效治療和預(yù)防措施，并且傳播風(fēng)險有限。級（ 個體危險中等，群體危險低）病原微生物能夠?qū)θ嘶騽游镏虏?，但對實驗室工作人員、社區(qū)、牲畜或環(huán)境不易導(dǎo)致嚴(yán)重危害。實驗室暴露也許會引起嚴(yán)重感染，但對感染有有效的預(yù)防和治療措施，并且疾病傳播的危險有限

8、。二類能夠引起人類或者動物嚴(yán)重疾病，比較容易直接或者間接在人與人、動物與人、動物與動物間傳播的微生物。級（高個體危害，低群體危害）能引起人類或動物嚴(yán)重疾病，或造成嚴(yán)重經(jīng)濟損失，但通常不能因偶然接觸而在個體間傳播，或能使用抗生素、抗寄生蟲藥治療的病原微生物。級（ 個體危險高，群體危險低）病原微生物通常能引起人或動物的嚴(yán)重疾病，但一般不會發(fā)生感染個體向其他個體的傳播，并且對感染有有效的預(yù)防和治療措施。一類能夠引起人類或者動物非常嚴(yán)重疾病的微生物，以及我國尚未發(fā)現(xiàn)或者已經(jīng)宣布消滅的微生物。 級(高個體危害，高群體危害)能引起人類或動物非常嚴(yán)重的疾病，一般不能治愈，容易直接或間接或因偶然接觸在人與人，

9、或動物與人，或人與動物，或動物與動物間傳播的病原微生物。級（ 個體和群體的危險均高）病原微生物通常能引起人或動物的嚴(yán)重疾病，并且很容易發(fā)生個體之間的直接或間接傳播，對感染一般沒有有效的預(yù)防和治療措施。根據(jù)實驗室生物安全通用要求（GB19489-2004）等級劃分與標(biāo)準(zhǔn)，病原微生物按危險程度分為四組：1級風(fēng)險組：指對個體和社會無危險或危險性較低的微生物。特性：低個體危害，低群體危害。不會導(dǎo)致健康人員和動物致病的細菌、真菌、病毒和寄生蟲等生物因子屬之。2級風(fēng)險組：指對人或環(huán)境具有中等潛在危害的微生物。特性：中等個體危害，有限群體危害。即某種病原體，能引起人類或動物疾病，但對實驗室人員、社會、牲畜或

10、環(huán)境不太可能具有嚴(yán)重的危險性，實驗室暴露可能引起嚴(yán)重感染，但具有有效的治療方法及預(yù)防措施，并且感染的傳播性有限。3級風(fēng)險組：主要通過呼吸途徑使人傳染上嚴(yán)重的甚至是致死性疾病的致病微生物及其毒素。特性：高個體危害，低群體危害。即某種病原體，通常能引起嚴(yán)重的人類或動物疾病，但一般不會因偶然接觸而從一個個體傳染給他人，具有有效的治療方法及預(yù)防措施，即通常已有預(yù)防傳染的疫苗和治療藥物。4級風(fēng)險組：對人體和環(huán)境具有高度的危險性，通過氣溶膠途徑傳播或傳播途徑不明，目前尚無有效的疫苗或治療方法的病原微生物及其毒素。特性：高個體危害，高群體危害。即能引起人類或動物非常嚴(yán)重的疾病，一般不能治愈，容易直接或間接或

11、因偶然接觸而在人與人、人與動物、動物與動物之間傳播的病原微生物。三、臨床實驗室的生物安全防護實驗室生物安全防護（biological safety containment labortories）：是指在實驗室環(huán)境下處理和保存感染性物質(zhì)的過程中采用的一系列的防護措施。它包括一級防護（primary containment ）和二級防護(secondary containment）。一級防護（屏障）：個人防護裝備和設(shè)備。二級防護（屏障）：實驗室設(shè)置和設(shè)施。(一)、生 物安全實驗室的分級及適用范圍一般說來，生物安全實驗室分為如下四個級別：1、生物安全1級實驗室（BSL-1）實驗室結(jié)構(gòu)和設(shè)施、安全操

12、作規(guī)程、安全設(shè)備適用于對健康成年人已知無致病作用的微生物，如用于教學(xué)的普通微生物實驗室等。一級為普通的微生物實驗室，對外人的進入不特別禁止，也不需要使用生物安全柜。試驗一般在普通實驗臺上進行 設(shè)施要求布局：無特殊要求。設(shè)施設(shè)備：無特殊要求。人員進入：無特別限制。2、生物安全2級實驗室（BSL-2）實驗室結(jié)構(gòu)和設(shè)施、安全操作規(guī)程、安全設(shè)備適用于對人或環(huán)境具有中等潛在危害的微生物。設(shè)置要求：建立新實驗室時應(yīng)盡量遠離公共區(qū)域并進行有效的隔離 ；三區(qū)劃分明確；貯存限制性病原體的實驗室門窗必須加鎖。設(shè)施要求：對于可能發(fā)生氣溶膠的實驗在II級生物安全柜中進行；如果涉及到化學(xué)致癌物質(zhì)、放射性物質(zhì)和揮發(fā)性溶劑

13、，則應(yīng)在具有全排風(fēng)功能的II級B2生物安全柜中進行；限制銳利器具的使用。人員進入要求：禁止外人進入實驗區(qū)域。3、生物安全3級實驗室（BSL-3）實驗室結(jié)構(gòu)和設(shè)施、安全操作規(guī)程、安全設(shè)備適用于主要通過呼吸道途徑使人傳染上嚴(yán)重的甚至是致死性疾病的病原微生物及其毒素，通常已有預(yù)防傳染的疫苗和治療藥物。設(shè)置要求：實驗室的設(shè)計和工程應(yīng)符合特定要求：獨立設(shè)置、三區(qū)兩緩、用時負壓。設(shè)施要求：試驗室的送風(fēng)必須經(jīng)過三級過濾，不允許使用循環(huán)回風(fēng)；排風(fēng)還需要經(jīng)過高效過濾后排放。實驗室的排風(fēng)必須獨立設(shè)置，并采取有效措施保證排風(fēng)系統(tǒng)的平衡，保證各個試驗區(qū)域之間的負壓要求。試驗必須在在IIB級以上的生物安全柜內(nèi)進行。人員

14、進入要求：非實驗室工作人員禁止入內(nèi)；未成年人嚴(yán)禁入內(nèi)。 適用范圍BSL-3級適用于臨床、診斷、教學(xué)、科研或生產(chǎn)設(shè)施，其工作中涉及內(nèi)源或外源性病原體，吸入感染后可產(chǎn)生嚴(yán)重的或致死性的疾病。實驗人員應(yīng)受過特殊訓(xùn)練，掌握處理致病性或致死性病原體的措施，并且在有經(jīng)驗的專家指導(dǎo)下進行操作。工作要求1、 所有傳染物質(zhì)的操作均應(yīng)在生物安全柜或其他物理防擴散裝置中進行，或由穿戴了適當(dāng)?shù)膫€人防護服和防護設(shè)備的人員操作。2、工作人員進入實驗室時應(yīng)著實驗室防護服，如前面不開口的圓領(lǐng)長袖服、清潔套服或連褲工作服。在實驗室外不得穿防護服。非一次性工作服送去清洗前應(yīng)先消毒。工作服明顯被污染時應(yīng)更換。3、在進行如下操作時應(yīng)

15、在二級或三級生物安全柜內(nèi)進行：處理傳染性材料、感染動物尸檢、收集感染動物或雞胚中的組織或液體。4、.當(dāng)某一步驟或程序不能在生物安全柜內(nèi)進行時，應(yīng)輔以適當(dāng)?shù)膫€人防護設(shè)備(如防毒面具、護臉擋板)和物理防擴散裝置(如安全離心杯或密閉轉(zhuǎn)頭)。 5、在有感染動物的房間內(nèi)應(yīng)戴呼吸道和面部保護裝置(如防毒面具)。4、生物安全4級實驗室（BSL-4）實驗室結(jié)構(gòu)和設(shè)施、安全操作規(guī)程、安全設(shè)備適用于對人體具有高度的危險性，通過氣溶膠途徑傳播或傳播途徑不明，目前尚無有效的疫苗或治療方法的病原微生物及其毒素。值得特別注意的事，當(dāng)出現(xiàn)新型不明微生物時，也必須在四級生物安全防護實驗室中進行，待有充分?jǐn)?shù)據(jù)后再決定此種微生物

16、或毒素應(yīng)在四級還是在較低級別的實驗室中處理。四級生物安全實驗室采用在獨立的建筑物內(nèi)用隔離區(qū)和外部隔斷的構(gòu)造，不得設(shè)在城市商業(yè)區(qū)或居民小區(qū)內(nèi)，并遠離公共場所。根據(jù)相應(yīng)的隔離等級使室內(nèi)保持負壓，比三級生物安全實驗室的要求更高。要求在II級B2生物安全柜中，或在III級生物安全柜內(nèi)做實驗。對于某些試驗，試驗人員必須穿著特制的正壓防護服。非試驗室工作人員禁止入內(nèi)。對于三級和四級生物安全實驗室，由于其室內(nèi)空氣潔凈度級別達到或超過了萬級或十萬級，有時也稱之為三級或四級生物安全潔凈室。適用范圍BSL-4級適用于進行危險的外源性病原體的操作，這些病原體可對個體造成嚴(yán)重的致死性疾病，并且可通過空氣傳播。那些與B

17、SL-4級水平病原體具相似或相同抗原性的病原體也應(yīng)該在此級水平進行操作。當(dāng)有足夠的資料可供參考時，可仍然在此水平進行這些病原體的操作，或適當(dāng)降低安全水平。(二）、生物安全柜1、生物安全柜的概念和意義生物安全柜（Biological safety cabinets，BSC）是為操作培養(yǎng)物、菌毒株以及診斷性標(biāo)本等具有感染性的實驗材料時，用來保護操作者本人、實驗室環(huán)境以及實驗材料，使其避免暴露于上述操作過程中可能產(chǎn)生的感染性氣溶膠或微量濺出而設(shè)計的負壓過濾排風(fēng)裝置。2、幾個重要的概念（1）、HEPA 高效空氣過濾器 high efficiency particulate air filter (HE

18、PA) HEPA是指在額定風(fēng)量和有效過濾面積下及空氣阻力在245Pa以下的對直徑0.3m 的粒子捕集效率在99.97%以上的空氣過濾器。高效過濾器采用超細玻璃纖維濾紙或聚丙烯濾紙為濾材，經(jīng)密折而成。特點：通風(fēng)阻力小、展開面積大、容塵量大、濾過效率高。 （2）、微生物氣溶膠 是指由微生物組成的懸浮于氣體介質(zhì)中的相對穩(wěn)定的分散體系。形成原因：攪拌、振蕩、離心等。特點：、無色無味、無孔不入、不易發(fā)現(xiàn)、易于感染；、感染癥狀不典型，病程復(fù)雜，難以及時診治，影響預(yù)后；、有些氣溶膠感染只有呼吸道粘膜免疫才有預(yù)防作用，非呼吸道免疫途徑作用效果欠佳，現(xiàn)有常規(guī)疫苗的預(yù)防效果不理想，如肺炭疽；、呼吸道傳播的病原微生

19、物特別是高致病性病毒常常發(fā)生變異，尤其是其抗原性、致病性都可能發(fā)生改變，在空氣中存活力也可能增強；、微生物氣溶膠易引起病原體在人與人、人與動物、動物與動物之間的傳播；、微生物氣溶膠可以遠距離或較遠距離傳播，這是其傳播性難以預(yù)防的另一重要原因。微生物氣溶膠產(chǎn)生的方式和類型對276種實驗室操作測試發(fā)現(xiàn)，239種（86.6%）操作可以產(chǎn)生微生物氣溶膠。按其產(chǎn)生微生物氣溶膠顆粒的多少，可以將這些操作分為重度、中度和輕度三級?？梢援a(chǎn)生各種嚴(yán)重程度微生物氣溶膠的主要實驗操作如下：產(chǎn)生微生物氣溶膠的其它因素除了實驗室操作可以產(chǎn)生微生物氣溶膠外，患有呼吸道傳染病或皮毛上染有病原微生物的實驗動物也可以產(chǎn)生微生物氣溶膠。微生物氣溶膠在一個實驗室內(nèi)產(chǎn)生后，還可以通過氣