糖提取分離結構測定

1、關于糖的提取分離結構測定第一張，PPT共三十八頁，創(chuàng)作于2022年6月一、提取單糖、低聚糖及苷類化合物 常用水或醇提取，然后用不同的有機溶劑萃取得到不同極性的化合物。多糖 常用熱水、稀堿或稀酸溶液進行提取。植物體內苷常與水解酶共存，所以要殺酶或抑制酶的活性。第二張，PPT共三十八頁，創(chuàng)作于2022年6月提取流程第三張，PPT共三十八頁，創(chuàng)作于2022年6月二、分離1.季銨鹽沉淀法與酸性多糖形成不溶性沉淀，使其分離。常用季氨鹽有十六烷基三甲胺溴化物及其氫氧化物和十六烷基吡啶。提高溶液PH值或加入硼砂緩沖液，也可沉淀分離中性多糖。第四張，PPT共三十八頁，創(chuàng)作于2022年6月2.分級沉淀或分級溶解

2、法按比例由小到大的順序向多糖溶液中加入甲醇或乙醇或丙酮，收集不同濃度下析出的沉淀，反復溶解與沉淀。為了多糖的穩(wěn)定，一般在PH7時進行，酸性多糖在PH2-4時進行。第五張，PPT共三十八頁，創(chuàng)作于2022年6月分級沉淀法得到的多糖，常含有較多的蛋白質，需將其去除方法：選擇使蛋白質沉淀而不使多糖沉淀的試劑（如酚、三氯醋酸、鞣質等）處理 sevag法：（用氯仿:丁醇 5:1混合） 酶解法：（蛋白水解酶，常與sevag法合用） 三氟三氯乙烷法 三氯醋酸法蛋白質的去除第六張，PPT共三十八頁，創(chuàng)作于2022年6月3.離子交換色譜常用交換劑為陽離子或陰離子交換纖維素。陽離子交換纖維素適用于分離酸性、中性多

3、糖和粘多糖。中性多糖與硼酸絡合后可增加酸性，可被陽離子交換纖維素吸附酸性基團多的吸附力強，對于線性分子，分子量大的比小的吸附力強，直鏈分子比支鏈分子易吸附。第七張，PPT共三十八頁，創(chuàng)作于2022年6月4.凝膠柱色譜 分子篩原理，按照分子量的大小不同進行分離。 常用葡聚糖凝膠（sephadex G）5.纖維素柱色譜（吸附分配）6.制備性區(qū)域電泳 （分子大小、形狀、電荷不同，在電場作用下 的遷移速率不同）第八張，PPT共三十八頁，創(chuàng)作于2022年6月第六節(jié) 糖的核磁共振性質第九張，PPT共三十八頁，創(chuàng)作于2022年6月一、糖的1H-NMR 性質 1. 1H-NMR化學位移糖的端基質子信號在4.3

4、6.0甲基五碳糖的甲基信號在1.0左右糖上其余質子信號在3.24.2之間。第十張，PPT共三十八頁，創(chuàng)作于2022年6月2.化學位移的應用根據(jù)糖的端基質子信號的個數(shù)和化學位移值 可推測連有糖的個數(shù)、糖的種類。根據(jù)甲基質子信號的個數(shù)和化學位移值 可推測甲基五碳糖的個數(shù)、糖的種類。第十一張，PPT共三十八頁，創(chuàng)作于2022年6月3.偶合常數(shù)質子的鄰位偶合常數(shù)與二面角有關 兩面角90度 J=0Hz； 兩面角0或180度 J=68Hz； 兩面角60度 J=24Hz第十二張，PPT共三十八頁，創(chuàng)作于2022年6月當2-H為直立鍵時 -D-和-L-型糖的1-H和2-H鍵為雙直立鍵，=180，J=68Hz第

5、十三張，PPT共三十八頁，創(chuàng)作于2022年6月 -D-和-L-型糖 1-H為e鍵，2-H為a鍵，=60，J=24Hz第十四張，PPT共三十八頁，創(chuàng)作于2022年6月如D-葡萄糖、D-半乳糖、D-阿洛糖的2-H均為直立鍵 當其成苷時，端基質子與2-H的J約為4Hz； 當其成苷時，端基質子與2-H的J約為8Hz。第十五張，PPT共三十八頁，創(chuàng)作于2022年6月 2-H為e鍵，1-H無論處于e鍵還是a鍵，與2-H的兩面夾角均約60度，不能用J判斷苷鍵構型。如 D-甘露糖第十六張，PPT共三十八頁，創(chuàng)作于2022年6月 L-鼠李糖 優(yōu)勢構象為1C式，2-H為平伏鍵，1-H與2-H的兩面夾角約60度，所

6、以苷鍵的構型不能J來判斷。第十七張，PPT共三十八頁，創(chuàng)作于2022年6月二、糖的13C-NMR性質 1.化學位移 CH3 18ppm 甲基五碳糖的C6 CH2OH 62ppm C5或C6 CHOH 6885ppm 糖氧環(huán)上的C2C4 -O-CH-O- 95105ppm 端基C1或C2 環(huán)上的碳，帶有a-OH的較帶有 e-OH的出現(xiàn)在較高場處（尤其是端基碳，但不適于甘露糖、鼠李糖的端基碳）；第十八張，PPT共三十八頁，創(chuàng)作于2022年6月D-葡萄糖苷 C1 型97101 ppm 型103106 ppm 在13C-NMR譜中： 第十九張，PPT共三十八頁，創(chuàng)作于2022年6月 2.偶合常數(shù)（吡喃

7、糖中端基碳的碳氫偶合常數(shù))吡喃糖中端基質子處于橫鍵（a-D或-L型苷鍵）時，其端基碳氫的偶合常數(shù)為170175Hz；處于豎鍵（-D或a-L型苷鍵）時則為160165Hz。鼠李糖相反（1C式）第二十張，PPT共三十八頁，創(chuàng)作于2022年6月 3.苷化位移 糖與苷元成苷后，苷元的-C、-C和糖的端基碳的化學位移值均發(fā)生了改變，稱為苷化位移。第二十一張，PPT共三十八頁，創(chuàng)作于2022年6月 如： C1 位移 -D-葡萄糖 96.7 甲基-D-葡萄糖苷 104.0 +8.3 -D-半乳糖 97.3 甲基-D-半乳糖 104.5 +8.3 -L-鼠李吡喃糖 95.1 甲基-L-鼠李糖苷 102.6 +

8、7.5第二十二張，PPT共三十八頁，創(chuàng)作于2022年6月醇型苷：端基碳的苷化位移與苷元醇羥基種類有關 -Glc -Glc 端基碳 C-1 C-1 伯 醇 100.0 +7.1 104.4 +6.7仲 醇 98.5 +4.4 102.3 +3.5叔 醇 94.6 +0.5 98.9 +0.1 伯醇 仲醇 叔醇第二十三張，PPT共三十八頁，創(chuàng)作于2022年6月 伯醇苷（成苷后）苷元-C向低場位移約8個化學位移單位-C向高場位移約4個化學位移單位第二十四張，PPT共三十八頁，創(chuàng)作于2022年6月 環(huán)醇苷 前手性碳：對稱碳原子增加一個取代基后，變?yōu)榉菍ΨQ碳，這樣的碳原子稱之為前手性碳a.兩個-C均為仲

9、碳的苷成苷后-C向低場位移7個單位，端基碳向高場位移約14個單位（與甲苷比），-C的前手性構型與端基碳構型相同時，向高場位移約2個單位；不同時，向高場位移約4個單位。 同小異大：指碳第二十五張，PPT共三十八頁，創(chuàng)作于2022年6月 b. 一個-C為仲碳，另一個為叔碳或季碳的苷 -C與糖的端基碳構型相同時，-C向低場位移約5個單位；不同時-C向低場位移約10個單位。 -C和端基碳的變化較復雜。同五異十其余七指： -C第二十六張，PPT共三十八頁，創(chuàng)作于2022年6月 叔醇苷 成苷后-C向低場位移約7個單位；-C向高場位移約5個單位。 酯苷和酚苷 苷元-C向高場位移，區(qū)別于上述苷。 第二十七張，

10、PPT共三十八頁，創(chuàng)作于2022年6月第七節(jié) 糖鏈的結構測定第二十八張，PPT共三十八頁，創(chuàng)作于2022年6月一、純度測定（多糖） 多糖純品實質上是指一定分子量范圍的均一組分。 測定方法： 超離心法、高壓電泳法、凝膠柱色譜法、旋光測定法、官能團摩爾比恒定法等。第二十九張，PPT共三十八頁，創(chuàng)作于2022年6月二、分子量測定單糖、低聚糖及其苷的分子量測定主要采用質譜法。多采用化學電離質譜(CI-MS)、場解吸質譜(FD-MS)、快原子轟擊質譜(FAB-MS)和電噴霧質譜(ESI-MS)等方法，ESI-MS及FAB-MS是目前測定苷類分子量常用的方法。 應用甲基化法和過碘酸氧化法進行的末端分析法也

11、常用來推算多糖的分子量第三十張，PPT共三十八頁，創(chuàng)作于2022年6月三、單糖的鑒定一般是將苷鍵全水解，用PC檢出單糖的種類，糖類的PC常用的展開劑大多為含水的溶劑系統(tǒng)，如正丁醇-醋酸-水(4:1:5)，EtOAc-吡啶-水(2:1:2)等，經(jīng)顯色后用薄層掃描法求得各種糖的分子比。用GC或HPLC對單糖定性定量，GC常以甘露醇或肌醇為內標，用已知單糖作為對照品。NMR譜，也可以有效地鑒定苷分子中糖的種類。第三十一張，PPT共三十八頁，創(chuàng)作于2022年6月四、糖的連接位置的測定1.甲基化法： 將被測物全甲基化，水解苷鍵，用GC定性定量分析，具有游離羥基的部位是糖的連接位點。2. 1H-NMR 法

12、： 根據(jù)乙?；蟮馁|子化學位移判斷糖的連接位點。3. 13C-NMR法： 通過苷化位移，推斷糖的連接位點。第三十二張，PPT共三十八頁，創(chuàng)作于2022年6月五、糖鏈連接順序的確定1.部分水解法： 將糖鏈水解成較小片段（低聚糖），然后分析片段推斷糖鏈的結構。2.質譜法 根據(jù)質譜中的裂解規(guī)律和裂解碎片推測糖鏈的連接順序。 3.NMR和2D-NMR法。第三十三張，PPT共三十八頁，創(chuàng)作于2022年6月2. 質譜法FDMS、FABMS等。 優(yōu)點：不必制備衍生物,用量小,準確,簡便。第三十四張，PPT共三十八頁，創(chuàng)作于2022年6月是將糖及其苷類衍生物全乙?；?，測定觀察兩糖之間質子的遠程偶合或NOE效應，確定糖的連接順序。3. NMR和2D-NMR法。通過HMBC可確定糖的連接位點。第三十五張，PPT共三十八頁，創(chuàng)作于2022年6月六、苷鍵構型及氧環(huán)的確定1.苷鍵構型確定方法包括： 1H-NMR 法、酶解法、分子旋光差法等。 1H-NMR 法 1 利用端基質子的偶合常數(shù) 2 利用-苷鍵和-苷鍵的端基碳的化