藥物含量測(cè)定

1、關(guān)于藥物的含量測(cè)定第一張，PPT共七十三頁，創(chuàng)作于2022年6月第一節(jié) 概述藥物的含量測(cè)定 評(píng)價(jià)藥物質(zhì)量的主要指標(biāo)。運(yùn)用化學(xué)、物理或生物化學(xué)的方法和技術(shù)，測(cè)定藥物中主要有效成分的含量。定義第二張，PPT共七十三頁，創(chuàng)作于2022年6月藥物的含量測(cè)定化學(xué)、物理學(xué)、生物學(xué)方法方法 利用某些生物學(xué)特性或特殊反應(yīng)來定性、定量化學(xué)反應(yīng)如光吸收特性、濁度第三張，PPT共七十三頁，創(chuàng)作于2022年6月藥物的含量測(cè)定基于化學(xué)或物理學(xué)原理的含量測(cè)定。分兩類基于生物學(xué)原理的效價(jià)測(cè)定?；A(chǔ)生物檢定法，微生物檢定法，酶法。目標(biāo)含量測(cè)定。第四張，PPT共七十三頁，創(chuàng)作于2022年6月含量方法要求化學(xué)原料藥（API)：根

2、據(jù)藥物的化學(xué)結(jié)構(gòu)、理化性質(zhì)等特點(diǎn)綜合考慮適宜的含量測(cè)定法。選用的含量測(cè)定法應(yīng)能準(zhǔn)確測(cè)試有效成分的含量，其準(zhǔn)確度和精密度均高。制劑：可能時(shí)應(yīng)選用與原料藥相同的測(cè)定方法，共存藥物、輔料、附加劑有干擾時(shí)，可考慮增加預(yù)處理或改進(jìn)方法,但專屬性要強(qiáng)。第五張，PPT共七十三頁，創(chuàng)作于2022年6月 含量表示方法（一）原料藥含量的表示法原料藥一般以百分含量表示，指樣品中被測(cè)成分（一般為活性物質(zhì)）的百分含量。一般按干燥品計(jì)算。藥典凡例規(guī)定： “按干燥品（或無水物，或無溶劑）計(jì)算”時(shí)，除另有規(guī)定外，應(yīng)取未經(jīng)干燥（或未去水，或未去溶劑）的供試品進(jìn)行試驗(yàn)，并將計(jì)算中的取用量按檢查項(xiàng)下測(cè)得的干燥失重（或水分，或溶劑）

3、扣除。因此：含量%（干燥品計(jì)）=直接測(cè)得量（1-干燥失重）第六張，PPT共七十三頁，創(chuàng)作于2022年6月（二）藥物制劑含量的表示法一般以相當(dāng)于標(biāo)示量的百分?jǐn)?shù)表示，指一個(gè)制劑單位中平均含有的藥物成分為制劑標(biāo)準(zhǔn)的“規(guī)格”項(xiàng)規(guī)定量的百分?jǐn)?shù)。如：對(duì)乙酰氨基酚片，規(guī)格0.5g，經(jīng)含量測(cè)定測(cè)得平均每片含對(duì)乙酰氨基酚0.45g，則標(biāo)示量為90%。第七張，PPT共七十三頁，創(chuàng)作于2022年6月固體制劑含量測(cè)定結(jié)果的計(jì)算 %100%=標(biāo)示量每片實(shí)測(cè)含量含量100平均片重=標(biāo)示量供試品重測(cè)得量標(biāo)示量平均片重供試品重測(cè)得量100第八張，PPT共七十三頁，創(chuàng)作于2022年6月原料藥制劑第九張，PPT共七十三頁，創(chuàng)作于

4、2022年6月 物質(zhì)的量 效價(jià) 生物學(xué)法（基于生物學(xué)原理） 藥物含量測(cè)定方法化學(xué)法（基于化學(xué)原理） 容量分析法、重量分析儀器分析法（基于物理學(xué)原理） 光譜法、色譜法第十張，PPT共七十三頁，創(chuàng)作于2022年6月具體方法容量分析法：包括重量分析法、滴定法（直接、間接滴定法）光譜分析法：UV、IR、色譜分析法：HPLC、GC第十一張，PPT共七十三頁，創(chuàng)作于2022年6月第二節(jié)、容量分析法 為經(jīng)典方法，原料藥分析常采用。常產(chǎn)生滴定誤差，如指示劑和儀器容量 特點(diǎn)：1、快速,準(zhǔn)確（RSD103 ，n越大柱效高進(jìn)樣tRh0.5hWh/2Wt第四十三張，PPT共七十三頁，創(chuàng)作于2022年6月7.分離度 R

5、2（tR2tR1）/（W1W2）R1.5 認(rèn)為分離完全W1W2TR2-tR1第四十四張，PPT共七十三頁，創(chuàng)作于2022年6月（二）基本原理 待分離物質(zhì)在兩相間進(jìn)行分配時(shí)，在固定相中溶解度較小的組分，在色譜柱中向前遷移速度較快；在固定相中溶解度較大的組分，在色譜柱中向前遷移速度較慢，從而達(dá)到分離的目的。 依固定相與流動(dòng)相極性的不同，分為正相色譜和反相色譜1.正相色譜法 流動(dòng)相極性小于固定相一般用極性物質(zhì)作固定相，非極性溶劑(如苯、正己烷等)作流動(dòng)相，主要用于分離極性化合物，極性小的組分先流出，極性大的組分后流出。2.反相色譜法 流動(dòng)相極性大于固定相一般用非極性物質(zhì)作固定相，極性溶劑(如水、甲醇

6、、己腈等)作流動(dòng)相，主要用于分離非極性或弱極性化合物，極性大的組分先流出，極性小的組分后流出。第四十五張，PPT共七十三頁，創(chuàng)作于2022年6月（三）固定相和流動(dòng)相1.固定相 常用化學(xué)鍵合相，分極性和非極性鍵合相，如十八烷基硅烷鍵合硅膠（C18或ODS）和辛基硅烷鍵合硅膠（C8）為最常用的非極性鍵合相，用于反相色譜法； 氨基和氰基硅烷鍵合相為常用的極性鍵合相，用于正相色譜法。2.流動(dòng)相 有機(jī)溶劑+水混合一般為色譜純?cè)噭?，?jīng)0.45um的微孔濾膜過濾，需脫氣處理 第四十六張，PPT共七十三頁，創(chuàng)作于2022年6月（四）儀器的基本結(jié)構(gòu) 第四十七張，PPT共七十三頁，創(chuàng)作于2022年6月1.色譜柱柱

7、管-不銹鋼，填充硅膠和化學(xué)鍵合固定相 內(nèi)徑4.6mm長(zhǎng)15cm、20cm和25cm的三種，如安捷倫色譜柱、 Waters色譜柱、迪馬色譜柱等。 第四十八張，PPT共七十三頁，創(chuàng)作于2022年6月2.檢測(cè)器常用紫外檢測(cè)器其次有二極管陣列檢測(cè)器(DAD)熒光檢測(cè)器示差折光檢測(cè)器蒸發(fā)光散射檢側(cè)器電化學(xué)檢測(cè)器和質(zhì)譜檢測(cè)器等 第四十九張，PPT共七十三頁，創(chuàng)作于2022年6月（五） 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)定義：指用規(guī)定的對(duì)照品對(duì)色譜系統(tǒng)進(jìn)行試驗(yàn)，應(yīng)符合要求。包括柱溫、柱長(zhǎng)、固定相、流動(dòng)相；理論板數(shù)：說明分離過程，色譜柱的塔板數(shù)越多，柱效越高； 分離度：應(yīng)大于1.5；重復(fù)性：相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差應(yīng)不大于2.0%；等；第五

8、十張，PPT共七十三頁，創(chuàng)作于2022年6月 （六）在雜質(zhì)檢查和含量測(cè)定中的應(yīng)用 1.內(nèi)標(biāo)法（加校正因子）方法：內(nèi)標(biāo)物+對(duì)照品對(duì)照溶液，進(jìn)樣，測(cè)定，計(jì)算校正因子。RRssCACAf=校正因子CR對(duì)照品濃度As內(nèi)標(biāo)物峰面積CS內(nèi)標(biāo)物濃度AR對(duì)照品峰面積供試品+內(nèi)標(biāo)供試品溶液，進(jìn)樣，測(cè)定供試品和內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的峰面積或峰高，計(jì)算含量f= AS / CSAx /CxCx=f AxAS / CSCx樣品濃度Ax樣品峰面積第五十一張，PPT共七十三頁，創(chuàng)作于2022年6月例.HPLC法測(cè)定鹽酸阿夫唑嗪片（規(guī)格：5mg）的含量：取鹽酸特拉唑嗪約20mg，稱定，置100ml量瓶中，加流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻，

9、得內(nèi)標(biāo)溶液。取鹽酸阿夫唑嗪對(duì)照品約10mg，精密稱定，置10ml量瓶中，加流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻，得對(duì)照品儲(chǔ)備液，精密取該儲(chǔ)備液1ml，置100ml量瓶中，精密加內(nèi)標(biāo)溶液5ml，用流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻，得對(duì)照品溶液；另取本品20片，精密稱定，研細(xì)，精密稱細(xì)粉適量（約相當(dāng)于阿夫唑嗪10mg），置100ml量瓶中，加流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液10ml，置100ml量瓶中，精密加內(nèi)標(biāo)溶液5ml，用流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻，得樣品溶液。分別精密取對(duì)照品溶液和樣品溶液各20l注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按內(nèi)標(biāo)法以峰面積計(jì)算含量。第五十二張，PPT共七十三頁，創(chuàng)作于20

10、22年6月操作：對(duì)照品取樣為10.1mg，20片重為1.6020g，取樣細(xì)粉稱重158.2mg，測(cè)得對(duì)照品溶液中鹽酸阿夫唑嗪和內(nèi)標(biāo)的峰面積分別為5470124和6126012，樣品溶液中阿夫唑嗪和內(nèi)標(biāo)的峰面積分別為5219986和61198978，計(jì)算本品的含量。 第五十三張，PPT共七十三頁，創(chuàng)作于2022年6月解：對(duì)照品濃度：0.0101mg/ml,內(nèi)標(biāo)濃度：0.01mg/mgf=(AS/CS)/(AR/CR)=(6126012/0.01)/(5470124/0.0101) =1.13 CX=fAX/(AS/CS)=1.135219986/(6119898/0.0100) =0.00973

11、5mg/ml=（0.00973510010/158.2)（1.6020/20）/5100%=98.58% 100平均片重=標(biāo)示量供試品重測(cè)得量含量標(biāo)示量平均片重供試品重測(cè)得量100第五十四張，PPT共七十三頁，創(chuàng)作于2022年6月第五十五張，PPT共七十三頁，創(chuàng)作于2022年6月例.HPLC法測(cè)定單硝酸異山梨酯注射液（規(guī)格：5ml:20mg）的含量：取間三甲氧基苯約20mg，稱定，置100ml量瓶中，加流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻，得內(nèi)標(biāo)溶液。取單硝酸異山梨酯對(duì)照品約8mg，精密稱定，置100ml量瓶中，精密加內(nèi)標(biāo)溶液5ml，用流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻，取20l注入液相色譜儀，記錄色譜圖；

12、另取本品2ml，同法測(cè)定，按內(nèi)標(biāo)法以峰面積計(jì)算含量。已知：對(duì)照品取樣為8.1mg，測(cè)得對(duì)照品溶液中單硝酸異山梨酯和內(nèi)標(biāo)的峰面積分別為5467824和6125843，樣品溶液中單硝酸異山梨酯和內(nèi)標(biāo)的峰面積分別為5221345和6122845，計(jì)算本品的含量。第五十六張，PPT共七十三頁，創(chuàng)作于2022年6月解：f=(AS/CS)/( AR/CR)=(6125843/0.01)/(5467824/0.081)=9.07 CX=fAX/(AS/CS)=9.075221345/(6122845/0.01)=0.07735mg/ml 100裝量=標(biāo)示量取樣量測(cè)得量含量標(biāo)示量裝量取樣量測(cè)得量100=(0.

13、7735100/5)2/20100%=96.68%第五十七張，PPT共七十三頁，創(chuàng)作于2022年6月2.外標(biāo)法對(duì)照液（R）： AR CR 供試液（X）： AX CXCX CRAX ARCXCR AXAR要求：進(jìn)樣量準(zhǔn)確、操作條件穩(wěn)定第五十八張，PPT共七十三頁，創(chuàng)作于2022年6月A總=Ai=A1+A2+An (%)=Ai / A總100% 例題7 用氣相色譜法檢查大豆油的脂肪酸組成，相應(yīng)于棕櫚酸、硬酯酸、油酸、亞油酸和亞麻酸的峰面積分別為129758、43286、296522、654868、92570，按峰面積歸一化法，計(jì)算上述脂肪酸的百分含量。 3、面積歸一化法第五十九張，PPT共七十三頁

14、，創(chuàng)作于2022年6月二、氣相色譜法1.分離原理注入進(jìn)樣口的樣品經(jīng)加熱氣化后，被載氣帶入色譜柱，由于其分配系數(shù)的不同進(jìn)行分離，各組分先后進(jìn)入檢測(cè)器，信號(hào)記錄儀、積分儀和數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)記錄色譜信號(hào)。分配系數(shù)小的組分先流出，分配系數(shù)大的組分后流出。第六十張，PPT共七十三頁，創(chuàng)作于2022年6月2.色譜儀的基本結(jié)構(gòu)由載氣源、進(jìn)樣器、色譜柱、柱溫箱、檢測(cè)器和數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)組成 第六十一張，PPT共七十三頁，創(chuàng)作于2022年6月.載氣（流動(dòng)相）： 如氦、氮和氫等 .進(jìn)樣器：直接進(jìn)樣或頂空進(jìn)樣 微量注射器第六十二張，PPT共七十三頁，創(chuàng)作于2022年6月. 固定相和載體 色譜柱為填充柱或毛細(xì)管柱 常用的固定

15、液有甲基聚硅氧烷、不同比例組成的苯基甲基聚硅氧烷、聚乙二醇等。毛細(xì)管柱填充柱第六十三張，PPT共七十三頁，創(chuàng)作于2022年6月. 檢測(cè)器 火焰離子化檢測(cè)器（FID)、熱導(dǎo)檢測(cè)器(TCD)、氮磷檢測(cè)器（NPD)、火焰光度檢測(cè)器(FPD)、電子捕獲檢測(cè)器(ECD)、質(zhì)譜檢測(cè)器(MS) .色譜系統(tǒng)適用性和含量測(cè)定中的應(yīng)用同高效液相色譜法第六十四張，PPT共七十三頁，創(chuàng)作于2022年6月第五節(jié) 藥品含量測(cè)定方法驗(yàn)證 1 專屬性 2 線性及其范圍 3 精密度 4 準(zhǔn)確度 5 檢測(cè)限 6 定量限 7 耐用性第六十五張，PPT共七十三頁，創(chuàng)作于2022年6月一、專屬性(Specificity) 指有其他成分

16、（雜質(zhì)、降解物、輔料等）可能存在情況下采用的方法能準(zhǔn)確測(cè)定出被測(cè)物的特性。 分析復(fù)雜樣品混合物時(shí)衡量其是否受到干擾的一種方法。A- 對(duì)照品B- 樣 品C- 陰 性第六十六張，PPT共七十三頁，創(chuàng)作于2022年6月二、線性與范圍(Linearity And Range)線性：在設(shè)計(jì)的范圍內(nèi)，測(cè)試結(jié)果與被測(cè)物濃度呈正比關(guān)系的程度。 Y=a+bx （r0.999) 范圍：達(dá)到一定精密度、準(zhǔn)確度和線性的條件下，測(cè)試方法適用的高低限濃度或量的區(qū)間。eg.原料藥和制劑含量測(cè)定，范圍應(yīng)為測(cè)試濃度的80%120%；制劑含量均勻度檢查，范圍應(yīng)為測(cè)試濃度的70%130%，根據(jù)劑型特點(diǎn)，如氣霧劑、噴霧劑，范圍可適當(dāng)

17、放寬；溶出度或釋放度中的溶出量測(cè)定，范圍應(yīng)為限度的20%第六十七張，PPT共七十三頁，創(chuàng)作于2022年6月1、定義：在規(guī)定的測(cè)試條件下,同一個(gè)均勻樣品經(jīng)多次測(cè)定所得結(jié)果彼此符合程度。三、精密度2、表示方法： 偏差（d）： 標(biāo)準(zhǔn)偏差(SD): 相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD):第六十八張，PPT共七十三頁，創(chuàng)作于2022年6月重復(fù)性: 同一實(shí)驗(yàn)室,同一人多次測(cè)定的精密度至少用9次測(cè)定結(jié)果評(píng)價(jià)：制備三個(gè)不同濃度樣品，每一濃度樣品測(cè)三次。中間精密度: 同一實(shí)驗(yàn)室，不同人，不同儀器測(cè)定的精密度目的：考察隨機(jī)變動(dòng)因素的影響，如日期、分析人員重現(xiàn)性: 不同實(shí)驗(yàn)室，不同人測(cè)定的精密度當(dāng)分析方法將被法定標(biāo)準(zhǔn)采用時(shí)，應(yīng)進(jìn)行重現(xiàn)性試驗(yàn)，結(jié)果應(yīng)記載在起草說明中。第六十九張，PPT共七十三頁，創(chuàng)作于2022年6月四、準(zhǔn)確度1、定義：指用該方法測(cè)定的結(jié)果與真實(shí)值或參考值接近的程度。2、測(cè)定法：用百分回收率（R）表示，測(cè)定回 收率的具體方法可采用“回收試驗(yàn)法”和“加樣回收試驗(yàn)法” 第七十張，PPT共七十三頁，創(chuàng)作于2022年6月（1）回收試驗(yàn)法 空白B+已知量A的對(duì)照品（或標(biāo)準(zhǔn)品）測(cè)定，測(cè)定值為M。R = 測(cè)得量加入量100%（2）