家禽RNA干涉基因片段使用中的有關(guān)問題

1、 家禽RNA干涉基因片段使用中的有關(guān)問題兩千多萬只家禽應(yīng)用實(shí)踐表明，禽流感、新城疫、傳支、肝炎、法氏囊等RNA基因片段對直接對抗相關(guān)病毒在家禽體內(nèi)的病毒復(fù)制、“殺死”相關(guān)病毒方面起到了很好的作用，其效能比要比普通抗病毒藥、干擾素、多肽與轉(zhuǎn)移因子要高得多。下面主要就當(dāng)前最關(guān)心的禽流感和新城疫的疾病控制和基因片段應(yīng)用進(jìn)行總結(jié)，歡迎有關(guān)專家和同行批評指導(dǎo)。 一、RNA基因片段比普通抗病毒藥效能比高的原因目前，在家禽的病毒性疾病，特別是禽流感的大流行面前，普通抗病毒藥如病毒靈、病毒唑、金剛烷胺、金剛已胺等確實(shí)“力不從心”以至“無能為力”，一些大藥廠的技術(shù)經(jīng)理，在其內(nèi)部培訓(xùn)會(huì)議上就直接說，“不要再講我們

2、的藥能治禽流感了，要不，客戶越有我們研發(fā)的藥，雞死得越多。吹得越大，面子丟得越狠！”“抗病毒藥適度用，不說包治的大話，多采取措施防治繼發(fā)感染就行了”。需要說明的是，如果主藥控制不住禽流感或新城疫病毒，再多加退燒藥和激素，也不會(huì)產(chǎn)生好的效果。普通抗病毒早已成為人的抗病毒藥，它對禽流感和新城疫肯定有一定的效果，盡管有關(guān)部門一直不給抗病毒的獸藥批號(hào)。但是這些藥物對病毒的主要作用位點(diǎn)以特殊蛋白為主，也就是只能在早期對付病毒的侵入和早期復(fù)制有一定和效果。其實(shí)這些藥在人身上使用也是這樣，主要的還是靠人自身的的低抗力。而RNA基因片段由于不象抗病毒藥那樣只有很少的表面攻擊位點(diǎn)，它在細(xì)胞內(nèi)直接攻擊正在復(fù)制中的

3、必不可少的病毒基因，使病毒因不能合成一些保守的關(guān)鍵蛋白而死去，所以不但在病毒的潛伏期和疾病早期有效果，而且在病毒大量繁殖時(shí)還有效果。在普通抗毒藥無效時(shí)，它還能和病毒“拚一段時(shí)間刺刀”！ 附：關(guān)于干擾素一點(diǎn)另外問題RNA干涉基因片段比干擾素和轉(zhuǎn)移因子效能比也要高的原因是因?yàn)楦蓴_素和轉(zhuǎn)移因子本身并不能直接殺死病毒，大多通過免疫調(diào)節(jié)來起作用，所以作用較弱。至于市場上有的有特殊功效的干擾素雖然對付禽流感無效，但治新城疫還效果不錯(cuò)的其實(shí)起作用的不是什么干擾素，只不過里面添加了一定量的一個(gè)很弱的新城疫毒株而已，這個(gè)弱毒株比正常的新城疫系株和系株還要弱很多，就是我們以前因毒力太弱而淘汰不用的系株和系株而已，

4、但這兩個(gè)素株仍可以作為緊急接種時(shí)使用。好多獸醫(yī)在雞群有禽流感感染時(shí)，做新城疫系和系疫苗緊急接種都走過“麥城”，會(huì)出現(xiàn)降蛋更嚴(yán)重或死亡更厲害的情況，但做這種很弱毒株的免疫時(shí)，則不引起這種情況。這也是許多基層獸醫(yī)想到這種“神奇”的干擾素可能是新城疫毒株，但又因與走“麥城”的情況不一樣自我否定的猜想。其實(shí)猜想是對的！平時(shí)，有禽流感感染時(shí)，雞群一做大劑量系飲水或系注射，因毒力相對來說還是比較強(qiáng)，這些病毒的繁殖就會(huì)引起一些呼吸道和消化道上皮細(xì)胞的破裂，而這些細(xì)胞破裂釋放的一些蛋白酶，大大有利于禽流感病毒的復(fù)制，用老百姓的話說，就是用了新城疫苗，將禽流感病毒都趕出來了。而系株和系株在少量使用時(shí)，只引起或很

5、少引起細(xì)胞的破裂，所以，即使有禽流感病毒的存在，也不會(huì)將其大量“激發(fā)”(復(fù)制)出來。對于這種“干擾素”的檢驗(yàn)，只需用雞紅血球做一下凝集試驗(yàn)，就會(huì)發(fā)現(xiàn)其血凝價(jià)約在2的4次方左右（正常的系血凝價(jià)在2的10次方以上，比這個(gè)要高64倍以上，緊急接種時(shí)的病毒量的倍數(shù)要比這個(gè)高200到400倍以上），而干擾素本身是沒有血凝性的，如果用新城疫抗原膠體金試紙檢測，二十秒內(nèi)就能檢測出來。特種干擾素的市場動(dòng)作的思路非常高明巧妙，所以，有的老板看到別人的干擾素能掙錢，能賣30元，而自己高薪雇傭的碩士、博士研發(fā)出來的干擾素連3元錢也賣不到，氣得整天大罵研發(fā)人員。其實(shí)作為老板應(yīng)該先看看別人起作用的是什么東西，再來研發(fā)，

6、否則，花錢不少，東西還是真的，就是沒有人家的效果，您說這個(gè)老板冤不冤？不過這種機(jī)巧（不是技巧），也就是在中國能玩玩兒，蒙些巨款；在歐美玩這個(gè)，很快就會(huì)被人揭穿。姑且叫中國特色的干擾素神話吧！ 二、RNA基因片段的總體使用效果目前看來，RNA基因片段的應(yīng)用上表現(xiàn)出比較優(yōu)異的性能。一是用初期的雞呼嚕、降蛋和早期的零星死亡，一般使用三天就會(huì)有明顯的好轉(zhuǎn)和改善。二是疾病時(shí)間長時(shí)，也有一定的效果，重癥還可以通過打針來解決，打針時(shí)建議使用生理鹽水稀釋。當(dāng)然注射時(shí)，要注意多換針頭，以免通過針頭，人為地傳翻病毒?；蚱蔚目傆行誓壳翱磥砟苓_(dá)到90%以后，有明顯效果或能達(dá)到使用者滿意的比例在60%以上?；蚱?/p>

7、段的使用，給肉雞的疾控防疫帶來了福音。由于肉雞不做禽流感的防疫，到了三十天左右，常感染多種病毒和細(xì)菌，死亡率大大增加，用藥也不理想。一般來說，肉雞群中有禽流感或新城疫病毒，其大腸桿菌、沙門氏菌和支原體就很難治療好。現(xiàn)在一些地方的使用者，已總結(jié)出利用禽流感新城疫RNA基因干涉片段防控禽流感和新城疫的好方法，就是在發(fā)病的20多天前或30多天前的兩三天，用基因片段連續(xù)三天飲水，直接清除雞體內(nèi)的禽流感或新城疫野毒，使雞群能夠順利地到達(dá)出欄，雞群中的禽流感或新城疫野毒沒有或很少時(shí)，細(xì)菌病的控制也就變得相對容易多了。也能避免有禽流感時(shí)，飲新城疫活苗引起的不必要的死亡和病毒加重。對于個(gè)別發(fā)蔫或大群發(fā)病重的情

8、況，可以采取直接打針的方未法，用生理鹽水稀釋注射原液即可，要注意多換針頭，避免針頭直接傳播病毒。注射效果比飲水要好，一是發(fā)病雞有的不喝水，飲水對它無效；二是注射的吸收速度快、利用率也高，顯效時(shí)間也要早?；蚱蔚氖褂谜f白了，就是與病毒繁殖的速度賽跑，基因片段搶到前頭了，病毒的數(shù)量會(huì)越來越少，雞群的狀態(tài)就會(huì)恢復(fù)，如果落在后頭，病毒越來越多，雞群的狀態(tài)就會(huì)下降。用眼觀來看，就是基因片段也沒“頂上事”。 三、基因片段使用的不理想情況基因干涉片段使用不理想的情況有以下幾種：（一）、雞群在感染禽流感的同時(shí)，還有大量的細(xì)菌混合感染，造成死亡持續(xù)下不來。此時(shí)需要加相應(yīng)的抗菌藥來抑制細(xì)菌的大量繁殖?；蚋缮嫫?/p>

9、段具有特異性，只有所屬的病毒有效，而對其它的病毒和細(xì)菌沒有一點(diǎn)效果。所以準(zhǔn)確地診斷疾病、及時(shí)地采取相關(guān)的措施也是很關(guān)鍵的一項(xiàng)工作。（二）、基因干涉片段，其單片段或組合片段組，對細(xì)胞內(nèi)的病毒起效時(shí)，是一對一的，如果病毒的量大于基因片段的量，剩下的病毒就會(huì)繼續(xù)繁殖，這就會(huì)出現(xiàn)，當(dāng)天上午用了基因片段，下午雞群就有精神，但第二天又發(fā)蔫了，第二天再用藥，又出現(xiàn)相同的情況。此時(shí)藥物的用量就要相應(yīng)地增加了。一些養(yǎng)殖場在連用三天后，看到雞群明顯好了，就停止用藥了。這種方法有時(shí)并不好，有時(shí)還有個(gè)別雞身上帶有病毒，殺死病毒的基因片段一旦停止使用，病毒就有可能再次繁殖，病雞還會(huì)向外排毒，外觀表現(xiàn)就是雞群再次出現(xiàn)打蔫

10、、降蛋等情況。所以，這種情況下，病情出現(xiàn)明顯好轉(zhuǎn)時(shí)，應(yīng)再加用二到三天的基因片段，以求盡量徹底地清除禽流感或新城疫野毒，達(dá)到雞場比較高的生物安全度。（三）、對于病毒復(fù)制過快的情況，有兩種，一種就是中等毒力的病毒株，因有細(xì)菌或其它病毒破壞上皮細(xì)胞釋放的必需蛋白酶的幫助，在雞體內(nèi)全方位的復(fù)制；另一種就是碰上了強(qiáng)毒力的毒株，自身快速復(fù)制，不需要其它幫助。此種情況，可以使用一個(gè)雞一個(gè)針頭大劑量注射基因片段來對抗。如果這種情況還不行，就回天無力了。高致病力的禽流感毒株還有一個(gè)特性，它不象H9那樣需要外在的酶來幫助感染，它自身能夠完成對細(xì)胞的侵入，它另外一個(gè)特征就是能直接破壞大部分內(nèi)臟器官，如肺、腦、肝、腎

11、、心、胰臟等，能直接引起比如心肌炎、心肌出血、心冠脂肪出血，這種雞心臟可能突然不跳，急劇死亡，所以就會(huì)出現(xiàn)基因片段還沒來得及與人家博斗，雞已經(jīng)死了；其它的情況還有能引起腦昏迷、急性腎衰、急性胰腺炎等，就拿急性胰腺炎來說，就是人得了此病，人醫(yī)現(xiàn)在都不敢保能救過來，常常是立即下病危通知書，雞也一樣，很不好處理。所以這種情況下，獸醫(yī)也不能確保病情一定能控制住，因?yàn)樗赡懿荒苣鷻C(jī)會(huì)。某地就發(fā)生過一起極端的例子，早上起來，發(fā)現(xiàn)雞舍中2000只180日齡雞，死了兩只，主家想吃過早飯后拿到門市上讓獸醫(yī)看看，回家吃飯?jiān)倩貋恚疃鄡蓚€(gè)小時(shí)，再去雞舍看，已死了600多只雞。象這種最急性的病例，一是大多沒有明顯的剖

12、檢癥狀，再一個(gè)就是病毒在極短的時(shí)間內(nèi)，造成了雞主要器官急劇的病理損傷，不排除有腦昏迷、急性心肌出血、急性胰腺炎、腎衰、肺的急性呼吸窘迫等情況，引起的急性死亡。這種情況下，神仙恐怕也沒有好招，基因片段也來不及。RNA基因干涉片段說白了，就是在普通抗病毒藥無法對抗病毒時(shí)，它還能與病毒博斗一段時(shí)間，還有希望將病毒壓下去。但它不會(huì)是什么神藥，也有其應(yīng)用的界限。只不過在這種情況下使用藥物，就要考驗(yàn)獸醫(yī)本身的技術(shù)素養(yǎng)和對疾病進(jìn)程與有關(guān)細(xì)節(jié)的有效考量了。 四、其它問題（一）、禽流感病毒不是經(jīng)常變化嗎？為什么禽流感基因片段對大多禽流感病毒有效？禽流感的善變是指其血凝素（H）常發(fā)生變化，而作為流感病毒，它身上也

13、有很多穩(wěn)定保守幾乎靜止不變的部分，比如M蛋白、核衣殼蛋白等，選擇有效的RNA干涉基因片段，當(dāng)然不會(huì)去選其易變的基因，只會(huì)選取其穩(wěn)定的保守的關(guān)鍵的基因，所以RNA干涉基因片段對大多數(shù)禽流感有效。其它病毒的RNA干涉片段也是這樣選擇的。（二）、基因片段能與抗病毒藥同用嗎？能，在病毒感染的早期，抗病毒藥與基因片段同用有相加作用，二者的作用機(jī)理不同，所以沒有沖突，只是抗病毒藥不能直接加到基因片段的原液里，二者的Ph值不盡相同，核苷酸的Ph值在7.0到8.0之間，而二者同時(shí)混入大飲水器中是沒有問題的。（三）、基因片段與干擾素、轉(zhuǎn)移因子等如何鑒別？基因片段本身是核苷酸，它能用開水煮，煮半小時(shí)后，再使用，效

14、果仍然不變，而干擾素和轉(zhuǎn)移因子里面含有蛋白質(zhì)，一過開水，就會(huì)變質(zhì)失效，所以不能過開水，至于添加了新城疫或其它活毒株的所謂“神效”“干擾素”，也不能過開水，一見高效，活毒株就會(huì)很快死亡，其“神效”也就沒了。所以，只要不敢過開水，又需要冷藏的產(chǎn)品，肯定不是RNA基因片段，或者不是純的基因片段。 RNA基因片段本身能常溫儲(chǔ)存，當(dāng)然也能冷藏。但是成品不建議冷凍。因?yàn)槔鋬龊?，再化開，有可能在瓶底出現(xiàn)一些白色的小結(jié)晶點(diǎn)，那是析出的基因片段，此時(shí)需要將瓶子放到60度以上的水中，搖晃，使其再融解，既麻煩又沒有必要。不過，純化的基因片段在零下40度以下儲(chǔ)存，保質(zhì)期可長達(dá)幾十年。（四）最重要的問題還是防病觀念的轉(zhuǎn)化問題許多養(yǎng)殖朋友只有看到雞降蛋了死雞了才著急看病，而拿提前了解病毒的變異與提前清除雞體內(nèi)的野毒并不怎么關(guān)心，真正病到了，嚴(yán)重了再動(dòng)手，就是治好了，損失還是會(huì)有的。這種現(xiàn)狀非常不利于養(yǎng)雞業(yè)