高效毛細(xì)管電泳

1、高效毛細(xì)管電泳及其在農(nóng)藥分析中的應(yīng)用0303600021一、問題的提出 我國現(xiàn)有中藥種類已達(dá)12807種，其中藥用植物11146種，藥用動物1581種，藥用礦物80種中草藥在保護(hù)人民群眾健康方面起著重要作用由于需求量大，野生中草藥遠(yuǎn)遠(yuǎn)不能滿足市場的需求，目前大部分中草藥都依賴人工栽培全國藥材種植面積超過580萬畝，藥材生產(chǎn)基地600多個(gè)，常年栽培的藥材達(dá)200余種為了保障種植藥材的產(chǎn)量，藥農(nóng)不得不頻繁地使用各種農(nóng)藥農(nóng)藥殘留不僅影響群眾的健康，還影響我國名貴藥材的出口創(chuàng)匯如80年代末云南省出口日本的三七大量退貨，目前我國人參在海外市場日益受韓國高麗參的排擠等，都有農(nóng)藥殘留超標(biāo)的原因2二、CE的裝

2、置及基本原理3毛細(xì)管電泳儀在實(shí)驗(yàn)室中4三、CE的特點(diǎn)高質(zhì)量靈敏度：常用紫外檢測器的檢測限可達(dá)10-1310-15mol，激光誘導(dǎo)熒光檢測器(LIF)則達(dá)10-19-10-21。高分辨率：每米理論塔板數(shù)為幾十萬，高者可達(dá)幾百萬乃至幾千萬。高速度：許多分析可在10分鐘內(nèi)完成，有的可在60秒內(nèi)完成。所需樣品少：只需納升(10-9升)的進(jìn)樣量。成本低：只需少量(幾毫升)的流動相和低廉的毛細(xì)管。應(yīng)用范圍廣：除分離生物大分子（肽、蛋白、DNA和糖等）外，還可用于小分子(氨基酸、藥物等)及離子(無機(jī)及有機(jī)離子等)，甚至可分離各種顆粒(如硅膠顆粒等)。 ：三高二少一廣 5四、CE的分離模式 1 毛細(xì)管區(qū)帶電泳

3、(capilary zone electrophoresis,CZE) CZE的分離機(jī)理是基于各被分離物質(zhì)的凈電荷與質(zhì)量比(荷質(zhì)比)間的差異。應(yīng)用范圍包括氨基酸、肽、蛋白、離子分析、對映體拆分和很多其它離子態(tài)物質(zhì)的分析。 2 膠束電動色譜(micellar electrokinetic capillary chromatography，MECC) MECC是唯一既能分離中性溶質(zhì)又能分離帶電組分的CE模式。采用表面活性劑(如十二烷基硫酸鈉，SDS)在操作緩沖液內(nèi)形成有一疏水內(nèi)核、外部帶負(fù)電的膠束相。利用溶質(zhì)具有不同的疏水性，在水相和膠束相(準(zhǔn)固定相)間分配的差異得以分離。主要用于小分子、中性化合

4、物，手性對映體、各種藥物等。 63毛細(xì)管凝膠電泳(capillary gel electrophoresis，CGE) CGE是將凝膠移到毛細(xì)管中作支持物進(jìn)行的電泳。不同體積的溶質(zhì)分子在起“分子篩”作用的凝膠中電泳分離。常用于蛋白質(zhì)、寡聚核苷酸、RNA、DNA片斷分離和測序及PCR產(chǎn)物分析?，F(xiàn)在還有采用無膠篩分方法，同樣可達(dá)分離目的。 4毛細(xì)管等電聚焦(capillary isoelectric focusing，CIEF) CIEF是用兩性電解質(zhì)在毛細(xì)管內(nèi)建立pH梯度，使各種具有不同等電點(diǎn)的蛋白質(zhì)在電場作用下遷移到等電點(diǎn)的位置，形成一非常窄的聚焦區(qū)帶。已成功用于測定蛋白質(zhì)等電點(diǎn)，分離異構(gòu)體或

5、用其它方法難于分離的蛋白質(zhì)。 75毛細(xì)管等速電泳(capillary isotachophoresis ，CITP) CITP采用先導(dǎo)電解質(zhì)和尾隨電解質(zhì)，使溶質(zhì)按其電泳淌度不同得以分離，是一種較老的方式?，F(xiàn)在可作為柱前濃縮方法用于富集樣品。 6毛細(xì)管電色譜(capillary electrochromatography，CEC) CEC是將HPLC中眾多的固定相微粒填充到毛細(xì)管中，以樣品與固定相之間的相互作用為分離機(jī)制，以電滲流為流動相驅(qū)動力的色譜過程。雖然柱效有所下降，但增加了選擇性，是一種有發(fā)展前景的模式。 8五、 在農(nóng)藥分析中的應(yīng)用 1. 定量分析研究 2. 在農(nóng)藥制劑和原藥中有效成分的

6、測定 3. 在農(nóng)藥中雜質(zhì)的分離和測定 4. 手性農(nóng)藥分析9六、應(yīng)用實(shí)例 毛細(xì)管電泳法研究提取劑對黃連黃柏共煎劑中生物堿含量的影響樣品制備 粉碎過篩浸泡回流用水提取提取劑提取2. 電泳分析 穩(wěn)定儀器確定檢測波長選擇緩沖溶液電泳檢測 103、結(jié)果與分析11成分分析 按照圖1b中所示得試驗(yàn)條件，采用加入法測定小檗堿等得溶液電泳圖，結(jié)果見圖2。1至6峰對應(yīng)的化合物分別為黃連堿、小菜堿、麥小菜堿、巴馬汀、藥根堿、小菜紅堿。與圖1b的結(jié)果相比較，黃連。黃柏配伍后共煎浸膏中的主要成分為黃連堿、小果堿、麥小菜堿、巴馬汀和藥根堿。 12線性關(guān)系配制一系列小菜堿和巴馬汀的標(biāo)準(zhǔn)混合镕液，在同一條件下測定電泳圖，以峰面積對濃度作圖，結(jié)果小菜堿和巴馬汀分別在15.065.0mgL，12.550.0mg/L之間有良好的線性關(guān)系，回歸方程為：小檗堿：y1455.3C2134 r09984 (1) 巴馬?。簓79763C十34622 r09995 (2)131415八、結(jié)束語 CE作為一種新的分離手段，在農(nóng)藥分析中有廣泛的應(yīng)用前景。它的微量，解決了中藥提取的困難。它的高效，使中藥多種成分的同時(shí)分離成為可能，它的快捷提高了分析效率。與MS聯(lián)用，在定量的同時(shí)對