化學品毒性鑒定技術規(guī)范

1、化學品毒性鑒定技術規(guī)范2005年6月 第三階段試驗亞慢性吸入毒性試驗Subchronic Inhalation Toxicity Test1 范圍 本規(guī)范規(guī)定了嚙齒類動物亞慢性吸入毒性試驗的基本原則、要求和方法。 本規(guī)范適用于檢測化學品的亞慢性吸入毒性。2 規(guī)范性引用文件OECD Guidelines for Testing of Chemicals (No. 413, 12 May 1981)USEPA OPPTS Health Effects Test Guidelines (Series 870.3465, June 1996) 3 試驗目的確定一定時期內(nèi)經(jīng)呼吸道反復接觸受試化學物引起的

2、毒性效應，了解毒作用靶器官、損害程度和無作用濃度水平，為確定慢性呼吸道毒性試驗的濃度提供依據(jù)。4 定義4.1 亞慢性吸入毒性（Subchronic Inhalation Toxicity）：是指在實驗動物部分生存期（不超過10%壽命期）內(nèi)，反復經(jīng)呼吸道接觸受試樣品后所引起的健康損害效應。無可見有害作用水平（No Observed Adverse Effect Level，NOAEL）：在規(guī)定的試驗條件下，用現(xiàn)有的技術手段或檢測指標未觀察到任何與受試樣品有關的毒性作用的最大染毒濃度?？捎脛游锩咳战佑|單位體積空氣受試樣品的質(zhì)量（mg/m3）表示。4.3最低可見有害作用水平（Lowest Obser

3、ved Adverse Effect Level，LOAEL）：在規(guī)定的試驗條件下，受試樣品引起實驗動物形態(tài)、功能、生長發(fā)育等發(fā)生有害改變的最低染毒濃度?？捎脛游锩咳战佑|單位體積空氣受試樣品的質(zhì)量（mg/m3）表示。4.4 靶器官(Target Organ):實驗動物出現(xiàn)由受試樣品引起的明顯毒性作用的任何器官。5 試驗基本原則各組實驗動物每日經(jīng)呼吸道吸入不同濃度的受試樣品，連續(xù)染毒3個月（90d），有時侯可根據(jù)需要染毒6個月（180d）。如使用溶劑或其它賦形劑，需設溶劑（賦形劑）對照組。試驗期間每日觀察動物的毒性反應。在染毒期間死亡的動物要進行尸檢。染毒結束后所有存活的動物均要處死、剖驗以及作

4、適當?shù)牟±斫M織學檢查。6 試驗方法6.1 受試樣品 在開始本試驗之前，應盡量搜集受試樣品現(xiàn)有的各種資料。 受試樣品的商品名和其他名稱（包括CAS號）。 受試樣品的結構式、分子式和分子量。 受試樣品的物理、化學性質(zhì)(可包括：外觀、沸點、熔點、密度、折射率、光譜資料、溶解度、揮發(fā)性、化學活性、穩(wěn)定性、ppm和mg/m3換算系數(shù)、光化學性質(zhì)、電離度、粒度等)。 受試樣品的分析方法， 受試樣品的生產(chǎn)方法、合成路線和雜質(zhì)。 儲存方法：要有長期儲存受試樣品（包括在賦形劑或飼料中）的合適方法。否則需定期制備新鮮樣品。 人類每日可能接觸的水平 接受樣品的日期應登記。開始試驗前應有適當數(shù)量的受試樣品。樣品來源和

5、批號應相同，盡可能使用同一批生產(chǎn)的受試樣品，否則，每一批受試樣品的純度和雜質(zhì)要分別測定。氣態(tài)受試樣品可直接染毒。若受試樣品為液體，可直接霧化后染毒，如果較粘稠難以霧化，可加入賦形劑作適當稀釋。若受試樣品為固體，應將其粉碎后以粉塵染毒，至少應保證相當部分為可吸入粉塵（粒徑5）；也可將固體受試樣品溶解至適當?shù)娜軇ㄙx形劑）中霧化后染毒。水是首選的賦形劑，若采用其它賦形劑，應考慮其毒性和刺激性等，并按要求設賦形劑對照。6.2 實驗動物和飼養(yǎng)環(huán)境 動物的選擇和觀察常用嚙齒類動物，首選大鼠，一般選用68周齡的大鼠。也可使用其它種屬如豚鼠等進行試驗。動物體重的變動范圍按性別不應超出平均體重的20%。染毒開

6、始前至少要有5d時間使實驗動物適應實驗室飼養(yǎng)環(huán)境，并在這段時間內(nèi)觀察實驗動物的狀態(tài)。若本試驗為其它長期試驗的預備試驗，則本試驗所選用的動物應與以后選用的動物相同。 動物的性別和數(shù)量每一劑量組實驗動物至少應有20只，雌雄各半。若計劃在試驗過程中處死動物，則應增加計劃處死的動物數(shù)。6.2.3 實驗動物和動物試驗的環(huán)境設施 實驗動物和動物試驗的環(huán)境設施應符合國家相應規(guī)定。選用常規(guī)飼料，飲水不限制。動物可分性別群飼或單只飼養(yǎng)，群飼時應能清楚觀察籠內(nèi)每只動物的情況。 試驗一般設三個染毒組和一個對照組。對照組動物不接觸受試樣品，其它條件均與染毒組相同。最高染毒濃度應使動物產(chǎn)生較明顯的毒性效應，但不引起過多

7、動物死亡。低濃度組應不出現(xiàn)任何毒性作用。若掌握人群接觸水平，則最低染毒濃度應高于人群的實際接觸水平。如劑量設計得當，中濃度組可引起較輕的毒性效應，若設多個中濃度組時，應產(chǎn)生不同程度的毒性效應。此外，可另設一追蹤觀察的附加組，選用20只動物(雌雄各半)，與最高濃度組一同染毒，在全程染毒結束后繼續(xù)觀察一段時間(一般不少于28d)，以了解毒性作用的持續(xù)性、可逆性或遲發(fā)毒作用。但必須注意，高濃度組與附加組一起染毒，動物數(shù)的增加不應明顯影響該組試驗條件與其它各組條件的一致（參見6.6），否則，在試驗設計時每組均增加一定的動物數(shù)。試驗結束時每組剖殺部分動物（數(shù)量以滿足統(tǒng)計分析為原則），部分動物繼續(xù)觀察。6

8、.4 染毒時間 按職業(yè)接觸方式為每天46h，每周5d。按環(huán)境污染物接觸方式為每天23h；留下1h給動物喂食和清理染毒柜，每周7d。受試樣品濃度以mg/m3計。6.5 染毒方式 應采用動式染毒?？刹捎谜w染毒法、頭面式或口鼻式方法進行。整體染毒時，動物可舔食皮毛和籠具上吸附的受試樣品，且少量受試樣品可能經(jīng)皮吸收，但所需設備較為簡便，且與實際接觸氣體化學物的模式較一致；頭面式或口鼻式動式吸入染毒時，動物僅頭面部或口鼻部暴露在含受試樣品空氣中，可避免全身染毒法的缺點。染毒期間動物不進食但可飲水（頭面式或口鼻式除外）。6.6 染毒設施、試驗環(huán)境和受試樣品濃度監(jiān)測 應保證籠內(nèi)動物不太擠迫，使動物能最大限

9、度接觸受試樣品；動物所占體積不超過染毒柜體積的5%；應保證實驗動物的正常需氣量，大鼠為30 L/h,小鼠為3 L/h；染毒柜換氣次數(shù)1215次/h；柜內(nèi)氧含量19；定期記錄染毒柜中溫度和相對濕度；在試驗進行過程中連續(xù)監(jiān)測氣流量；在動物呼吸帶采樣測定受試樣品濃度，在試驗開始時每小時一次，以后（如一周后）若濃度穩(wěn)定，可適當減少采樣測定的次數(shù)，有條件時最好能連續(xù)監(jiān)測受試樣品的濃度。染毒柜應保持一定的負壓，以防受試樣品意外漏出。以下各項包括檢查項目和試驗結果的評價等可參考亞慢性經(jīng)口毒性試驗，但肺和氣管病理檢查為必檢指標；鑒定報告需提供動物暴露資料包括所用染毒裝置情況（何種設計、類型、尺寸、氣源、排出氣

10、的處理、染毒時動物的安置情況等）、空氣溫濕度、計算濃度、實測濃度，如有可能，提供粒子的分散度等。亞慢性經(jīng)皮毒性試驗Subchronic Dermal Toxicity Test1 范圍 本規(guī)范規(guī)定了嚙齒類動物亞慢性經(jīng)皮毒性試驗的基本原則、要求和方法。 本規(guī)范適用于檢測化學品的亞慢性經(jīng)皮毒性。2 規(guī)范性引用文件OECD Guidelines for Testing of Chemicals (NO. 411, 12 May 1981)USEPA OPPTS Health effects test guidelines (Series 870-3250, 1996)3 試驗目的確定一定時期內(nèi)經(jīng)皮反

11、復接觸受試化學物引起的毒性效應，提供經(jīng)皮毒作用靶器官的無作用劑量水平，為確定慢性經(jīng)皮毒性試驗的劑量提供依據(jù)。4 定義4.1亞慢性經(jīng)皮毒性(Subchronic Dermal Toxicity)：是指在實驗動物部分生存期內(nèi)，每日反復經(jīng)皮接觸受試樣品后所引起的健康損害效應。無可見有害作用水平（No Observed Adverse Effect Level，NOAEL）：在規(guī)定的試驗條件下，用現(xiàn)有的技術手段或檢測指標未觀察到任何與受試樣品有關的毒性作用的最大染毒劑量。4.3最低可見有害作用水平（Lowest Observed Adverse Effect Level，LOAEL）：在規(guī)定的試驗條件

12、下，受試樣品引起實驗動物形態(tài)、功能、生長發(fā)育等發(fā)生有害改變的最低染毒劑量。4.4 靶器官(Target Organ)：實驗動物出現(xiàn)由受試樣品引起的明顯毒性作用的任何器官。5 試驗基本原則各組實驗動物每日經(jīng)皮膚接觸不同劑量的受試樣品，連續(xù)染毒3個月（90d），有時候可根據(jù)需要染毒6個月（180d），染毒期間每日觀察動物的毒性反應。在染毒期間死亡的動物要進行尸檢。染毒結束后所有存活的動物均要處死、剖驗以及作適當?shù)牟±斫M織學檢查。6 試驗方法6.1 受試樣品 在開始本試驗之前，應盡量收集受試樣品現(xiàn)有的各種資料。 受試樣品的商品名和其他名稱（包括CAS號）。 受試樣品的結構式、分子式和分子量。 受試樣

13、品的物理、化學性質(zhì)(可包括：外觀、沸點、熔點、折射率、光譜資料、溶解度、揮發(fā)性、化學活性、光化學性質(zhì)、電離度、粒度、密度等)。重要的參數(shù)還包括脂水分配系數(shù)、穩(wěn)定性（包括在賦形劑中）等。 受試樣品的分析方法。 受試樣品的生產(chǎn)方法、合成路線和雜質(zhì)。 儲存方法：要有長期儲存受試樣品（包括在賦形劑中）的合適方法。否則需定期制備新鮮樣品。 人類可能接觸的途徑或水平。6.2 受試樣品接受樣品的日期應登記。開始試驗前應有適當數(shù)量的受試樣品。樣品來源和批號應相同，盡可能使用同一批生產(chǎn)的受試樣品，否則，每一批受試樣品的純度和雜質(zhì)要分別測定。若受試樣品為固體，應將其粉碎、過100目篩并用適當?shù)馁x形劑充分濕潤，以保

14、證受試樣品與皮膚有良好的接觸。水是首選的賦形劑，若采用其它賦形劑，應考慮其毒性和刺激性，并應考慮賦形劑對受試樣品皮膚通透性的影響。液體受試樣品一般不用稀釋。6.3 實驗動物和飼養(yǎng)環(huán)境 動物的選擇和觀察首選初成年大鼠，也可使用其它種屬如家兔或豚鼠進行試驗。動物要有合適體重以保證足夠的涂皮面積，如大鼠200300g，兔23kg，豚鼠350450克等，但動物體重的變動范圍不應超出平均體重的20%。染毒開始前至少要有5d時間使實驗動物適應動物室飼養(yǎng)環(huán)境，并在這段時間內(nèi)觀察實驗動物的狀態(tài)。 動物的性別和數(shù)量每一劑量組實驗動物至少應有20只，雌雄各半，皮膚健康，雌性動物必須未曾懷孕。若計劃在試驗過程中處死

15、動物，則應增加計劃處死的動物數(shù)。6.3.3 實驗動物和動物試驗的環(huán)境設施應符合國家相應規(guī)定。選用常規(guī)飼料，飲水不限制。6.4 劑量設計 試驗一般設三個染毒組和一個對照組。對照組動物不接觸受試樣品，其它條件均與染毒組相同。最高染毒劑量應使動物產(chǎn)生較明顯的毒性效應，不引起過多動物死亡(死亡率不應超過10%)，低劑量組應不出現(xiàn)任何毒性作用。若掌握人群接觸水平，則最低染毒劑量應高于人群的實際接觸水平。如劑量設計得當，中劑量組會引起較輕的毒性效應，若設多個中劑量組時，應產(chǎn)生不同程度的毒性效應。此外，可另設一追蹤觀察組，即選用20只動物(雌雄各半)，給予最高劑量受試樣品，染毒90d，在全程染毒結束后繼續(xù)觀

16、察一段時間(一般不少于28d)，以了解毒性作用的持續(xù)性、可逆性或遲發(fā)毒作用；也可在試驗設計時每組增加一定的動物數(shù)，試驗結束時每組剖殺部分動物（數(shù)量應滿足統(tǒng)計分析），部分動物繼續(xù)作追蹤觀察。若受試樣品引起嚴重的皮膚刺激效應，應降低受試樣品的使用濃度，盡管這樣可導致原來在高濃度（或高劑量）下出現(xiàn)的其它毒性作用減弱或消失。若試驗早期動物的皮膚受到嚴重損傷，則應終止試驗，并降低低濃度重新開始試驗。本試驗中,如果每天接觸水平超過1000mg/kg bw時仍未產(chǎn)生可觀測到的毒性效應，而且可以根據(jù)相關結構化合物預期受試樣品毒性時，可考慮不必進行三個劑量水平的全面試驗觀察。6.5 試驗方法染毒前24h，將動物

17、軀干背部染毒區(qū)的被毛去除，去毛時應小心不可損傷動物皮膚，以免引起皮膚通透性的改變。此后視動物被毛生長情況，大約每周要對染毒部位去毛，各組的去毛時間和去毛面積應相同。受試樣品應盡可能薄而均勻地涂敷于整個染毒區(qū)域，染毒部位的面積約相當于動物體表面積的10%(計算方法見急性經(jīng)皮毒性試驗附錄)，應通過對動物體重的測定確定染毒部位的面積，若受試樣品毒性較大，可相對減小染毒區(qū)域的面積。應使用玻璃紙和無刺激的膠帶將受試樣品固定，以保證受試樣品與皮膚有良好的接觸和防止受試樣品脫落。染毒時還應采用必要的措施防止動物舔食受試樣品，如對動物進行固定時，應有一定程度的松動。根據(jù)剪毛區(qū)被毛生長情況，可每周剪毛一次。每天

18、染毒6h，理想的染毒周期是每周7d，但考慮到實際情況，每周也可染毒5d。臨床檢查項目等原則上與亞慢性經(jīng)口毒性試驗相同，但皮膚病理檢查為必檢指標。鑒定報告可參考亞慢性經(jīng)口毒性試驗。亞慢性經(jīng)口毒性試驗Subchronic Oral Toxicity Test1 范圍本規(guī)范規(guī)定了嚙齒類動物亞慢性經(jīng)口毒性試驗的基本原則、要求和方法。本規(guī)范適用于檢測化學品的亞慢性經(jīng)口毒性。2 規(guī)范性引用文件OECD Guidelines for Testing of Chemicals (NO. 408, November 1998) USEPA OPPTES Health Effects Test Guideline

19、s (Series 870.3150 June 1996)3 試驗目的確定一定時期內(nèi)經(jīng)口反復接觸受試化學物引起的毒性效應，了解受試樣品毒作用的靶器官，取得受試樣品亞慢性經(jīng)口的最大無作用劑量，為確定慢性毒性試驗的劑量和初步計算人群接觸的安全水平提供依據(jù)。4 定義4.1 亞慢性經(jīng)口毒性（Subchronic Oral Toxicity）：是指實驗動物在其部分生存期（不超過10%壽命期）內(nèi)，每日反復經(jīng)口接觸受試樣品后所引起的健康損害效應。無可見有害作用水平（No Observed Adverse Effect Level，NOAEL）：在規(guī)定的試驗條件下，用現(xiàn)有的技術手段或檢測指標未觀察到任何與受試

20、樣品有關的毒性作用的最大染毒劑量。4.3最低可見有害作用水平（Lowest Observed Adverse Effect Level，LOAEL）：在規(guī)定的試驗條件下，受試樣品引起實驗動物形態(tài)、功能、生長發(fā)育等發(fā)生有害改變的最低染毒劑量。4.4 靶器官(Target Organ)：實驗動物出現(xiàn)由受試樣品引起的明顯毒性作用的任何器官。5 試驗基本原則各組實驗動物每日經(jīng)口攝入不同劑量的受試樣品，連續(xù)染毒3個月（90d），有時候可根據(jù)需要染毒6個月（180d），染毒期間每日觀察動物的毒性反應。在染毒期間死亡的動物要進行尸檢。染毒結束后所有存活的動物均要處死、剖驗以及作適當?shù)牟±斫M織學檢查。6 試驗

21、方法6.1 受試樣品 在開始本試驗之前，應盡量搜集受試樣品現(xiàn)有的各種資料。 受試樣品的商品名和其他名稱（包括CAS號）。 受試樣品的結構式、分子式和分子量。 受試樣品的理化性質(zhì)(可包括：外觀、沸點、熔點、折射率、密度、光譜資料、溶解度、揮發(fā)性、化學活性、光化學性質(zhì)、電離度、粒度、密度等)。重要的參數(shù)還包括穩(wěn)定性（包括在賦形劑或飼料中）。 受試樣品的分析方法。 受試樣品的生產(chǎn)方法、合成路線和雜質(zhì)。 儲存方法要有長期儲存受試樣品（包括在賦形劑或飼料中）的合適方法。否則需定期制備新鮮樣品。 人類每日可能接觸的水平 接受樣品的日期應登記。開始試驗前應有適當數(shù)量的受試樣品。樣品來源和批號應相同，盡可能使

22、用同一批生產(chǎn)的受試樣品，否則，每一批受試樣品的純度和雜質(zhì)要分別測定。6.2 實驗動物和飼養(yǎng)環(huán)境實驗動物常規(guī)選擇嚙齒類動物，首選大鼠。動物斷奶后盡早進行試驗，盡量使動物在其體重快速增長期有更長的時間接觸受試樣品。大鼠6周齡最好，不可超過8周齡（體重80120g，但動物體重的變動范圍按性別不應超出平均體重的20%）。染毒開始前至少要有5d時間使實驗動物適應清潔級動物房飼養(yǎng)環(huán)境，并在這段時間內(nèi)觀察實驗動物的狀態(tài)。6.2.2 環(huán)境設施 實驗動物和動物試驗的環(huán)境設施應符合國家相應規(guī)定。選用常規(guī)飼料，飲水不限制。動物可分性別群飼或單籠飼養(yǎng)，群飼時每籠不超過5只。 動物的性別和數(shù)量實驗動物隨機分組，每組至少

23、20只，雌雄各半。但是考慮到亞慢性試驗的重要性，應適當增加每組雌雄動物數(shù)。若計劃在試驗過程中處死動物，需增加計劃處死的動物數(shù)。試驗結束時的動物數(shù)需達到能夠有效評價受試樣品毒性作用的數(shù)量。6.3 劑量設計 試驗一般設三個染毒組和一個對照組。對照組動物不接觸受試樣品，其它條件均與染毒組相同。最高染毒劑量應使動物產(chǎn)生較明顯的毒性效應,但不引起過多動物死亡(死亡率不應超過10%)，以免影響結果評價。低劑量組應不出現(xiàn)任何毒性作用。若掌握人群接觸水平，則最低染毒劑量應高于人群的實際接觸水平。如劑量設計得當，中劑量組可出現(xiàn)較輕的毒性效應，若設多個中劑量組時，應產(chǎn)生不同程度的毒性效應。此外，可另設一附加組作追

24、蹤觀察，選用20只動物(雌雄各半)，給予最高劑量受試樣品，染毒90d，在全程染毒結束后繼續(xù)觀察一段時間(一般不少于28d)，以了解毒性作用的持續(xù)性、可逆性或遲發(fā)毒作用；也可在試驗設計時每組增加一定的動物數(shù)，試驗結束時每組剖殺部分動物（數(shù)量應滿足統(tǒng)計分析），部分動物繼續(xù)作追蹤觀察。若為染毒目的加入其它溶劑等賦形劑，這些賦形劑不應影響受試樣品的吸收或引起毒性作用，必要時應設相應的賦形劑對照組。 如果受試樣品的毒性較低，則加入飼料的受試樣品比例較大，應注意混入飼料中的受試樣品不應超過5%，否則會對動物正常營養(yǎng)產(chǎn)生影響。必要時應定期監(jiān)測飼料或飲水中的受試樣品濃度，觀察其均勻性和穩(wěn)定性。若采用灌胃方式染

25、毒，則每日染毒時點應相同，并定期 (每周)按體重調(diào)整灌胃量，維持染毒劑量不變。其它的染毒方式要加以特殊說明。6.4 染毒方法 常用的方法是將受試樣品混入飼料或飲水中，每周7d染毒。若受試樣品引起飼料和飲水的適口性不良，影響動物正常攝入量，或由于某種原因，受試樣品不能加入飼料和飲水中，可采用灌胃法或藥囊法，此時每周可染毒57d。試驗期間各組動物染毒的方式應完全相同。6.5 限量試驗 在試驗中，如果劑量預期達每天1000 mg/kg或以上時仍未產(chǎn)生可觀測到的毒性效應（但人類接觸水平的資料表明需用高劑量進行試驗），而且根據(jù)相關結構化合物可以預測受試樣品毒性時，可不必設三個劑量水平進行試驗。6.6 臨

26、床觀察 試驗期內(nèi)每天至少觀察一次，必要時增加觀察次數(shù)。對附加組還要增加至少28d。 觀察期間對動物的任何毒性表現(xiàn)均應記錄，記錄內(nèi)容包括發(fā)生時間、程度和持續(xù)時間。觀察應至少包括如下內(nèi)容：皮膚和被毛、眼和粘膜、呼吸、循環(huán)、植物神經(jīng)和中樞神經(jīng)系統(tǒng)、肢體運動和行為活動等改變。對死亡動物應進行解剖，對質(zhì)弱或瀕死動物應隔離或處死和解剖。記錄每周飼料消耗量，經(jīng)飲水染毒時還應記錄每天飲水消耗量，記錄每周體重變化。試驗結束時處死動物作相關檢查。6.7 臨床檢查 眼科檢查 建議在動物染毒前和染毒后，最好對所有實驗動物，至少應對最高劑量組和對照組動物，使用眼科鏡或其它有關設備進行眼科檢查。若發(fā)現(xiàn)動物有眼科變化則應對

27、所有動物進行檢查。6. 血常規(guī)檢查和其它血液指標檢查 至少應在染毒結束時進行，必要時應在染毒中期也進行檢查。如設立附加組，染毒結束時如有異常的指標，附加組追蹤觀察結束時應進行檢查。測定指標至少應包括血球壓積、血紅蛋白濃度、紅細胞數(shù)、血小板數(shù)、白細胞總數(shù)和分類，必要時測定網(wǎng)織紅細胞數(shù)、凝血功能等指標。6. 血液生化檢查 至少應在染毒結束時進行，必要時應在染毒中期也進行檢查。染毒結束時如有異常的指標，附加組追蹤觀察結束時應進行檢查。檢查指標包括肝功能、腎功能、電解質(zhì)平衡、碳水化合物代謝等。測定指標至少應包括丙氨酸氨基轉移酶（ALT）、天門冬氨酸氨基轉移酶（AST）、堿性磷酸酶（ALP）、乳酸脫氫酶

28、（LDH）、尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)、總膽紅素（TBIL）、白蛋白（ALB）、總蛋白(TP)等，還應根據(jù)受試樣品可能的毒作用表現(xiàn)補充如下指標：如鳥氨酸脫羧酶、-谷氨酰轉肽酶、總膽固醇、甘油三酯、正鐵血紅蛋白、膽堿酯酶、鈣、磷、氯、鈉、鉀、血糖等。此外，還可根據(jù)所觀察到的毒性作用進行其它更大范圍的臨床生化檢查，以便進行全面的毒性評價。 尿液檢查一般不需要進行，只有當懷疑存在或觀察到相關毒性作用時才進行尿液檢查。6.8 病理檢查 大體解剖 所有動物均應進行全面的大體解剖，內(nèi)容包括動物的外觀、體腔開口處、胸腔、腹腔等。肝、腎、腎上腺和睪丸等器官應在分離后盡快稱重以防水分丟失。應將主要組織器官保

29、存在固定液中，以備日后進行病理組織學檢查。 臟器稱重 心、肝、脾、肺、腎、腦、睪丸的絕對重量和相對重量（臟器系數(shù)=臟器重量/體重100%）為必測指標，必要時加測其它臟器重量和臟器系數(shù)。 病理組織學檢查通常至少應包括心、肝、脾、腎、胃、大腦、肺、睪丸（卵巢）、附睪、腎上腺等。根據(jù)需要，還可包括腦橋、小腦和大腦皮層、腦垂體、主動脈、氣管、胰、十二指腸、空腸、回腸、結腸、直腸、膀胱、甲狀腺（包括甲狀旁腺）、胸腺、前列腺、子宮、乳腺、皮膚、肌肉、胸骨(包括骨髓)、淋巴結、眼球等。如果毒性作用提示或作為被研究的靶器官時還可選擇檢查唾液腺、生殖附屬器官、皮膚、眼、股骨(包括關節(jié)面)、脊髓(包括頸部、胸部、

30、腰部)、淚腺、雌性乳腺、大腿肌肉等。要先對高劑量組和對照組動物及系統(tǒng)解剖時發(fā)現(xiàn)的異常組織作詳盡的組織學檢查，其他劑量組一般僅在高劑量組有異常發(fā)現(xiàn)時才進行組織學檢查。在附加組，應對那些在染毒組呈現(xiàn)毒性作用的組織和器官進行檢查。中、低劑量組動物也需做肺的病理組織學檢查，肺部感染情況可判斷動物的健康狀況。必要時肝、腎也做同樣的檢查。6.9 結果統(tǒng)計與評價 結果的處理 可通過表格形式總結試驗結果，顯示試驗開始時各組動物數(shù)、出現(xiàn)毒性反應的動物數(shù)、毒性反應的類型和動物出現(xiàn)毒性反應的百分比。對所有數(shù)據(jù)應采用適當?shù)慕y(tǒng)計學方法進行評價。 試驗結果的評價 亞慢性經(jīng)口毒性試驗結果應結合前期試驗結果，并考慮到毒性效應

31、指標和解剖及病理組織學檢查結果進行綜合評價。毒性評價應包括受試樣品染毒劑量是否出現(xiàn)毒性反應、毒性反應的發(fā)生率及其程度之間的關系。這些反應包括行為或臨床異常、肉眼可見的損傷、靶器官、體重變化情況、死亡效應以及其它一般或特殊的毒性作用。成功的亞慢性試驗應能夠提出統(tǒng)計學上有意義的無可見有害作用水平（NOAEL）。7 鑒定報告除一般鑒定報告的內(nèi)容外，還應包括以下方面：7.1 試驗方法；7.2 按性別和劑量的毒性反應數(shù)據(jù)；7.3 試驗期內(nèi)動物死亡的數(shù)量和時間；7.4 毒性作用或其它作用；7.5 每種異常癥狀出現(xiàn)的時間及其轉歸情況；7.6 動物體重資料、食物攝入量和/或飲水量資料；7.7 眼科檢查結果7.

32、8 血液學檢查結果；7.9 臨床生化檢查結果；7.10 大體解剖所見；7.11 病理組織學檢查所見的詳細描述；7.12 對結果進行處理的統(tǒng)計學方法；7.13 確定無可見有害作用水平（NOAEL）；7.14 結論。8 試驗結果的解釋亞慢性經(jīng)口毒性試驗能夠提供受試樣品在經(jīng)口反復接觸時的毒性作用資料。雖然其試驗結果僅能有限地外推到人，但它可為確定人群暴露的無作用水平和允許暴露水平提供有價值的信息。致畸試驗Teratogenicity Test1 范圍本規(guī)范規(guī)定了動物致畸試驗的基本原則、要求和方法。本規(guī)范適用于檢測化學品的致畸性。2 規(guī)范性引用文件OECD Guideline for Testing

33、of Chemicals (No.414, May 1981)USEPA OPPTS Helth Effect Test Guideline (Series 870.3700,June 1996)3 試驗目的檢測妊娠動物接觸化學品后引起胎仔畸形的可能性。4 定義4.1致畸性（Teratogenicity）：在胚胎發(fā)育期引起胎鼠永久性結構和功能異常的化學物質(zhì)特性。4.2 母體毒性（Maternal Toxicity）：引起親代雌性妊娠動物直接或間接的健康損害效應。4.3 發(fā)育毒性(Developmental Toxicity)：指接觸受試樣品的妊娠動物的子代在出生以前、圍產(chǎn)期和出生以后所顯現(xiàn)出的

34、機體缺陷或功能障礙。5 試驗基本原則試驗應設多個劑量組。選擇處于胚胎發(fā)育器官形成期的妊娠動物進行染毒，并在胎鼠出生前將妊娠動物處死，取出子宮，檢查其吸收胎、死胎、活胎及胎仔的骨骼和內(nèi)臟畸形的情況。6 試驗方法6.1 實驗動物首選健康、剛進入性成熟期、未經(jīng)交配的雌性大鼠和家兔，按雌雄動物比例2:1或1:1交配。試驗前的適應期至少為5d。為了獲得足夠的胎仔數(shù)，正確地評價受試樣品致畸的可能性。對于大鼠，每個劑量組和對照組至少應有15只妊娠動物，家兔至少為12只。6.2 劑量設計試驗至少設三個劑量組、一個陰性對照組和一個陽性對照組。陽性對照物可選用敵枯雙或維生素A。若近期內(nèi)（一年之內(nèi)）已從本試驗中獲得

35、了陽性對照結果，可不設陽性對照組。對照組動物除了不給予受試樣品外，其余的處理應與劑量組完全相同。試驗可以先采用預試驗，了解受試樣品引起胚胎或胎仔死亡的劑量。在受試樣品理化和生物特性允許的條件下，最高劑量應使母體出現(xiàn)明顯的毒性反應，如輕微的體重下降，但不能引起超過10的母體死亡；低劑量應不引起動物任何可觀察到的毒性反應；在低劑量和高劑量之間可按幾何級數(shù)設置中間劑量。如果受試樣品的毒性較低，1000mg/kg體重的劑量對胚胎無明顯毒性或致畸作用，則可以采用限量試驗，即試驗不需要設其它劑量組。若高劑量的預試驗對母體確有一定的毒性作用，但對胚胎無不良影響，也可以采用限量試驗。6.3 試驗方法 染毒途徑

36、通常為經(jīng)口灌胃，也可以采用其它與人的接觸方式相同的給樣方式。每天的染毒應在同一時間進行。如果受試樣品是通過灌胃給樣的,應按每只母體動物的體重來確定每日的給樣量。 交配及染毒期限 雄性和雌性動物按1:1或1:2的比例合籠交配。每天早晨應對雌鼠進行檢查，查看陰道中是否有精子或陰栓。將檢查到精子或陰栓的當天計為雌鼠妊娠的第0d。將妊娠動物隨機分組后，于胚胎器官的形成期開始染毒（大鼠為孕后615d，家兔為孕后618d），每天一次。 觀察期限及指標.1 每日至少對妊娠動物進行一次仔細的臨床觀察。發(fā)現(xiàn)虛弱或瀕死的動物，應進行隔離或處死，對死亡的動物應進行尸檢。如母體有流產(chǎn)、早產(chǎn)癥狀者也應處死并作大體檢查。

37、.2 每日稱取妊娠動物體重，每周記錄食物攝入，并觀察其臨床癥狀，包括皮膚、毛、眼睛、粘膜、呼吸系統(tǒng)、循環(huán)系統(tǒng)、神經(jīng)系統(tǒng)、四肢活動和行為方式的改變。.3 及時記錄任何毒性反應，包括出現(xiàn)的時間、程度和持續(xù)的時間。 觀察指標為了避免自然分娩后新生幼仔被咬死或咬傷，于分娩前一天處死妊娠動物（大鼠為妊娠第20d，小鼠為妊娠第18d，家兔為妊娠后29d），立即進行解剖檢查。.1 取出子宮，分別稱取子宮、胎盤和活胎的重量，記錄黃體數(shù)、著床數(shù)、活胎數(shù)、死胎數(shù)及吸收胎數(shù)（大鼠和家兔）。.2 外觀檢查：逐一記錄活胎仔的身長和尾長。檢查外觀有無異常，如頭部：無腦、腦膨出、露腦、頭蓋裂、腦積水、小頭、顏面裂、小眼、無

38、眼、眼球突出、無耳、小耳、耳位低、無顎、小顎、下顎、兔唇和下頜裂；軀干部：胸骨裂、胸部裂、脊椎裂、脊椎側彎、脊椎前彎、脊椎后彎、臍疝、尿道下裂、無肛門、短尾、卷尾、無尾和腹裂；四肢：多肢、無肢、短肢、半肢、多趾、無趾、并趾、短趾和缺趾。胎鼠畸形檢查方法見附錄3-A。.3 骨骼檢查：將每窩1/2的胎仔放入茜素紅液(配制方法見附錄3-B)中染色，進行骨骼檢查。測量囟門大小，矢狀縫的寬度，頭頂間骨及后頭骨缺損情況，然后檢查脊柱骨的數(shù)目、融合、縱裂、部分裂開、骨化中心數(shù)、發(fā)育不全、縮窄、脫離和形狀；骨盆的弓數(shù)目、骨化中心數(shù)、形狀異常、融合、裂開、縮窄和脫離；四肢骨的形狀和數(shù)目；腕骨的骨化中心數(shù)；掌骨、

39、趾骨的形狀；肋骨的數(shù)目、形狀、融合、分叉、缺損和發(fā)育不全；胸骨的形狀、完全缺失、胸骨節(jié)融合、裂開、形狀異常和發(fā)育不良等情況。.4 臟器檢查：將每窩另一半的胎仔放入Bouins液(配制方法見附錄3-C)中，固定兩周后作臟器和及軟組織檢查。檢查有無異常，如頭部：嗅球發(fā)育不良、側腦室擴張、第三腦室擴張、角膜缺損等；胸部：右心位、房中隔缺損、室間隔缺損、主動脈弓、食道閉鎖、氣管狹窄、無肺、多肺、肺葉融合、膈疝、氣管食管瘺和內(nèi)臟異位等；腹部：肝分葉異常、腎上腺缺失、多囊腎、膀胱缺失、睪丸缺失、陰睪、卵巢缺失、卵巢異位、子宮缺失、子宮發(fā)育不全、腎積水、腎缺失和輸尿管積水等。對于家兔每個胎仔都應解剖進行臟器

40、檢查和骨骼檢查。6.4 試驗結果 數(shù)據(jù)處理數(shù)據(jù)可以用統(tǒng)一的表格進行統(tǒng)計，表中應顯示每組的實驗動物數(shù)、平均體重、受孕動物數(shù)、黃體數(shù)、著床數(shù)、吸收胎數(shù)、活胎數(shù)、死胎數(shù)及其百分率、胎仔的情況（體重、胎盤重、體長、尾長）、畸胎的類型（包括外觀、骨骼和內(nèi)臟）、數(shù)目及百分率。數(shù)據(jù)可采用任何一種適當?shù)慕y(tǒng)計方法進行處理。應將各劑量組的指標相應地與對照組進行顯著性檢驗。其中，以畸胎率最為重要，主要有以下兩種：（凡每一活胎出現(xiàn)一種以上畸形時，均作一個畸胎計）。當出現(xiàn)的畸胎是以某一種或某幾種畸形為主時，就應按畸形種類單獨計算該畸形率。如果某劑量組的總畸胎率或某單項畸胎率與對照組相比明顯增高，且差異有顯著性，可表明該

41、劑量有致畸作用。致畸指數(shù)雌性動物LD50/最小致畸劑量 結果評價6.1 評價時應結合所用動物品系的歷史性的資料，包括自發(fā)畸變種類和頻率進行。.2 試驗結果應能得出受試樣品是否有母體或胚胎毒性、致畸性，最好能得出無致畸劑量和最小致畸劑量。以最小致畸劑量求得致畸指數(shù)，表示致畸強度。致畸指數(shù)小于10為基本無致畸危害；致畸指數(shù)10100為有致畸危害；致畸指數(shù)大于100為強致畸危害。7 鑒定報告鑒定報告除總則中規(guī)定的一般項目外,還應包括以下內(nèi)容：7.1 給予受試樣品的方法和期限；7.2 孕鼠體重增長和妊娠情況；7.3 受孕動物數(shù)、黃體數(shù)、著床數(shù)、吸收胎數(shù)、活胎數(shù)、死胎數(shù)及其百分率；7.4 胎仔的情況（體

42、重、胎盤重、體長、尾長）、畸胎的類型（包括外觀、骨骼和內(nèi)臟）、數(shù)目及百分率。8 試驗結果的解釋解釋致畸試驗結果時，必須注意種屬的差異。試驗結果從動物外推到人存在著一定的局限性。附錄3-A 胎鼠畸形檢查方法1. 胎鼠外觀檢查：對每只胎鼠先經(jīng)肉眼檢查，如果肉眼不能確定某種畸形時， 將胎鼠放在解剖顯微鏡下進一步確定并照象，胎鼠的檢查順序如下：2. 胎鼠的頭部檢查：有無露腦(無頭蓋骨)， 腦膜膨出， 頭部大小(大頭可能腦積水、小頭為頭部發(fā)育不良)。眼睛的有無， 眼所在部位，大小(小眼或大眼)， 突眼或開眼等。兩耳、鼻和嘴外表是否正常和對稱，上下頜有無唇裂。3. 四肢的檢查：四肢有無多趾(指)、并趾、少

43、趾、無趾、足內(nèi)外翻、短肢等畸形。4.軀干的檢查：有無臍疝、腹裂(內(nèi)臟膨出)， 脊髓膨出、脊柱裂、脊柱側突等。5. 尾部檢查：有無短尾、卷尾、無尾和尾分叉等。6. 標本的制作：將每窩1/2胎鼠放入Bouins液固定，作為內(nèi)臟檢查，另1/2放入95 %酒精中固定作為骨骼檢查。7. 骨骼標本的制備：胎鼠放入1 % KOH溶液中軟化至能很清楚地看見骨骼為止， 必要時中間可更換1次KOH溶液。8. 骨骼染色：將骨骼標本放入茜素紅應用液中染色16h， 直至全部骨骼染成紫紅色為止， 中間可更換一次染液。9. 骨骼透明：染好色以后， 用自來水沖凈標本， 倒掉染液， 將標本置于50 %甘油中脫色35天。10.骨

44、骼檢查：10.1 頭骨檢查：顱骨是否完整，有無骨化不全，骨縫的寬窄，枕骨的形狀。胎鼠上枕骨骨化程度的分級標準如下：0 級：上枕骨成片狀或啞玲狀， 兩側骨化點完全融合， 融合處寬度大于兩側的1/3。級：上枕骨兩側骨化點相連， 相連處寬度小于兩側的1/3。級：上枕骨兩側骨化點不相連， 但可清楚地見到兩個較大的骨化點。級：上枕骨兩側的骨化點不相連， 僅見小骨化點或僅見一側骨化點。級：無上枕骨骨化點。10.2 胸部骨骼：正常胸骨為6塊， 畸形時可有骨骼錯位及骨化不全，注意觀察第2和5胸骨。小鼠正常肋骨為13對， 觀察有無多肋、少肋、肋骨分叉、融合、波狀肋等畸形。10.3 四肢骨：檢查骨化程度、長短粗細

45、、指趾骨的發(fā)育狀況。11. 胎鼠內(nèi)臟徒手切片檢查： 將胎鼠從Bouins液中取出， 自來水沖凈。測量每只胎鼠身長及尾長。12. 頭部切片：將胎鼠放在蠟板或木板上， 第1刀由嘴開始經(jīng)兩耳切開， 暴露舌、腭、上唇和下頜， 檢查舌有無異常， 有無腭、唇裂。將頭翻過來前背向上， 切剩下的切片。第2刀從眼睛前面切下， 暴露鼻中隔、鼻竇， 記錄鼻腔是否通。第3刀平眼切下， 暴露腦鼻葉， 鼻中隔后區(qū)的大部分及鼻咽腔、眼組織、視網(wǎng)膜、玻璃體、晶狀體和角膜， 檢查這些組織結構有無異常。第4刀從眼后切開， 暴露大腦半球和側腦室， 并注意有無畸形和擴張。第5刀橫切大腦半球， 暴露間腦的第腦室、側腦室、脈絡膜等檢查這

46、些部位有無異常。13. 內(nèi)臟切片檢查：沿胸腹壁中線和肋下沿水平線各切一刀， 暴露胸腔與腹腔內(nèi)臟， 檢查各臟器有無異常。14. 統(tǒng)計：應用SPSS統(tǒng)計學軟件對數(shù)據(jù)進行分析處理。各組母鼠平均體重， 胎鼠體重、身長、尾長， 計量資料以均數(shù)標準差（）表示，數(shù)據(jù)采用F-檢驗進行顯著性分析。活胎、死胎、畸形、吸收胎等計數(shù)資料用百分率表示，數(shù)據(jù)采用X2檢驗進行顯著性分析。錄入計算機的數(shù)據(jù)備份軟盤并打印?；钐ヂ剩?）活胎數(shù)胎鼠數(shù)100%死胎率（%）死胎數(shù)胎鼠數(shù)100%吸收胎率（%）吸收胎數(shù)著床數(shù)100%畸形率（%）畸形仔鼠數(shù)受檢胎鼠數(shù)100%孕鼠體重凈增長解剖前體重-受孕第6d體重-子宮連胎重附錄3-B茜素紅

47、液配制方法冰醋酸 5ml純甘油 10ml1%水合氯醛 60ml 臨用時用1% KOH稀釋成1的應用液。附錄3-CBouins 液配制方法苦味酸飽和液 75ml甲醛 25ml冰醋酸 5ml 混合使用。兩代繁殖毒性試驗Two-Generation Reproduction Toxicity Study1 范圍本規(guī)范規(guī)定了動物兩代繁殖毒性試驗的基本原則、要求和方法。本規(guī)范適用于檢測化學品的繁殖毒性。2 規(guī)范性引用文件OECD Guideline for Testing of Chemicals (No.416, May 1981)USEPA OPPTS Helth Effect Test Guide

48、line (Series 870.3700,June 1996)3 試驗目的提供關于受試樣品對雌性和雄性動物繁殖功能影響的一般性資料：如性腺功能、交配行為、受孕、分娩、哺乳、斷乳以及子代的生長發(fā)育情況等。同時也可在子代生長發(fā)育毒性（新生仔缺陷、死亡和畸形等）方面取得初步資料，為其它有關毒性試驗提供參考。4 定義4.1 生殖毒性（Reproductive Toxicity）：指由化學品引起的親代雌性或雄性生殖功能的損傷或生殖能力的降低，如繁殖率的下降；或引起子代的非遺傳性不良效應，如生長發(fā)育，包括致畸性和哺乳期中的健康損害效應。4.2 繁殖力的損害(Impairment of Fertility

49、)：表現(xiàn)為雌性或雄性動物生殖功能或能力的障礙。4.3 發(fā)育毒性(Developmental Toxicity)：指接觸受試樣品的妊娠動物的子代在出生以前、圍產(chǎn)期和出生以后所顯現(xiàn)出的機體缺陷或功能障礙。5 試驗基本原則試驗應設多個劑量組。選擇生長期中的雌雄動物進行試驗。染毒期限親代雄性動物至少為一個完整的精子發(fā)生期（大鼠大約為56d），親代雌性動物至少為兩個完整的發(fā)情周期及交配期、妊娠和哺乳期。F1子代斷乳后開始染毒，直到交配結束（雄性F1子代）以及對F2子代哺乳結束后（雌性F1子代）。6 試驗方法6.1 實驗動物 首選健康初成年的大鼠或小鼠。避免選用繁殖率低的品系。所選動物應注明種類、品系、性

50、別、體重和（或）周齡。 性別和試驗開始時的年齡為了正確地評價化學品對動物生殖能力的影響，兩種性別的動物都應使用。最常使用78周齡，至少經(jīng)過5d適應期的動物來進行繁殖毒性試驗。雌性動物必須是未經(jīng)產(chǎn)仔的。 動物數(shù)為了獲得足夠的試驗數(shù)據(jù)，正確地評價受試樣品對兩代動物繁殖過程（包括親代動物繁殖、妊娠和哺育的過程，F(xiàn)1子代從出生到成熟過程中的吸乳、生長發(fā)育情況，以及F2子代從出生到斷乳的生長發(fā)育過程）可能引起的健康損害效應。雄性和雌性動物通常按1:1或1:2的比例合籠交配。交配的動物數(shù)應保證每個劑量組及對照組都能獲得20只左右的孕鼠。 本實驗動物采用自由飲食。孕鼠臨近分娩時，應單籠飼養(yǎng)在分娩籠中，需要時

51、籠中放置造窩墊料。6.2 劑量設計試驗至少設三個劑量組和一個對照組。應考慮受試樣品特性（如生物代謝和生物蓄積特性）的影響作用。在受試樣品理化和生物特性允許的條件下，最高劑量應使親代動物出現(xiàn)明顯的毒性反應，但不引起動物死亡；中間劑量可引起輕微的毒性反應；低劑量應不引起親代及其子代動物的任何毒性反應。如果受試樣品的毒性較低，1000mg/kg bw的劑量仍未對繁殖過程有任何毒副作用，則可以采用限量試驗，即試驗不需要設其它劑量組。若高劑量的預試驗觀察到明顯的母體毒性作用，但對生育無影響，也可以采用限量試驗。6.3 試驗方法 染毒途徑及方法首選飼料摻入法,也可用飲水給予或其它適當?shù)姆椒ńo藥。每周應按7

52、d進行給樣。整個試驗過程中所有的動物必須采用相同的給樣方式。若使用除水外的其它溶劑或賦形劑時，這些物質(zhì)應不會引起任何毒副作用,并應設立對照。如果染毒的途徑為吸入染毒，參照有關亞慢性吸入毒性試驗。對于妊娠期的母鼠，給樣量應按妊娠的第0d或第6d的體重分兩階段計算染毒量。 給樣期限及繁殖程序（以大鼠為例）試驗周期親代（P）子一代（F1）子二代(F2)第1第8周末給予受試樣品第9第11周末交配（給樣），結束后處死雄性鼠第12第14周末妊娠（給樣）出生，調(diào)整每窩只留8只動物第15第17周末哺乳（給樣），結束后處死母乳喂養(yǎng)第18周基礎飼料喂養(yǎng)第19第26周末給予受試樣品第27第29周末交配（給樣），結束

53、后處死雄性鼠第30第32周末妊娠（給樣）出生，調(diào)整每窩只留8只動物第33第35周末哺乳（給樣），結束后處死斷乳后處死 交配方法及妊娠檢查雄性和雌性動物按1:1或1:2的比例進行交配。以1:1的交配方式為例，雌鼠應始終與同劑量組的同一只，但不是同窩所生的雄鼠合籠直至受孕，合籠最長時間可為3 w。在交配過程中，每天早晨應對雌鼠進行檢查，查看有無陰栓或陰道中是否有精子。將檢查到精子或陰栓的當天計為雌鼠妊娠的第0d(判為交配成功動物)。大鼠F1子代至少應長到9 w后（小鼠11 w）才能進行交配。交配時，從F1子代每窩中隨機選擇雌雄各一只，與同劑量組中不同窩的動物以1:1的比例交叉配對，繁殖F2子代。未

54、被選作交配的F1子代在斷乳后予以處死。若交配三周后仍未受孕，應對不育的動物進行檢查，分析其原因。可以將不育的動物與證實過生育功能正常的動物重新配對，需要時也可進行生殖器官的病理組織學、發(fā)情周期和精子發(fā)生周期的檢查。 每窩新生幼鼠數(shù)量的調(diào)整F1代出生后的第4d，應將仔鼠數(shù)盡量隨機調(diào)整到每窩4雌和4雄。若得不到4雌和4雄時可作不均等的調(diào)整（如5雄3雌）。每窩的幼仔數(shù)小于8只時，就不需要進行調(diào)整。F2子代按同樣的方法進行調(diào)整。6.4 觀察及檢查 每日至少對動物進行一次仔細的觀察。記錄有無行為改變，難產(chǎn)或滯產(chǎn)以及所有的毒性反應（包括死亡）。 在交配前和交配期，應計算每周的食物攝入量，在妊娠中可考慮逐日

55、記錄。產(chǎn)仔后，每窩仔鼠需要稱量體重時，母鼠的食物攝入量也應同時計算。 參與繁殖的動物（親代和F1子代）應在給樣的第一天進行稱重，以后每周稱量體重一次。數(shù)據(jù)應逐只進行記錄。.1 交配結束時,采集親代雄鼠附睪的精子,顯微鏡下計數(shù)200個精子,觀察其活動性、形狀及數(shù)量。 妊娠周期應該從懷孕的第0d開始計算。生產(chǎn)下的仔鼠應盡早分辨性別，記錄每窩的出生數(shù)、活仔數(shù)以及幼仔外觀有無異常和畸形。同時記錄母鼠或仔鼠在生理上和行為上的異常表現(xiàn)。 以每窩為單位，對仔鼠于出生的當天上午、第4d、第7d、第14d和第21d進行稱重。 大體解剖檢查死亡和到期處死的親代和成年的F1子代動物都應解剖進行大體檢查，肉眼觀察有無

56、組織器官形態(tài)上的改變，特別是生殖器官。死亡或瀕臨死亡的仔鼠也應接受檢查，查看是否有外觀或器官形態(tài)的缺陷。 病理組織學檢查保留上述剖檢的所有親代和F1子代動物的卵巢、子宮、子宮頸、陰道、睪丸、附睪、精囊、前列腺、腦下垂體和靶器官標本。先對最高劑量組和對照組的動物標本以及剖檢中發(fā)現(xiàn)異常的標本進行組織病理學檢查。如最高劑量組沒有發(fā)現(xiàn)有意義的病變，其它劑量組的標本可不必再進行病理檢查。反之，若最高劑量組發(fā)現(xiàn)有意義的病理改變，則其它劑量組相關的標本也應作進一步的檢查。6.5 結果統(tǒng)計與評價 繁殖指數(shù)交配成功率（）=（交配成功動物數(shù)/用于交配的雌性動物數(shù)）100受孕率（）=（受孕動物數(shù)/用于交配的雌性動物

57、數(shù)）100活產(chǎn)率（）=（產(chǎn)生活仔的雌性動物數(shù)/受孕動物數(shù)）100出生存活率（）=（出生后4d幼仔存活數(shù)/出生當時存活仔數(shù)）100哺育成活率（）=（21d斷奶時幼仔成活數(shù)/出生后4d幼仔存活數(shù)）100 數(shù)據(jù)處理數(shù)據(jù)可以用表格進行統(tǒng)計，表中應顯示每組的實驗動物數(shù)、交配的雄性動物數(shù)、受孕的雌性動物數(shù)、各種毒性反應及其出現(xiàn)動物百分數(shù)。數(shù)據(jù)應進行統(tǒng)計分析，可采用任何一種適當?shù)慕y(tǒng)計方法進行處理。 結果評價逐一比較劑量組動物與對照組動物繁殖指數(shù)是否有顯著性差異，以評定受試樣品有無繁殖毒性，同時還可根據(jù)統(tǒng)計學差異出現(xiàn)在哪個指標上（如體重，觀察指標、大體解剖和病理組織學檢查結果等），進一步評價繁殖毒性的損害作用

58、特點。7 鑒定報告鑒定報告除總則中規(guī)定的一般項目外,還應包括以下內(nèi)容：7.1 親代和成年F1子代動物的食物攝入量和體重資料；7.2 按性別和劑量組分別記錄的毒性反應，包括繁殖、妊娠和發(fā)育能力的異常7.3 每窩仔鼠的體重和仔鼠的平均體重，以及試驗后期單個仔鼠的重量；7.4 任何有關繁殖，子鼠及其生長發(fā)育的毒性和其它健康損害效應；7.5 觀察到的各種異常癥狀的出現(xiàn)時間和持續(xù)過程。8 試驗結果的解釋本試驗可反映動物在多次接觸某一受試樣品后對繁殖功能所產(chǎn)生的影響。在分析結果時，應將其與亞慢性試驗，致畸試驗以及其它試驗的結果相結合，進行綜合分析。試驗結果能提供無作用劑量水平和人體安全接觸水平，但試驗結果

59、外推到人仍存在著一定的局限性。遲發(fā)性神經(jīng)毒性試驗Delayed Neurotoxicity Test (Organophosphorus Substances)1 范圍本規(guī)范適用于有機磷化合物的遲發(fā)性神經(jīng)毒性測定。若某些受試樣品的化學結構式與遲發(fā)性神經(jīng)毒性陽性物質(zhì)相似，也需進行此項試驗。試驗分為急性和亞急性遲發(fā)性神經(jīng)毒性試驗。2 規(guī)范引用文件OECD Guideline for Testing of Chemicals (No. 418 、419,May 1981)USEPA OPPTS Health Effects Test Guidelines (Series 870.6100, June

60、 1996)3 試驗目的 檢測和評價受試樣品是否具有遲發(fā)性神經(jīng)毒性作用。遲發(fā)性神經(jīng)毒性作用主要表現(xiàn)為運動性共濟失調(diào)和癱瘓，在組織病理學上神經(jīng)組織呈脫髓鞘變化。4 定義4.1 有機磷引起的遲發(fā)性神經(jīng)毒性（Organophosphorus Induced Delayed Neurotoxicity ,OPIDN）是一種神經(jīng)綜合征，主要的臨床癥狀為四肢無力、上位運動神經(jīng)元損傷性痙攣。其相關的病理學癥狀是周圍神經(jīng)和脊髓遠端軸突病。其有關的生化作用是神經(jīng)組織中的神經(jīng)病靶酯酶（Neuropathy Target Esterase, NTE）抑制和老化。暴露引起的NTE抑制和隨后的老化，其臨床體征和病理改變