性病實驗室診斷標(biāo)及應(yīng)用教學(xué)課件

1、性傳播疾病實驗室診斷標(biāo)準(zhǔn)及應(yīng)用常見性傳播疾病的實驗室診斷“金標(biāo)準(zhǔn)” 淋病 淋球菌培養(yǎng) 梅毒 暗視野檢查+TPPA(FTA-ABS,WB) 沙眼衣原體 衣原體培養(yǎng)+核酸擴增技術(shù) 支原體感染 支原體培養(yǎng) 生殖器皰疹 病毒培養(yǎng)+核酸擴增技術(shù) 尖銳濕疣 核酸雜交和核酸擴增技術(shù) HIV/艾滋病 蛋白印跡試驗+HIV抗原檢測 滴蟲性陰道炎 濕片法+毛滴蟲培養(yǎng) 細菌性陰道病 G染色查線索細胞 軟下疳 細菌培養(yǎng)+核酸擴增技術(shù) 性病性淋巴肉芽腫 衣原體培養(yǎng)+核酸擴增技術(shù) 一、梅毒的診斷標(biāo)準(zhǔn)梅毒診斷要點： 梅毒診斷標(biāo)準(zhǔn)根據(jù)衛(wèi)生部衛(wèi)生行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)梅毒診斷標(biāo)準(zhǔn)(WS2732007)。梅毒診斷分為一期、二期、三期、隱性和胎

2、傳梅毒。梅毒診斷原則應(yīng)根據(jù)流行病學(xué)史、臨床表現(xiàn)及實驗室檢查等進行綜合分析。 分期/類 病例分類 病史 臨床表現(xiàn) 實驗室檢查 一期梅毒 疑似病例 性接觸史，或性伴感染史 硬下疳 非梅毒螺旋體抗原血清試驗陽性 確診病例(實驗室診斷病例) 同上同上 暗視野檢查陽性；或梅毒螺旋體抗原血清試驗陽性，非梅毒螺旋體抗原血清試驗陽性； 分期/類 病例分類 病史 臨床表現(xiàn) 實驗室檢查 二期梅毒 疑似病例 性接觸史，或性伴感染史 二期梅毒皮疹非梅毒螺旋體抗原血清試驗陽性 確診病例(實驗室診斷病例) 同上 同上 暗視野檢查陽性；或梅毒螺旋體抗原血清試驗陽性，非梅毒螺旋體抗原血清試驗陽性 三期梅毒 疑似病例 性接觸史

3、，或性伴感染史 三期梅毒表現(xiàn)，病期在2年以上 非梅毒螺旋體抗原血清試驗陽性確診病例(實驗室診斷病例) 同上同上梅毒螺旋體抗原血清試驗陽性，非梅毒螺旋體抗原血清試驗陽性；或三期梅毒組織病理改變 分期/類 病例分類 病史 臨床表現(xiàn) 實驗室檢查 隱性梅毒 疑似病例 性接觸史，或性伴感染史；既往無梅毒診斷與治療史 無任何臨床癥狀與體征 非梅毒螺旋體抗原血清試驗陽性 確診病例(實驗室診斷病例) 同上 同上 梅毒螺旋體抗原血清試驗陽性，非梅毒螺旋體抗原血清試驗陽性 胎傳梅毒 疑似病例 生母為梅毒患者或隱性梅毒者 胎傳梅毒的臨床表現(xiàn)；或無任何臨床癥狀。 非梅毒螺旋體抗原血清試驗陽性，其抗體滴度高于生母4倍及

4、以上，但低于該值并不排除胎傳梅毒；或出生后3個月隨訪滴度升高。應(yīng)取嬰兒靜脈血進行檢測，而不是臍帶血 確診病例(實驗室診斷病例) 同上同上暗視野檢查陽性；梅毒螺旋體抗原血清試驗陽性，非梅毒螺旋體抗原血清試驗陽性，其抗體滴度高于生母4倍及以上，但低于該值并不排除胎傳梅毒，或出生后3個月隨訪滴度升高。應(yīng)取嬰兒靜脈血進行檢測，而不是臍帶血 1、 暗視野檢查/鍍銀染色法2、非梅毒螺旋體抗原血清試驗3、梅毒螺旋體抗原血清試驗（一）實驗室診斷方法的臨床意義暗視野顯微鏡法直接鏡檢圖像（1000）1、暗視野檢查臨床意義當(dāng)標(biāo)本陽性時，可確診梅毒。適宜于早期梅毒(一、二期)，特別是早期一期梅毒、早期先天梅毒 。暗視

5、野顯微鏡檢查法被WHO確定為性病實驗室的必備方法當(dāng)標(biāo)本陰性時，不能排除梅毒診斷不適用于來至口腔的標(biāo)本暗視野顯微鏡檢查法是能夠立即在獲得性或先天性梅毒的早期進行直接診斷的唯一標(biāo)準(zhǔn)2、RPR類臨床意義RPR等試驗一般認為是梅毒初篩試驗?陽性者，均需作確證試驗。VDRL用于神經(jīng)梅毒診斷。有些疾病可導(dǎo)致生物學(xué)假陽性。復(fù)發(fā)或再感染可陽轉(zhuǎn)或滴度升高。為療效觀察、判愈方法。早期梅毒治療后血清滴度應(yīng)下降4倍認為治療有效。3、TPPA（TPHA）臨床意義1、為梅毒確證試驗， 其敏感性：一期梅毒76（6990） 二期梅毒為100 潛伏梅毒為97（97100） 晚期梅毒為94 其特異性：1002、治療后可終生陽性，

6、不能作為療效指標(biāo)。3、IgM抗體可作為梅毒早期診斷或胎傳梅毒診斷。4、可有1生物學(xué)假陽性存在，如，SLE。兩類血清學(xué)方法臨床意義的比較 RPR類：RPR等試驗可用于大標(biāo)本量的篩查？RPR定量可排除生物學(xué)假陽性？RPR是療效判定的指標(biāo)RPR是療后隨訪的指標(biāo)RPR用于判定是否血清復(fù)發(fā)TPPA類：是金標(biāo)準(zhǔn)TPPA等試驗是確診指標(biāo)在HIV感染者中，血清學(xué)試驗可發(fā)生難于解釋的現(xiàn)象，若懷疑梅毒感染應(yīng)作HIV檢查（二）實驗室診斷方法臨床應(yīng)用1、適用對象2、方法學(xué)的靈敏度3、不同病期方法學(xué)選擇4、血清學(xué)結(jié)果解釋5、RPR滴度與治療效果6、療后血清學(xué)隨訪7、生物學(xué)假陽性8、胎傳梅毒實驗室診斷標(biāo)準(zhǔn)9、神經(jīng)梅毒實驗

7、室診標(biāo)準(zhǔn)1、適用對象 皮膚、性病門診 輸血前檢查 手術(shù)前檢查 入院檢查 產(chǎn)前檢查 檢驗檢疫2、方法學(xué)的靈敏度病原學(xué)檢查：PCR 鍍銀染色 暗視野血清學(xué)方法：FTA-ABS TPPA RPR抗體： IgM IgG3、不同病期方法學(xué)選擇一期二期三期暗視野、鍍銀染色、PCR、 IgMFTA-ABS、TPPA、ELISA、CLIA、RT、WB、RPR、暗視野、鍍銀染色、PCR等FTA-ABS、TPPA、ELISA、CLIA、RT、WB 、RPR、VDRL、病理等4、血清學(xué)結(jié)果解釋請在此輸入您的文本。請在此輸入您的文本。請在此輸入您的文本。請在此輸入您的文本。請在此輸入您的文本。TPPA為什么做滴度？經(jīng)

8、常有人提問夫、妻、子結(jié)果不一致情況？5、RPR滴度與治療效果 1、治療成功：早期梅毒患者在治療后6個月內(nèi)癥狀消失，且RPR滴度有至少4倍的下降。晚期梅毒或隱性梅毒患者在治療后1224個月內(nèi)RPR滴度有至少4倍的下降。 2、治療失敗：治療后癥狀持續(xù)或重新出現(xiàn)；治療后RPR滴度反而上升了4倍或以上；RPR滴度較高（1:32或以上）但在六個月內(nèi)沒有達到4倍的下降?？姑范局委熓〉牟∪藨?yīng)考慮合并HIV感染及神經(jīng)梅毒的可能性。 3、血清固定：經(jīng)正規(guī)治療后，梅毒患者RPR一般都會轉(zhuǎn)為陰性，但有13%的病人即使經(jīng)足量抗梅治療，RPR滴度仍持續(xù)呈低滴度陽性，這種現(xiàn)象稱為血清固定，其原因尚不明了。血清固定患者的

9、滴度重又上升則提示再次感染梅毒。6、療后血清學(xué)隨訪方法:RPR時間：第1年，每3個月檢查1次第2年，每6個月檢查1次第3年，最后1個月檢查7、生物學(xué)假陽性常見原因RPR類試驗TPPA類試驗感染因素細菌性心內(nèi)膜炎、軟下疳病毒性肝炎、傳單增多癥結(jié)核、麻風(fēng)、麻疹、瘧疾、水痘支原體或雙球菌引起的肺炎其它螺旋體感染，如品他、雅司病傳單增多癥麻風(fēng)瘧疾萊姆病非感染因素生理，如年老、妊娠毒品惡性腫瘤SLE類多發(fā)性骨髓瘤慢性肝病損害SLE甲狀腺炎大家忘掉只有梅毒才能達到1:8？RPR在妊娠患者中，有28%的假陽性發(fā)生XX梅毒事件（華西都市報）2012年8月，李冬梅（化名）懷孕。2012年12月26日，初檢胎檢篩

10、查疑患梅毒 。2013年1月4日(另一家機構(gòu)），夫妻再檢均呈陰性。2013年5月14日，待產(chǎn)，第2天產(chǎn)檢結(jié)果被告之有梅毒。2013年5月16日，剖腹產(chǎn)。2013年5月21日（另一家機構(gòu)），李冬梅RPR（-）TPPA（+），雙女與母一致。2013年9月，前往重慶，RPR（-）TPPA（+）。8、胎傳梅毒實驗室診斷標(biāo)準(zhǔn)暗視野檢查陽性。非梅毒螺旋體抗原血清試驗持續(xù)陽性。非梅毒螺旋體抗原血清抗體滴度是母親的4倍以上?；純?9SIgM陽性。隨訪18個月觀察。9、神經(jīng)梅毒的實驗室診斷梅毒血清學(xué)試驗（RPR、TPPA）陽性。腦脊液異常（WBC計數(shù) 10*10 /L 蛋白量500mg/L）3. 腦脊液VDRL

11、試驗陽性（可FTA-ABS陽性）。6梅毒血清學(xué)檢測-策略一非梅毒螺旋體抗原血清試驗（RPR)陽性陰性報告：RPR陰性梅毒螺旋體抗原血清試驗（TPPA)RPR定量試驗報告：RPR陰性滴度TPPA陽性陽性陰性報告：RPR陽性TPPA陰性？前帶、早期第2次收費？1：8習(xí)慣？孕產(chǎn)婦梅毒檢測及服務(wù)流程接受初次產(chǎn)前保健的孕產(chǎn)婦采用RPR或TRUST等篩查采用TPPA等證實陽性陰性診斷梅毒感染陽性排除梅毒感染陰性繼續(xù)常規(guī)產(chǎn)前保健2個療程治療，RPR定量檢測和隨放？方法、前帶、早期？真陽？真能排除？真梅毒梅毒血清學(xué)檢測-策略二梅毒螺旋體血清試驗（ELISA)陽性陰性報告： ELISA陰性推薦TPPA復(fù)檢RPR

12、定性、定量試驗報告： ELISA陽性RPR陽性及滴度陽性陰性報告： ELISA陽性,TPPA陰性,RPR陰性報告： ELISA陽性RPR陰性陽性陰性報告： ELISA陽性,TPPA陽性,RPR陰性？敏感性第2次收費？收費不？以誰為準(zhǔn)我室推薦的梅毒血清學(xué)試驗-策略三 梅毒螺旋體抗原血清試驗（TPPA等）TPPA-TPPA+陰性報告RPR-RPR+現(xiàn)癥梅毒抗梅治療療后觀察既往感染隨訪或抗梅治療第2次收費？我室推薦的梅毒血清學(xué)試驗-策略四 梅毒螺旋體抗原血清試驗（TPPA等）RPR滴度（1:32直到出現(xiàn)陰性）TPPA-RPR-陰性報告TPPA-RPR+生物學(xué)假陽性TPPA+RPR-既往感染或隨訪TP

13、PA+RPR+現(xiàn)癥病人抗梅治療療效隨訪面對當(dāng)前梅毒血清學(xué)檢測存在的問題，即將有策略五梅毒孕產(chǎn)婦所生兒童隨訪與先天梅毒感染狀態(tài)監(jiān)測流程梅毒產(chǎn)婦所生新生兒不能開展暗視野、IgM采靜脈血、RPR定量能開展暗視野、IgM陰性診斷先天梅毒感染陽性滴度母親4倍，無論有無癥狀滴度母親4倍，有癥狀滴度母親4倍，無癥狀治療、隨訪18月TPPA陽性預(yù)治療每3個月RPR定量，觀察癥狀陽性陰性RPR滴度不下降或上升，結(jié)合癥狀6月后RPR未陰，滴度低水平連續(xù)2次陰性每3個月TPPA18月TPPA+連續(xù)2次陰性排除先天梅毒感染陰性無此線？歐盟梅毒指南（2008年版）初篩試驗：選用EIA、TPPA/TPHA如果懷疑早期梅毒

14、最好用TP特異性IgM檢測，如果陰性，12周后重復(fù)檢測RPR/VDRL不推薦作為初篩試驗，但可作為有癥狀早期梅毒的快速檢測方法，需要同時檢測滴度。確證試驗初篩陽性，應(yīng)用另外一種TP特異性試驗確證 EIA用TPPA/TPHA確證 TPPA/TPHA用EIA確證然后再做滴度如果初篩和確證結(jié)果不一致，則做重組抗原免疫印跡試驗初篩和確證試驗陽性，而RPR/TRUST陰性，推薦做IgM檢測。陽性結(jié)果需要對第二份血樣進行重復(fù)檢測以確證。判斷梅毒活動性成功治療后，滴度32罕見。IgM檢測，可以說明疾病的活動性，但是晚期梅毒IgM可能為陰性。如果治療前RPR/TRUST為陰性，IgM檢測有助于判斷病情。血清學(xué)

15、試驗選擇篩選試驗: 1.EIA；2. TPPA; 3.TPPA/TPHA加VDRL/RPR。 疑似早期梅毒：EIA-IgM初篩陽性，另一實驗證實 TPPA,EIA,RPR/VDRL EIA+:confirm with TPPA or TPHA。2個試驗不一致:免疫印跡。VDRL/RPR滴度1:16、IgM陽性為梅毒活動的標(biāo)志之一。治療當(dāng)天滴度為判斷療效的最佳依據(jù)。梅毒早期VDRL/RPR 滴度可能較低。二、淋病的實驗室診斷標(biāo)準(zhǔn)淋病診斷要點：淋病診斷標(biāo)準(zhǔn)根據(jù)衛(wèi)生部衛(wèi)生行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)淋病診斷標(biāo)準(zhǔn)(WS2682007)。淋病診斷原則應(yīng)根據(jù)流行病學(xué)史、臨床表現(xiàn)及實驗室檢查等進行綜合分析。 分期/類 病例分類

16、 病史 臨床表現(xiàn) 實驗室檢查 淋病 疑似病例 不安全性行為，或性伴感染史，或新生兒的母親有淋病史 男性尿道膿性分泌物；女性宮頸粘液膿性分泌物或膿性分泌物；肛交者直腸粘液膿性分泌物或膿性分泌物；新生兒眼結(jié)膜膿性分泌物無 確診病例(實驗室診斷病例) 同上同上 男性尿道分泌物涂片查到細胞內(nèi)革蘭陰性雙球菌；或淋球菌培養(yǎng)陽性；或淋球菌核酸檢測陽性淋病診斷標(biāo)準(zhǔn)實驗室方法 1、顯微鏡檢查 涂片、革蘭染色 對男性病人有診斷價值（敏感性9095%， 特異性98100%） 對女性病人敏感性5070% 2、培養(yǎng)敏感性：80100%特異性：100%3、核酸檢測：熒光PCR、NGCT核酸TMA雙檢、NGCTUu三檢等敏

17、感性：100%，死菌活菌、尿液分泌物均可特異性：100%有診斷意義的報告 報告方式，要包含4個因素對男性單純性NG感染，敏感性可達95對女性NG感染，敏感性只有50不能作為診斷指標(biāo)不能作為判愈指標(biāo)顯微鏡檢查臨床意義淋菌培養(yǎng)臨床意義是臨床診斷的金標(biāo)準(zhǔn)，是WHO推薦的淋病篩查的唯一方法是判愈的指標(biāo)可以對疑似（或非生殖器部位標(biāo)本）NG的菌株作進一步的鑒定可進行NG耐藥監(jiān)測，PPNG、TRNG、QRNG科研三、生殖道沙眼衣原體感染的診斷標(biāo)準(zhǔn)生殖道沙眼衣原體感染診斷要點：生殖道沙眼衣原體感染診斷標(biāo)準(zhǔn)根據(jù)中國疾病預(yù)防控制中心印發(fā)的全國性病監(jiān)測方案(試行)(2007年)。生殖道沙眼衣原體感染診斷原則應(yīng)根據(jù)流

18、行病學(xué)史、臨床表現(xiàn)及實驗室檢查等進行綜合分析。 分期/類 病例分類 病史 臨床表現(xiàn) 實驗室檢查 生殖道沙眼衣原體感染確診病例(實驗室診斷病例)有多性伴，不安全性行為，或性伴感染史 男性尿道炎、附睪炎；女性宮頸炎、盆腔炎；男性和女性直腸炎、眼結(jié)膜炎；新生兒眼結(jié)膜炎、肺炎等。 沙眼衣原體抗原檢測陽性；或沙眼衣原體核酸檢測陽性；或沙眼衣原體細胞培養(yǎng)陽性 無癥狀感染(病原攜帶者) 同上無臨床癥狀 同上沙眼衣原體診斷標(biāo)準(zhǔn)實驗室檢查方法1、培養(yǎng)法： McCoy細胞 特異性高：100% 敏感性低 價昂、費時、費力 設(shè)備2、抗原檢測、直接免疫熒光試驗（DFA）：用種特異的沙眼衣原體主要外膜蛋白單克隆抗體用熒光

19、素標(biāo)記染色。需熒光顯微鏡，檢查者要有經(jīng)驗，區(qū)別非特異性熒光。、酶免疫吸附試驗（ELISA）：敏感性7197，特異性9799%，可成批檢測。、快速免疫層析法：明窗試驗等。明窗試驗（clear view chlamydia）臨床意義 此法診斷女性宮頸沙眼衣原體感染的敏感性為87，特異性為98.8簡便、快速，醫(yī)生和病人都容易接受不是金標(biāo)準(zhǔn)注意事項標(biāo)本的量一定要夠、拭子要大一點、轉(zhuǎn)動一圈、停留時間要長一點男性若分泌物少，可用首段尿液沉淀注意Na離子或其它原因造成的假陽性3、核酸擴增試驗（NAAT） 聚合酶鏈反應(yīng)與連接酶鏈反應(yīng)(PCR，LCR)、熒光定量PCR、NGCT核酸TMA雙檢、NGCTUu三檢等

20、。優(yōu)點：1、敏感性：9097%，特異性99100% 2、可以用尿液作檢查，非侵襲性方法 3、篩查，無癥狀病人缺點：1、價格昂貴需要貴重儀器、設(shè)備 2、人員需要培訓(xùn)200份標(biāo)本同時用3種方法檢測Ct結(jié)果 明窗試驗 IDEIA PCE FQ-PCR 陽性 47 62 66 陰性 153 138 134 合計 200 200 200四、生殖器皰疹實驗室診斷標(biāo)準(zhǔn)生殖器皰疹診斷要點：衛(wèi)生部衛(wèi)生行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)生殖器皰疹診斷標(biāo)準(zhǔn)及處理原則(WS236-2003)。 分期/類 病例分類 病史 臨床表現(xiàn) 實驗室檢查 生殖器皰疹 臨床診斷病例 有多性伴，不安全性行為，或性伴病史，或病史不明外生殖器或肛門周圍部位的疼痛性

21、水皰、糜爛、潰瘍、結(jié)痂無 確診病例(實驗室診斷病例)同上同上 生殖器肛門部位皮損取材單純皰疹病毒細胞培養(yǎng)陽性；或生殖器肛門部位皮損取材單純皰疹病毒抗原檢測陽性，或核酸檢測陽性；或單純皰疹病毒-2型(HSV-2)特異性抗體檢測陽性生殖器皰疹診斷標(biāo)準(zhǔn)實驗室檢查方法1、病毒抗原檢測： 單克隆抗體免疫熒光試驗（IFA）或酶免疫吸附試驗（ELISA）來檢測抗原。2、培養(yǎng)： 看特征性細胞病變，特異性100%，但敏感性不高。需設(shè)備條件、技術(shù)。 3、核酸檢測: 熒光PCR、雙檢、 三聯(lián)檢4、抗體檢測： IgM其它方法介紹復(fù)合PCR請在此輸入您的文本。請在此輸入您的文本。請在此輸入您的文本。請在此輸入您的文本。請在此輸入您的文本。HSV快速檢查方法HSV-IDEIA（酶免疫放大）與金標(biāo)準(zhǔn)相比，其敏感性達93.6%,特異性達97.8可同時檢測HSV-1和HSV-2型文獻報道， HSV-1致GH的比例在上升DAKO專利技術(shù)可成批，可單人份做2小時出結(jié)果可目測，可上機M-PCR與IDEIA檢測HSV比較 HSV-IDEIA M-PCR IDEIA（）IDEIA（） Total 166 5 171 0 131 131 Total 166 136 302五、尖銳濕疣實驗室診斷標(biāo)準(zhǔn)尖銳濕