5檢查方法與消毒滅菌

1、第十一章 細(xì)菌的檢查方法 一、細(xì)菌形態(tài)檢查法一）不染色標(biāo)本檢查法活菌輪廓?jiǎng)?力 單染色法 復(fù)染色法 鑒別染色法 革蘭染色 抗酸染色 莢膜染色 鞭毛染色 芽胞染色特殊染色法二）染色標(biāo)本檢查法原 理：細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)學(xué)說(shuō)等電點(diǎn)學(xué)說(shuō)化學(xué)結(jié)構(gòu)學(xué)說(shuō) 革蘭染色法（Gram Stain）由丹麥醫(yī)生Hans Christian Gram于1884年創(chuàng)立。涂 片干 燥固 定染 色水洗、吸干鏡 檢一、制備涂片標(biāo)本步 驟二、染 色結(jié)晶紫初染碘液媒染乙醇脫色復(fù)紅復(fù)染涂片固定紫色革蘭陽(yáng)性（G+）菌紅色革蘭陰性（G-）菌（1）鑒別細(xì)菌（2）選擇藥物（3）與致病性有關(guān)意 義結(jié) 果 細(xì)菌學(xué)診斷二、病原菌的檢查原則標(biāo)本的采集和運(yùn)送避

2、免雜菌污染運(yùn)送注意保存不同期不同標(biāo)本抗菌素使用前采集病變明顯部位標(biāo)本必須新鮮病原菌的檢查程序藥物敏感試驗(yàn)標(biāo)本直接涂片鏡檢分離培養(yǎng)生化試驗(yàn)血清學(xué)鑒定動(dòng)物試驗(yàn)明確診斷初步診斷分子生物學(xué)技術(shù)其他檢測(cè)技術(shù)觀察菌落形態(tài)染色鏡檢原理 雙份血清標(biāo)本，恢復(fù)期血清中抗體效價(jià)比急性期血清中抗體效價(jià)升高4倍者方有意義結(jié)果判斷血清學(xué)的診斷 - 已知抗原檢測(cè)未知抗體 - 效價(jià)高低 - 動(dòng)態(tài)觀察種 類凝集試驗(yàn) - 肥達(dá)試驗(yàn)、外斐試驗(yàn)、顯微鏡凝集試驗(yàn)等中和試驗(yàn) -梅毒VDRL、RPR試驗(yàn)等沉淀試驗(yàn) - 抗“O”試驗(yàn)等補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn) - Q熱柯克斯體抗體檢測(cè)等殺死物體上病原微生物的方法,并不一定能殺死含芽胞的細(xì)菌或非病原微生物

3、 第十二章 消毒與滅菌消毒disinfection滅菌sterilization無(wú)菌asepsis防腐antisepsis防止或抑制體外細(xì)菌生長(zhǎng)繁殖不含活菌殺死物體上的所有微生物無(wú)菌操作抹布上的細(xì)菌 菜板上的細(xì)菌 熱力滅菌法 一、物理消毒滅菌法焚燒-最徹底的滅菌方法燒灼-直接用火焰滅菌方法干烤-加熱160-180 2小時(shí)干熱(dry heat)滅菌法殺菌機(jī)理：高溫使菌體蛋白凝固變性紅外線-熱效應(yīng)只在照射表面產(chǎn)生微波-熱效應(yīng)具有一定的穿透性濕熱(moist heat)滅菌法加壓蒸汽滅菌法最有效的滅菌方法121煮沸消毒法水煮1005分鐘(繁殖體)-2小時(shí)(芽胞) 流通蒸汽消毒法巴氏消毒法間歇蒸汽滅

4、菌法水蒸汽100 15-30分鐘(繁殖體)反復(fù)多次流動(dòng)蒸汽間歇加熱滅菌較低的溫度（6130分鐘）殺滅致病菌20-30分鐘濕熱滅菌與干熱滅菌的比較同一溫度下，濕熱比干熱滅菌效果好原因1、濕熱中細(xì)菌菌體蛋白較易凝固2、濕熱的穿透力比干熱大3、濕熱的蒸汽有潛熱輻射殺菌法 紫外線殺菌機(jī)理：波長(zhǎng)200-300nm的紫外線具有殺菌作用干擾DNA的復(fù)制與轉(zhuǎn)錄紫外線穿透力較弱特點(diǎn)：應(yīng)用范圍：空氣及不耐熱物品的表面消毒光復(fù)活作用及光復(fù)活酶殺菌機(jī)理：應(yīng)用范圍：電離輻射包括高速電子、X射線和 射線產(chǎn)生游離基,破壞DNA。一次性醫(yī)用塑料制品的消毒食品的消毒不破壞其營(yíng)養(yǎng)成分 超聲波殺菌法 超聲波殺菌機(jī)理：頻率高于20k

5、Hz/s而不被人耳感覺(jué)到的聲波過(guò)水時(shí)的空化作用（空穴效應(yīng)）特點(diǎn)：應(yīng)用范圍：粉碎細(xì)胞，提取細(xì)胞組分革蘭陰性菌較為敏感濾過(guò)除菌法用機(jī)械性阻擋除去液體或空氣中的細(xì)菌濾菌器 含有微細(xì)小孔0.22微米,只允許液體或氣體通過(guò), 而大于孔徑的細(xì)菌等顆粒不能通過(guò) 適用范圍血清、毒素、抗生素以及空氣等的除菌 濾菌過(guò)程低溫與干燥在低溫狀態(tài)下真空抽去水分用途：保存菌種冷凍真空干燥法：二、化學(xué)消毒滅菌法殺菌機(jī)理使菌體蛋白凝固變性使細(xì)胞內(nèi)酶失活，干擾細(xì)菌的正常代謝破壞細(xì)菌細(xì)胞壁、膜等結(jié)構(gòu)，導(dǎo)致內(nèi)含 物逸出按殺菌能力分類可殺死包括芽胞在內(nèi)的所有微生物 1、高效消毒劑適用于不耐熱力，但要進(jìn)入體內(nèi)的物品包括含氯消毒劑、過(guò)氧化

6、物消毒劑 醛類消毒劑、環(huán)氧乙烷等2、中效消毒劑適用于纖維內(nèi)窺鏡、喉鏡、麻醉器材等包括含碘消毒劑、醇類消毒劑等不能殺死包括芽胞，可殺死繁殖體（包 括結(jié)核分枝桿菌）、真菌、多數(shù)病毒可殺死多數(shù)細(xì)菌繁殖體，不能殺死芽胞、 結(jié)核分枝桿菌、某些抵抗力強(qiáng)的真菌和病毒3、低效消毒劑適用于皮膚、粘膜、物體表面和地面等包括季胺鹽類消毒劑、氯乙定、高錳酸 鉀等龍膽紫干擾氧化、抑制繁殖染料新潔而滅蛋白變性，細(xì)胞膜損傷表面活性劑過(guò)氧乙酸、碘酒氧化、蛋白沉淀氧化劑紅汞、硫柳汞氧化、蛋白酶變性重金屬鹽高錳酸甲氧化、蛋白沉淀氧化劑乙醇蛋白變性醇類石炭酸蛋白變性，細(xì)胞膜損傷酚類常用種類作用機(jī)制類別常用消毒劑種類各種消毒劑的應(yīng)用消毒劑常用濃度 適用范圍含氯消毒劑有效氯量4g/L飲水過(guò)氧乙酸0.2%-1%皮膚、物體表面、空氣戊二醛2%醫(yī)療器械碘酒2.5%皮膚、黏膜、物體表面碘伏2%皮膚、黏膜、物體表面乙醇75%醫(yī)療器械、皮膚新潔爾滅0.4%-1.6%皮膚、黏膜、物體表面高錳酸鉀1-10g/L皮膚、黏膜、食具、蔬菜等影響消毒劑作用的因素消毒劑細(xì)菌 環(huán)境種類濃度作用時(shí)間菌齡種類有機(jī)物溫度酸鹼度1、試