蘇拉明聯(lián)合槲皮素抑制肺腺癌小鼠移植瘤 的轉移

1、蘇拉明結合槲皮素抑制肺腺癌小鼠移植瘤 的轉移張平，賀兼斌，王小華，歐立文【摘要】目的研究蘇拉明結合槲皮素對小鼠肺腺癌轉移的抑制作用。方法將40只接種高轉移性的LA795肺腺癌細胞T739小鼠隨機分成5組：對照組、順鉑DDP組、槲皮素組、蘇拉明組、蘇拉明+槲皮素組。實驗3周后，處死全部小鼠，取出雙肺和剝離皮下腫瘤，計算肺轉移發(fā)生率，計數(shù)各組小鼠肺外表轉移結節(jié)數(shù)及算出肺外表結節(jié)轉移抑制率，測量各組小鼠肺濕重。免疫組化和圖像分析系統(tǒng)檢測皮下移植瘤中微血管密度irvesseldensity，VD，血管內(nèi)皮生長因子vasularendthelialgrthfatr，VEGF的表達并定量分析。結果蘇拉明組

2、、槲皮素組與對照組相比肺外表轉移結節(jié)數(shù)明顯下降，同時蘇拉明組中肺轉移發(fā)生率、皮下腫瘤內(nèi)VD、VEGF的表達與對照組相比也明顯下降，相反順鉑組對此那么無明顯影響。結合用藥組那么顯著抑制肺外表轉移結節(jié)數(shù)且具有協(xié)同作用。結論蘇拉明和槲皮素對LA795肺腺癌的肺結節(jié)轉移具有協(xié)同抑制作用，蘇拉明抑制LA795肺腺癌轉移與其抑制其腫瘤內(nèi)VEGF表達相關?！娟P鍵詞】蘇拉明；槲皮素；血管生成抑制劑；肺腺癌；轉移基金工程：湖南省衛(wèi)生廳科研基金資助工程(2022033)InhibitryEffetfSurainbinatinithQueretinntheetastasisfLungAdenarinainie目前肺

3、癌發(fā)病率和死亡率都有明顯增高趨勢，腺癌為其一主要組織學類型，癌瘤內(nèi)血管豐富，部分侵潤和血行轉移發(fā)生較早。轉移是惡性腫瘤的重要特征，也是主要死因。自Flka1首先提出實體瘤生長需要血管生成理論后，抗血管治療腫瘤轉移也成為了當前腫瘤生物治療的研究熱點之一。本實驗利用LA795肺腺癌細胞形成高轉移T739小鼠皮下腫瘤轉挪動物復制模型2，應用具有血管生成抑制作用的蘇拉明及槲皮素，以順鉑為對照，觀察單獨及結合用藥對LA795肺腺癌肺轉移的抑制作用，并討論其作用機制。1材料和方法1.1實驗動物、細胞株、藥品及試劑1.2動物模型的建立處死兩只荷瘤鼠，剝離瘤塊，研磨成勻漿液，過360目鋼網(wǎng)，生成腫瘤細胞懸液，

4、鏡下調(diào)節(jié)細胞濃度為2106個/l，于每只小鼠右后腿根部外側皮下注射0.2l瘤液，形成小鼠高轉移性動物腫瘤模型。1.3分組及用藥小鼠皮下移植處均成瘤，接種4d后隨機分成5組，每組8只。(1)對照組:丙二醇0.2l+生理鹽水0.2l/只腹腔注射iq，每天一次；(2)順鉑組:順鉑2g/(kgd)溶于生理鹽水0.2l中iq，于接種后第4、11、18d各一次，并予丙二醇0.2l/只每天腹腔注射一次；(3)槲皮素組:槲皮素50g/(kgd)溶于丙二醇0.2l中iq，每天一次；(4)蘇拉明組:蘇拉明10g/(kgd)溶于生理鹽水0.2l中iq，每天一次；(5)槲皮素+蘇拉明組:槲皮素及蘇拉明按3、4組用藥。

5、1.4方法與觀察指標141藥物對腫瘤轉移的影響142移植瘤內(nèi)VEGF、VD的表達15統(tǒng)計處理根據(jù)數(shù)據(jù)類型分別使用組間t檢驗，2檢驗和相關分析，用SPSS10.0軟件進展統(tǒng)計學處理。2結果2.1移植瘤的肺轉移情況各組小鼠移植瘤的肺轉移發(fā)生率、肺轉移結節(jié)數(shù)、肺濕重等情況,見表1。表1各組小鼠移植瘤的肺轉移情況3討論已發(fā)生轉移的中、晚期肺癌療效差。腫瘤侵襲和轉移是腫瘤治療的一大難題。本文用有血管抑制作用的蘇拉明結合槲皮素對肺腺癌的轉移進展研究。結果顯示，結合組肺外表轉移結節(jié)數(shù)比其他組明顯減少，有差異顯著性(P0.05)，說明蘇拉明和槲皮素結合應用有協(xié)同抑制轉移作用。槲皮素組、DDP組及對照組小鼠均發(fā)

6、生肺轉移，差異無顯著性P0.05；蘇拉明組6/8小鼠發(fā)生肺轉移，低于對照組，而結合組5/8小鼠發(fā)生肺轉移與對照組比差異有顯著性(P0.05)，進一步顯示結合用藥協(xié)同作用。本實驗蘇拉明組及槲皮素組與對照組轉移率相比無顯著性差異，可能是本研究樣本偏少，擴大樣本可能會得出陽性結果，5組肺濕重無差異顯著性，可能與肺外表轉移結節(jié)部分未明顯生長有關，延長喂養(yǎng)時間，隨著轉移灶部分生長估計會導致各組肺濕重的差異性。亦可能系轉移瘤所占肺比重較小，如測轉移瘤重，亦可能出現(xiàn)差異性，但本研究中肺臟體積小，癌結節(jié)難以剝離。體外實驗證明，缺乏血管生成，腫瘤只能長到123，不發(fā)生轉移，血管形成是腫瘤生長、侵襲、轉移的根底，

7、新生血管提供腫瘤生長所需營養(yǎng)，排泄代謝產(chǎn)物，促進血管滲漏，大量癌細胞進入血液循環(huán)，是癌細胞播散的途徑。腫瘤生長和轉移需要新血管持續(xù)生長4。血管形成過程的核心是血管內(nèi)皮細胞增殖，VEGF是最重要的血管生長因子，是血管內(nèi)皮細胞的特異性致裂原，能選擇性地作用于血管內(nèi)皮細胞膜上的兩種絡氨酸激酶受體，促進內(nèi)皮細胞分裂，增殖和血管構建，誘導微血管生成，增加血管通透性，它還能降解血管內(nèi)皮細胞基質(zhì)，削弱血管的屏障作用，使新生血管基底膜缺損加重，促進腫瘤的侵襲及轉移5,6。本實驗證實蘇拉明組、槲皮素組和結合組中VEGF的表達較對照組及DDP組低，有顯著性差異P0.01，VEGF的表達在腫瘤侵潤的邊緣尤為增強，且和腫瘤內(nèi)VD有一致性，說明蘇拉明和槲皮素可抑制腫瘤內(nèi)血管生成，切斷腫瘤營養(yǎng)供給和腫瘤轉移通道，抑制腫瘤的轉移。我們同時觀察到蘇拉明與槲皮素結合能增強血管抑制作用，可能與槲皮素亦有抑制血管增殖的活性有關7，兩者具有協(xié)同作用。結合VEGF表達灰度值和肺外表轉移結節(jié)數(shù)呈負相關(r=-0.88,P0.01)，提示VEGF是監(jiān)測腫瘤轉移的較好指標。蘇拉明和槲皮素可通過下調(diào)這些蛋白質(zhì)表達而抑