抗生素發(fā)酵生產(chǎn)工藝

1、關(guān)于抗生素發(fā)酵生產(chǎn)工藝第一張，PPT共五十六頁，創(chuàng)作于2022年6月2制藥微生物生產(chǎn)菌種如何選育？發(fā)酵過程中主要檢測(cè)的參數(shù)有哪些？發(fā)酵工藝過程如何控制？知識(shí)回顧第二張，PPT共五十六頁，創(chuàng)作于2022年6月3主要內(nèi)容抗生素的概述：（1）抗生素的定義 （2）抗生素的命名（3）抗生素的分類青霉素的發(fā)酵生產(chǎn)工藝：（重點(diǎn)）（1）青霉素的概述 （2）生產(chǎn)菌的生物學(xué)特性 （3）發(fā)酵工藝過程 第三張，PPT共五十六頁，創(chuàng)作于2022年6月41 抗生素的定義和命名（1）抗生素的定義 早期：一般認(rèn)為來源于微生物，且主要作用于細(xì)菌感染。故認(rèn)為抗生素(antibiotics)是微生物在代謝過程中產(chǎn)的，在低濃度下就能

2、抑制它種微生物生長和活動(dòng)，甚至殺死他種微生物的化學(xué)物質(zhì)。由于抗生素的這種殺菌能力，我們?cè)?jīng)把這類物質(zhì)叫做抗菌素。第四張，PPT共五十六頁，創(chuàng)作于2022年6月5現(xiàn)在： 來源：隨著抗生素研究和生產(chǎn)的發(fā)展，新的抗生素的來源正在擴(kuò)大?？梢允俏⑸?、植物（如蒜素、常山堿、黃連素、長春花堿、魚腥草素等） 、動(dòng)物（如魚素、紅血球素等） 。但抗生素的工業(yè)化生產(chǎn)主要是來自微生物的大量發(fā)酵法，微生物是抗生素舞臺(tái)上的主角。 作用對(duì)象：病毒、細(xì)菌、真菌、原生動(dòng)物、寄生蟲、藻類、腫瘤細(xì)胞等。因此不能把抗生素僅僅作為抗菌藥物。 第五張，PPT共五十六頁，創(chuàng)作于2022年6月6定義：雖然抗生素已被廣泛使用，但是由于抗生素

3、的多樣性，關(guān)于抗生素的定義在專家中一直存在著分歧。 目前，一個(gè)大多數(shù)專家所接受的定義是：抗生素是由生物（包括某些微生物、植物和動(dòng)物在內(nèi)）在其生命活動(dòng)過程中產(chǎn)生的或（化學(xué)合成獲得的），能在低濃度下有選擇地抑制他種生物機(jī)能的低分子量的有機(jī)物質(zhì)。 狹義的定義是：抗生素是低分子量的微生物代謝產(chǎn)物，能在很低的濃度下抑制其他微生物的生長。第六張，PPT共五十六頁，創(chuàng)作于2022年6月7 按生物的來源：凡是在動(dòng)、植物或微生物產(chǎn)生的，可按來源命名。如青霉素、赤霉素、蒜素 按化學(xué)結(jié)構(gòu)命名：化學(xué)結(jié)構(gòu)性質(zhì)清楚的，如四環(huán)素（含有四并苯的基本母核），氯四環(huán)素（金霉素），氧四環(huán)素（土霉素）。名稱R1R2微生物來源四環(huán)素H

4、H金色鏈霉菌金霉素HOH金色鏈霉菌土霉素ClH龜裂鏈霉菌 其它：紀(jì)念意義、產(chǎn)地、俗名如正定霉素、井岡霉素、金霉素和土霉素等。（2）抗生素的命名（一般分為三類）第七張，PPT共五十六頁，創(chuàng)作于2022年6月8 HNONSCH3CH3HCOO-H-lactam ring -內(nèi)酰胺 環(huán)Rnatural penicillin R =CH2-CO-第八張，PPT共五十六頁，創(chuàng)作于2022年6月9-內(nèi)酰胺 環(huán)苯甲異噁唑青霉素氨 芐青霉素羧芐青霉素苯氧甲基青霉素第九張，PPT共五十六頁，創(chuàng)作于2022年6月102 抗生素的發(fā)展簡史2.1治療和發(fā)展我國的發(fā)展： 1953年5月1日，建立了第一個(gè)生產(chǎn)青霉素的抗生

5、素工廠（上海第三制藥廠）； 1958年6月3日，最大的抗生素聯(lián)合企業(yè)建成投產(chǎn)（華北制藥廠,石家莊），也是青霉素發(fā)酵總?cè)莘e居世界首位。 目前，多為原料藥基地。但在半合成及成品藥的劑型方面與國外相比差距很大。第十張，PPT共五十六頁，創(chuàng)作于2022年6月11抗生素濫用的重災(zāi)區(qū) 中國是抗生素使用大國，也是抗生素生產(chǎn)大國：年產(chǎn)抗生素原料大約21萬噸，出口3萬噸，其余自用（包括醫(yī)療與農(nóng)業(yè)使用)，人均年消費(fèi)量138克左右(美國僅13克)。 2011年4月7日是世界衛(wèi)生日，首屆合理用藥大會(huì)在這一天召開，恰好契合了世界衛(wèi)生日的主題“抵御耐藥性：今天不采取行動(dòng)，明天就無藥可用”。 第十一張，PPT共五十六頁，創(chuàng)

6、作于2022年6月12“后抗生素時(shí)代”如果不再控制抗生素的濫用狀態(tài)，二十一世紀(jì)人類有可能失去抗生素這個(gè)有利的治療武器，重新回到?jīng)]有抗生素的時(shí)代，所謂“后抗生素時(shí)代”。 后抗生素時(shí)代是倒退，我們可能回到?jīng)]有藥物可使用的狀態(tài)，大量的傳染性疾病將危害人類的身體健康和生命。雖然這是一種悲觀的想法，但悲觀的很有道理，細(xì)菌產(chǎn)生耐藥速度比新藥物開發(fā)的速度快得多，這是一個(gè)確實(shí)的現(xiàn)象。第十二張，PPT共五十六頁，創(chuàng)作于2022年6月133 抗生素的分類可根據(jù)生物來源、作用對(duì)象、化學(xué)結(jié)構(gòu)、作用機(jī)制、生物合成途徑等方面對(duì)抗生素進(jìn)行分類。3.1 根據(jù)抗生素的生物來源分類 (生物學(xué)家)（1）放線菌產(chǎn)生的抗生素：如鏈霉素

7、、四環(huán)類（如四環(huán)素）、大環(huán)內(nèi)酯類（如紅霉素）、多烯類（如制霉菌素） 、放線菌素類（如放線菌素D）等。（其中鏈霉菌屬最多，諾卡氏菌屬、小單孢菌次之）（2）真菌產(chǎn)生的抗生素：如青霉菌屬和頭孢菌屬等分別產(chǎn)生一些很重要的抗生素（青霉素、灰黃霉素、頭孢菌素）。第十三張，PPT共五十六頁，創(chuàng)作于2022年6月14（3）細(xì)菌產(chǎn)生的抗生素：如多粘桿菌、枯草桿菌、芽孢桿菌等。如多粘菌素。（4）植物或動(dòng)物產(chǎn)生的抗生素：從被子植物蒜中制得的蒜素；從動(dòng)物臟器中制得的魚素等。3.2根據(jù)抗生素的作用對(duì)象分類（醫(yī)生、病理學(xué)家）（1）廣譜抗生素：如氨卞青霉素既抑制G+，又抑制G-（2）抗G+的抗生素：如青霉素，（3）抗G-的

8、抗生素：如鏈霉素（3）抗真菌的抗生素：如制霉菌素（4）抗病毒的抗生素：如四環(huán)類抗生素對(duì)立克次氏體及較大病毒有一定作用。（5）抗癌的抗生素：如阿霉素第十四張，PPT共五十六頁，創(chuàng)作于2022年6月153.3根據(jù)抗生素的化學(xué)結(jié)構(gòu)分類（化學(xué)家）較復(fù)雜，目前已確定結(jié)構(gòu)的抗生素習(xí)慣如下分類：（1）-內(nèi)酰胺類抗生素：包括青霉素類，頭孢菌素類等（2）氨基糖苷類抗生素：包括鏈霉素、慶大霉素等（3）大環(huán)內(nèi)脂類抗生素：如紅霉素、麥迪加霉素（4）四環(huán)類抗生素：如四環(huán)素、土霉素（5）多肽類抗生素：如多粘菌素、桿菌肽（6）蒽環(huán)類抗生素：如阿霉素、柔紅霉素（7）喹諾酮類抗生素：如環(huán)丙沙星、諾氟沙星第十五張，PPT共五十六

9、頁，創(chuàng)作于2022年6月163.4 根據(jù)作用機(jī)制分類 此種分類的優(yōu)點(diǎn)：便于進(jìn)行理論研究，有助于了解抗生素影響病原體新陳代謝的哪些環(huán)節(jié)，從而找出治療的規(guī)律，使抗生素的使用更為合理。（1）抑制細(xì)胞壁合成的抗生素：如青霉素。（2）影響細(xì)胞膜功能的抗生素：多烯類抗生素。（3）抑制病原菌蛋白質(zhì)合成的抗生素：四環(huán)素。（4）抑制核酸合成的抗生素：如影響DNA結(jié)構(gòu)和功能的絲裂霉素C。（5）抑制生物能作用的抗生素：如抑制電子轉(zhuǎn)移的抗霉素。第十六張，PPT共五十六頁，創(chuàng)作于2022年6月17第十七張，PPT共五十六頁，創(chuàng)作于2022年6月183.5 根據(jù)抗生素的合成途徑分類（1）氨基酸、肽類衍生物抗生素：如青霉素

10、類、頭孢菌素等寡肽抗生素。（2）糖類衍生物抗生素：如鏈霉素等糖苷類抗生素。（3）以乙酸、丙酸為單位的衍生物抗生素：紅霉素等丙酸衍生物。第十八張，PPT共五十六頁，創(chuàng)作于2022年6月19生產(chǎn)方法： 1、生物合成法： 傳統(tǒng)方法 “工程菌”制造法 細(xì)胞融合技術(shù)法 2、化學(xué)合成法； 3、生物合成加化學(xué)合成法。 4 抗生素的生產(chǎn)工藝第十九張，PPT共五十六頁，創(chuàng)作于2022年6月20 1、生物合成法： 傳統(tǒng)方法 大多數(shù)抗生素是由放線菌和霉菌產(chǎn)生的。菌種是通過從土壤中分離、篩選獲得，一般采用深層通風(fēng)攪拌發(fā)酵罐生產(chǎn)。 傳統(tǒng)方法目前存在很多不足，因此，人們采用基因工程和細(xì)胞融合技術(shù)，對(duì)抗生素產(chǎn)生菌進(jìn)行了改造

11、和重新設(shè)計(jì)，不僅可以制造出許多高效低毒的新型抗生素，還可改革工藝，使抗生素產(chǎn)量成倍地增長。 第二十張，PPT共五十六頁，創(chuàng)作于2022年6月21 “工程菌”制造法 第一次由“工程菌”制造的全新抗生素麥迪紫紅素A，是美國報(bào)道的。他們將產(chǎn)放線紫紅素的部分基因插入產(chǎn)麥迪霉素的放線菌中，構(gòu)建的“工程菌”產(chǎn)生了全新的抗生素。 我國新構(gòu)建的生產(chǎn)丁胺卡那霉素的“工程菌”，就是把?；富蚩寺〉娇敲顾禺a(chǎn)生菌中獲得的。新的“工程菌” 生產(chǎn)的新抗生素毒副作用小，對(duì)耐卡那霉素、慶大霉素致病菌臨床療效顯著。第二十一張，PPT共五十六頁，創(chuàng)作于2022年6月22細(xì)胞融合技術(shù)法 對(duì)抗生素產(chǎn)生菌采用細(xì)胞融合技術(shù)的成果更為

12、突出。橄欖色無孢小單孢菌細(xì)胞融合株抗生素產(chǎn)率比原菌株提高140倍。 目前DNA重組技術(shù)已廣泛用于紅霉素、鏈霉素等20多種抗生素的育種工作，可以預(yù)見不久將來會(huì)有更多的由“工程菌”生產(chǎn)的新型抗生素問世。第二十二張，PPT共五十六頁，創(chuàng)作于2022年6月232、化學(xué)合成法 根據(jù)某種抗生素的化學(xué)組成和結(jié)構(gòu)，通過化學(xué)合成的方法，可生產(chǎn)部分抗生素。 如：氯霉素、磷霉素等。 經(jīng)過化學(xué)合成方法和控制條件的不斷深入研究，越來越多的抗生素可用化學(xué)合成法生產(chǎn)。第二十三張，PPT共五十六頁，創(chuàng)作于2022年6月24 3、生物合成加化學(xué)合成法 許多細(xì)菌逐漸出現(xiàn)了抗藥性，已經(jīng)證實(shí)某些抗藥性因子位于細(xì)菌內(nèi)的質(zhì)粒上，質(zhì)?？梢?/p>

13、在細(xì)菌之間轉(zhuǎn)移，結(jié)果抗性菌日益增多，抗生素療效就越來越低。 為了對(duì)付細(xì)菌的抗藥性，科學(xué)家對(duì)原有的抗生素進(jìn)行了“整容手術(shù)”，細(xì)菌因再無法識(shí)別改頭換面的抗生素而被抑制或殺死。 現(xiàn)在已能使用克隆了?；富虻摹肮こ叹保ù竽c桿菌）高效率的生產(chǎn)半合成抗生素。臨床現(xiàn)在使用的貴重特效藥物先鋒霉素（頭孢菌素類）、氨芐青霉素，就是這類半合成抗生素類藥物。國外已有幾十種這類藥物在實(shí)驗(yàn)室研制成功。第二十四張，PPT共五十六頁，創(chuàng)作于2022年6月25抗生素制備的一般流程圖 菌種孢子制備種子制備發(fā)酵發(fā)酵液預(yù)處理及種子加濾提取及精制成品檢驗(yàn)前體發(fā)酵階段提取階段成品包裝第二十五張，PPT共五十六頁，創(chuàng)作于2022年6月

14、26 5 青霉素概述第二十六張，PPT共五十六頁，創(chuàng)作于2022年6月27青霉素的理化性質(zhì)青霉素本身為一元酸，可與鉀、鈉、鎂、鈣、鋁和銨等化合成鹽類。易溶于水，游離酸易溶于醇、酮、醚、酯等一般有機(jī)溶劑。游離酸或鹽類的水溶液均不穩(wěn)定，極易失去抗菌效力。不耐熱，一般保存于冰箱中，但青霉素鹽的結(jié)晶純品，在干燥條件下可于室溫保存數(shù)年。青霉素的抗菌效力與其分子中的-內(nèi)酰胺環(huán)有關(guān)。第二十七張，PPT共五十六頁，創(chuàng)作于2022年6月28抗菌作用和臨床應(yīng)用青霉素主要抑制G+菌，但對(duì)某些G-菌，螺旋體及放線菌也有強(qiáng)大的抗菌作用，青霉素的抗菌作用與抑制細(xì)胞壁的合成有關(guān)。青霉素臨床上用于治療葡萄球菌傳染癥如腦膜炎、

15、化膿炎、骨髓炎等，溶血性鏈球菌傳染癥如腹膜炎、產(chǎn)褥熱，以及肺炎、淋病、梅毒和炭疽等。第二十八張，PPT共五十六頁，創(chuàng)作于2022年6月29菌種：產(chǎn)黃青霉生長發(fā)育分七個(gè)階段：期：菌絲生長期，適宜做種子；期：青霉素分泌期；期：菌絲體自溶期。5.1青霉素生產(chǎn)菌的特性點(diǎn)青霉第二十九張，PPT共五十六頁，創(chuàng)作于2022年6月30青霉素產(chǎn)生菌的生長過程分生孢子發(fā)芽期菌絲繁殖期脂肪粒形成期脂肪粒減少，小空孢大空孢自溶菌絲生長期青霉素分泌期菌絲自溶期第三十張，PPT共五十六頁，創(chuàng)作于2022年6月第1期：分生孢子萌發(fā)，具有小泡。第2期：菌絲繁殖，嗜堿性，類脂肪小顆粒。第3期：脂肪包涵體，貯藏物，嗜堿性很強(qiáng)。第

16、4期：空泡，嗜堿性減弱，開始產(chǎn)生抗生素。第5期：大空泡，中性染色大顆粒，脂肪包涵體消失，青霉素產(chǎn)量最高。第6期：個(gè)別細(xì)胞自溶，胞內(nèi)無顆粒，釋放氨，pH上升。第7期：菌絲完全自溶，僅有空細(xì)胞壁。發(fā)酵培養(yǎng)下的生長過程及細(xì)胞學(xué)變化第三十一張，PPT共五十六頁，創(chuàng)作于2022年6月鏡檢控制規(guī)定時(shí)間取樣，顯微鏡觀察7 個(gè)時(shí)期的態(tài)變化，控制發(fā)酵。1 4 期為菌絲生長期，3 期的菌體適宜種子。45期為生產(chǎn)期，生產(chǎn)能力最強(qiáng)，通過工程措施，延長此期，獲得高產(chǎn)。第6期到來之前結(jié)束發(fā)酵。第三十二張，PPT共五十六頁，創(chuàng)作于2022年6月帶放補(bǔ)料工6.1青霉素生產(chǎn)流程結(jié)晶器種子罐 1和2米孢子預(yù)處理罐過濾器發(fā)酵罐萃取

17、器蒸發(fā)器工業(yè)鹽提煉工藝藝發(fā) 冷凍干燥孢子 瓊脂斜面酵培養(yǎng)基制備無菌空氣冷至156.青霉素發(fā)酵工藝過程第三十三張，PPT共五十六頁，創(chuàng)作于2022年6月 (1)、生產(chǎn)孢子制備斜面種子：砂土孢子用甘油、葡萄糖、蛋白胨組成的固體培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)，最適溫度25-26 ，培養(yǎng)6-8天，形成單菌落。再傳斜面，培養(yǎng)7天，形成綠色斜面孢子。米孢子：移植到小米或大米固體培養(yǎng)基上，生長7天，25注意：每批孢子必需進(jìn)行嚴(yán)格搖瓶試驗(yàn)，測(cè)定效價(jià)及雜菌情況。6.2 青霉素發(fā)酵工藝過程第三十四張，PPT共五十六頁，創(chuàng)作于2022年6月(2)、種子罐培養(yǎng)工藝一級(jí)種子發(fā)酵：發(fā)芽罐，孢子萌發(fā)，形成菌絲。培養(yǎng)基：葡萄糖，玉米漿，碳酸

18、鈣，玉米油，消沫劑等?？諝饬髁?：3（體積比）；充分?jǐn)嚢?00-350rpm；pH自然，溫度271, 40h二級(jí)種子罐：繁殖罐，大量繁殖。接種量10培養(yǎng)基：葡萄糖、玉米漿，玉米油，消沫劑等。通氣量1:1-1.5；攪拌250-280rpm；pH自然，251。10-14h質(zhì)量：菌絲致密，菌絲粗壯，III期，倍增期6-8h第三十五張，PPT共五十六頁，創(chuàng)作于2022年6月(3)、生產(chǎn)罐培養(yǎng)工藝三級(jí)罐：生產(chǎn)罐；接種量20培養(yǎng)基：花生餅粉，葡萄糖，尿素，硝酸銨，硫代硫酸鈉，苯乙酰胺，CaCO3, 玉米油, 硅油.參數(shù)條件：通氣量1：0.8-1.2；150-200r/min；前60小時(shí):pH6.4-6.6

19、，26；60小時(shí)后: pH6.7, 24。第三十六張，PPT共五十六頁，創(chuàng)作于2022年6月6.3 發(fā)酵培養(yǎng)與過程控制操作方式：反復(fù)分批式發(fā)酵發(fā)酵罐： 100m3，裝料80m3.帶放: 6-10次，帶放量10，間隔24h。發(fā)酵周期：180-220h發(fā)酵過程需連續(xù)流加葡萄糖、硫酸銨以及前體物質(zhì)苯乙酸鹽，補(bǔ)糖率是最關(guān)鍵的控制指標(biāo)，不同時(shí)期分段控制。第三十七張，PPT共五十六頁，創(chuàng)作于2022年6月過程控制補(bǔ)料分批操作控制基質(zhì)濃度前40小時(shí)：培養(yǎng)基中的主要營養(yǎng)物40小時(shí)后：低速連續(xù)補(bǔ)加葡萄糖、 氮源和苯乙酸等，維持一定的最適濃度。半饑餓狀態(tài)：延長合成期，提高產(chǎn)量。碳源占成本12以上，采用糖化液流加,

20、降低成本。糖與6APA結(jié)合形成糖基-6APA，影響青霉素產(chǎn)量。第三十八張，PPT共五十六頁，創(chuàng)作于2022年6月a.流加碳源控制根據(jù)殘?zhí)?、pH、尾氣中CO2和O2含量。 殘?zhí)?.3-0.6左右，pH開始升高時(shí)流加糖。葡萄糖的波動(dòng)范圍較窄，濃度過低使抗生素合成速度減慢或停止，過高則導(dǎo)致呼吸活性下降，甚至引起自溶。(1)培養(yǎng)基第三十九張，PPT共五十六頁，創(chuàng)作于2022年6月b.流加氮源控制玉米漿: 最好，含有多種氨基酸 及其前體苯乙酸和衍生物。補(bǔ)加無機(jī)氮源： 硫酸銨、氨水、尿素 氨基氮濃度：0.01-0.05%。第四十張，PPT共五十六頁，創(chuàng)作于2022年6月c.鹽離子控制無機(jī)鹽：硫、磷、鎂、鉀

21、等。鐵對(duì)青霉素合成有毒，30-40 ug/ml以下。罐壁涂環(huán)氧樹脂保護(hù)層。第四十一張，PPT共五十六頁，創(chuàng)作于2022年6月d.添加青霉素側(cè)鏈前體時(shí)期：合成階段種類：苯乙酸及其衍生物，苯乙酰胺、苯乙胺、苯乙酰甘氨酸毒性：抑制細(xì)胞生長和青霉素合成。策略：低濃度流加濃度：苯乙酸0.1%，苯乙酰胺0.05-0.08%控制：保持供應(yīng)速率略大于生物合成需要。第四十二張，PPT共五十六頁，創(chuàng)作于2022年6月 (2).溫度控制適宜菌絲生長溫度30，分泌青霉素25。20青霉素破壞少，周期很長。變溫控制，不同階段不同溫度。生長階段:較高溫度，縮短生長時(shí)間；生產(chǎn)階段適當(dāng)降低溫度，以利于青霉素合成。前期控制26左

22、右，后期降溫控制24第四十三張，PPT共五十六頁，創(chuàng)作于2022年6月(3). pH控制合成適宜pH6.46.6左右，避免超過7.0直接加酸或堿：自動(dòng)控制流加葡萄糖：恒速；變速，依賴pH變化快慢。pH下降：補(bǔ)加CaCO3、通氨、尿素或提高通氣量pH上升：補(bǔ)加糖、生理酸性物質(zhì)（硫酸銨、油脂）第四十四張，PPT共五十六頁，創(chuàng)作于2022年6月(4). 溶氧控制30飽和度，產(chǎn)率急劇下降； 10，造成不可逆的損害。臨界溶氧濃度：30。通氣比：1：0.81.5 。適宜的攪拌速度:保證氣液混合，提高溶氧調(diào)整攪拌轉(zhuǎn)速:各階段的生長和耗氧量不同。第四十五張，PPT共五十六頁，創(chuàng)作于2022年6月(5).消沫天

23、然油脂：玉米油；化學(xué)消沫劑：泡敵。策略：少量多次。注意：前期不宜多加入，影響呼吸代謝。第四十六張，PPT共五十六頁，創(chuàng)作于2022年6月7 青霉素的提煉工藝過程青霉素不穩(wěn)定，遇酸、堿、熱分解失活水溶液中不穩(wěn)定，非極性溶劑中穩(wěn)定易溶于有機(jī)溶劑，水中溶解度很小青霉素鹽很穩(wěn)定；降解產(chǎn)物具有致敏性防止降解，條件溫和、快速。第四十七張，PPT共五十六頁，創(chuàng)作于2022年6月(1)、預(yù)處理青霉素的存在部位：發(fā)酵液濃度較低：1030Kg/m3含有大量雜質(zhì)：菌體細(xì)胞、核酸、雜蛋白質(zhì)、細(xì)胞壁多糖等、殘留的培養(yǎng)基、色素、鹽離子、代謝產(chǎn)物等目的：濃縮目的產(chǎn)物，去除大部分雜質(zhì)，改變發(fā)酵液的流變學(xué)特征，利于后續(xù)的分離純化過程。預(yù)處理:發(fā)酵液加少量絮凝劑沉淀蛋白第四十八張，PPT共五十六頁，創(chuàng)作于2022年6月(2)、過濾鼓式真空過濾機(jī)過濾：一次濾液：pH6.2-7.2，略渾，棕黃或綠色，蛋白質(zhì)含量0. 5-2.0%。板框式過濾機(jī)過濾：硫酸調(diào)節(jié)pH4.5-5.0，加入0.07%溴代十五烷吡啶，0.07%硅藻土為助慮劑。二次濾液：澄清透明，用于提取（收率90）第