分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室的常規(guī)儀器設(shè)備及有關(guān)操作word版本

1、此文檔來(lái)源于網(wǎng)絡(luò),如有侵權(quán)請(qǐng)聯(lián)系網(wǎng)站刪除分子生物學(xué)試驗(yàn)室的常規(guī)儀器設(shè)備及有關(guān)操作 一、驗(yàn)室的常規(guī)儀器、設(shè)備 一 溫度掌握系統(tǒng)：1. 冰箱: 依據(jù)藥品、試劑及多種生物制劑儲(chǔ)存的需要,必需具備不同控溫級(jí)別的冰箱,最常使用的有：4、-20 、-80冰箱；4適合儲(chǔ)存某些溶液、試劑、藥品等；-20 適用于某些試劑、藥品、酶、血清、配好的抗生素和 DNA、蛋白質(zhì)樣品等；-80 適合某些長(zhǎng)期低溫儲(chǔ)存的樣品、純化的樣品、特別的低溫 處理消化液等的儲(chǔ)存；0-10 的冷柜適合低溫條件下的電泳、層析、透析等試驗(yàn)；2液氮罐：有些試驗(yàn)材料、某些器官組織、細(xì)胞株、菌株及純 化的樣品等,要求速凍和長(zhǎng)期儲(chǔ)存在超低溫環(huán)境下,就

2、需要一個(gè)液 氮罐（ -196）具有經(jīng)濟(jì)、省力和較好地保持細(xì)胞生物學(xué)特性的優(yōu) 點(diǎn)；3培育箱： 37恒溫箱用于細(xì)菌的固體培育和 細(xì)胞培育 ；CO2培育箱適用于培育各種細(xì)胞,可恒定地供應(yīng)肯定量的 CO2（通常 5%）,用來(lái)維護(hù)培育液的酸度（pH值）；37恒溫空氣搖床可進(jìn)行液體細(xì)菌的培育；4. 水浴鍋：用于保溫；25-100 水浴搖床可用于分子雜交試驗(yàn),各種生物化學(xué)酶反應(yīng) 等試驗(yàn)的保溫；25-100 水浴箱用于常規(guī)試驗(yàn)；5. 烘箱：主用于烘干試驗(yàn)器皿,有些需要溫度高些,有些需要溫度低些；用于 RNA方面的試驗(yàn)用具,需要在250烤箱中烘干,有些塑料用具只能在 42-45的烤箱中進(jìn)行烘干；（二）水的凈扮裝

3、置：隨著分子生物學(xué)的飛速進(jìn)展,很多試驗(yàn)對(duì)水純度的要求越來(lái)越高；只供學(xué)習(xí)溝通用此文檔來(lái)源于網(wǎng)絡(luò),如有侵權(quán)請(qǐng)聯(lián)系網(wǎng)站刪除1. 蒸餾水皿：?jiǎn)握羲ｋy以滿(mǎn)意試驗(yàn)要求；雙蒸水、三蒸水配 液,很多試驗(yàn)要去離子水；多次蒸餾水可除去水中揮發(fā)性雜質(zhì),不能完全除去水中溶解的 氣體雜質(zhì)（ Mn2+、Cu2+、Zn2+、Fe3+、Mo ）；2. 離子交換器：去離子水用離子交換法制取的水,稱(chēng)去離子 水；去離子成效好,但不能除去水中的非離子型雜質(zhì),其中常含有 微量的有機(jī)物（樹(shù)脂等）；3超純水：用蒸餾水、離子交換水、反滲透純水做為供水,磁鐵耦合齒輪泵作用使水循環(huán)；用于 酶反應(yīng)、組織和 細(xì)胞培育 等；PCR、PCR氨基酸分析

4、、 DNA測(cè)序、（三）菌消毒設(shè)備：分子生物學(xué)所用大部分試劑,而且試驗(yàn)用 具都應(yīng)嚴(yán)格消毒滅菌；1蒸汽消毒鍋：用于小批量物品的隨時(shí)消毒；大批試驗(yàn)物品、試劑、培育基可使用大型消毒且定時(shí)進(jìn)行消毒 2. 紫外線(xiàn)： 75%乙醇 、0.1%SDS（消毒劑）一些耐高壓、高溫消毒且可用紫外線(xiàn)照耀或乙醇和 SDS浸泡；紫外線(xiàn)照耀使用便利,且很便利,但滅菌成效與距離有關(guān),且 產(chǎn)生臭氧污染安全,用于無(wú)菌室,超凈臺(tái)和塑料用具的消毒；3. 濾器濾膜：不耐高溫、高壓的試劑用其處菌；4. 煮沸消毒：主用于金屬器械和針急需時(shí)采納；（四）計(jì)量系統(tǒng)：1. 稱(chēng)量系統(tǒng)：（各種天平）臺(tái)秤、托盤(pán)天平、鈕力搖擺天平、光電分子天平、精密電子分

5、析天平 2. 液體體積的度量：精：量筒、移液管、微量取液器,粗：刻 度試管、燒杯、錐形瓶3. pH 值測(cè)量：pH計(jì)：測(cè)定溶液中 H+的直接電位的儀器,主要通過(guò)一對(duì)電極,在不同的 pH溶液中產(chǎn)生不同的電動(dòng)勢(shì)用 只供學(xué)習(xí)溝通用pH值表示出來(lái)；此文檔來(lái)源于網(wǎng)絡(luò),如有侵權(quán)請(qǐng)聯(lián)系網(wǎng)站刪除pH試紙：只適用于培育液、酚飽和液、緩沖液或其它試劑溶液 的 pH值的粗略估量；而大部分試劑的配制要求嚴(yán)格的 pH值,需精 確度高（小數(shù)點(diǎn)后兩位）的 pH計(jì)；4. OD 值測(cè)量：光密度、分光光度計(jì)是利用物質(zhì)在可見(jiàn)光和紫 外線(xiàn)區(qū)域中的吸取光譜來(lái)鑒定該物質(zhì)的性質(zhì)及其含量的一種儀器；它是由光源、單色器、吸取池、接收器、測(cè)量外表

6、或顯示屏幕所組 成；OD值是很多溶液中溶質(zhì)定量的便利指標(biāo)之一,通過(guò)所產(chǎn)生的單 色光而測(cè)定某一溶液對(duì)該單色光的吸取值,利用它可進(jìn)行核酸溶液 定量和純度的初步判定；（五）離心機(jī)：離心技術(shù)是討論生物的結(jié)構(gòu)和功能中不行缺少 的一種物理技術(shù)手段；由于各種物質(zhì)在沉淀系數(shù)、浮力、和質(zhì)量等 方面有差異,可利用強(qiáng)大的離心力場(chǎng),使其分別、純化和濃縮；目 前有各種各樣的離心機(jī)；可供少于 0.05ml 到幾升的樣品離心之用；離心技術(shù)應(yīng)用廣泛,包括收集和分別細(xì)胞、細(xì)胞器和生物大分子等；據(jù)其轉(zhuǎn)速的不同,可分為以下幾種類(lèi)型：1. 一般離心機(jī)：最大轉(zhuǎn)速6000 r/m ,最大離心力 6000g 醫(yī)用或臺(tái)式離心機(jī)：是離心機(jī)中最

7、簡(jiǎn)潔而廉價(jià)的,最常用于 收集快速沉降系數(shù)的物質(zhì),如紅細(xì)胞、粗大的沉淀物、酵母菌和細(xì) 菌等；低速冷凍離心機(jī)：主要用于細(xì)胞、細(xì)胞核、細(xì)胞膜和細(xì)菌的 沉淀和收集等；2. 高速離心機(jī)：最大轉(zhuǎn)速25000 r/m ,最大離心力 89000g 有冷凍和常溫兩種,多用于制備和手收集微生物、細(xì)胞碎片、細(xì)胞、大的細(xì)胞器、硫酸銨沉淀物以及免疫沉淀物等；3. 超速離心機(jī)：最大轉(zhuǎn)速9000 r/m ,最大離心力 694000g；4. 臺(tái)式超速離心機(jī)：最大轉(zhuǎn)速 12022r/m ,最大離心力 625000g；（六）超凈工作臺(tái)：內(nèi)有紫外燈、照明燈、仍應(yīng)有酒精燈火焰、75%乙醇等滅菌的設(shè)備,是一種供應(yīng)局部干凈度的設(shè)備；其原

8、理是鼓 風(fēng)機(jī)驅(qū)動(dòng)空氣,經(jīng)過(guò)低、中效的過(guò)濾器后,通過(guò)工作臺(tái)面,使試驗(yàn)操作區(qū)域成為無(wú)菌的環(huán)境；超凈臺(tái)按氣流方向的不同大致有幾種類(lèi) 型：只供學(xué)習(xí)溝通用此文檔來(lái)源于網(wǎng)絡(luò),如有侵權(quán)請(qǐng)聯(lián)系網(wǎng)站刪除側(cè)流式：凈化后氣流,從左側(cè)或右側(cè)通過(guò)工作臺(tái)面,流向?qū)?側(cè),或者從上往下或從下往上流向?qū)?cè),他們都能形成氣流屏障而 保證臺(tái)面無(wú)菌；缺點(diǎn)：在凈化氣流和外邊氣體交界處,可因氣體的流向而顯現(xiàn) 負(fù)壓,使少量的未凈化氣體混入,而造成污染；外流式：氣流是面對(duì)操作人員的方向流淌,從而保證外面氣 體不能混入；缺點(diǎn)：在進(jìn)行有害物質(zhì)試驗(yàn)時(shí),對(duì)操作人員不利,但可采納有 機(jī)玻璃把上半部分遮擋起來(lái),使氣流往下方流出；（七）電泳系統(tǒng)：電泳技術(shù)

9、是檢測(cè)、鑒定各種生物大分子的純 度、含量及描述它們的特點(diǎn),甚至仍是分別、純化、回收和濃縮樣 品的工具之一；核酸和蛋白質(zhì)等都帶有電荷,當(dāng)它們被置于電場(chǎng)中 時(shí),能夠移動(dòng)；電泳裝置由兩部分組成：電源裝置和電泳槽裝置； 電泳裝置：電源需經(jīng)穩(wěn)流通過(guò)穩(wěn)壓器,既能供應(yīng)穩(wěn)固的直流 電,又能輸出穩(wěn)固的電壓；可用于三種：常度穩(wěn)壓電泳儀：輸出電壓0-500v 0-15mA 中度穩(wěn)壓電泳儀：輸出電壓 400-1000v 高度穩(wěn)壓電泳儀：輸出電壓 電泳槽裝置：分兩種1000 以上的電源裝置；水平式電泳槽：一般分為微型電泳槽和大號(hào)水平式電泳槽垂直式電泳槽：分垂直平板電泳槽和圓柱形電泳槽裝置；（八） PCR儀：Polyme

10、rase Chain Reaction 儀,也稱(chēng) DNA熱循 環(huán)儀,基因擴(kuò)增,它是使一對(duì)寡核苷酸引物結(jié)合到正負(fù) DNA鏈上的 靶序列兩側(cè),從而酶促合成拷貝數(shù)百萬(wàn)倍的靶序列 DNA片段,它的每一循環(huán)包括在三種不同溫度進(jìn)行的 合酶催化的延長(zhǎng)反應(yīng)三個(gè)過(guò)程；（九）凝膠成像分析系統(tǒng) : DNA變性,引物復(fù)性, DNA聚對(duì)電泳后含溴乙錠（ EB）核酸樣品的觀(guān)看分析；只供學(xué)習(xí)溝通用此文檔來(lái)源于網(wǎng)絡(luò),如有侵權(quán)請(qǐng)聯(lián)系網(wǎng)站刪除（十）干燥設(shè)備：1. 真空加熱干燥箱：核酸在硝酸纖維素膜和尼龍膜上固定,用 于雜交試驗(yàn)；2. 電泳凝膠干燥箱：電泳后的凝膠進(jìn)行脫水干燥的儀器,一般 可將凝膠干燥到一些玻璃紙上,干燥后的凝膠易

11、于儲(chǔ)存；3. 液氮冷凍干燥：適用于活性蛋白質(zhì)樣品的干燥與結(jié)晶；4. 真空泵：很多試驗(yàn)都需要抽真空；如：乙醇沉淀后核酸樣品 的干燥,電泳凝膠的干燥等；（十一）其他1. 微波爐：便于一些溶液的快速加熱和定溫加熱,電泳瓊脂糖 凝膠配制、溶化等；2. 制冰機(jī)：用于制造大多數(shù)核酸、蛋白質(zhì)的試驗(yàn)操作所需的低 溫環(huán)境,以削減核酸酶或蛋白質(zhì)酶的水解；3. 層析裝置：（色譜分別）是一種分別多組分混合物的有效物 理方法；真空印記系統(tǒng), DNA合成/ 測(cè)序儀：這些都是對(duì)核酸進(jìn)行深化研 究的必備儀器；4. 磁力攪拌器：多角度旋轉(zhuǎn)混勻器、快速振蕩混合器：用于混 合儀器；5. 組織勻漿器：超聲組織及細(xì)胞破裂器,用其進(jìn)行樣

12、品的分別 提純?cè)囼?yàn)；6. 通風(fēng)櫥：很多溶劑能逸出毒氣,必備柜 有有機(jī)玻璃屏蔽；,放射性試驗(yàn)仍要7. 玻璃蒸餾器、電熱加帽、變壓器：用于酚等有機(jī)溶劑的蒸餾；8. Tip 頭、Eppendorf 管：微管移液器 tip 頭（吸液尖）、 Eppendorf 管（微量離心管）可洗滌,硅化消毒后反復(fù)使用；對(duì)一些要求嚴(yán)格的試驗(yàn),如 RNA的提取、儲(chǔ)存等操作,應(yīng)使用新的消毒 tip 頭與 Eppendorf 管；另外仍應(yīng)備有常用規(guī)格的離心管（1000ml、500 ml 、250 ml 、50 ml 、7 ml 等）及 96 孔、24 孔、12 孔、6 孔的細(xì)胞培育 塑料平板等；只供學(xué)習(xí)溝通用此文檔來(lái)源于網(wǎng)絡(luò)

13、,如有侵權(quán)請(qǐng)聯(lián)系網(wǎng)站刪除9. 小型設(shè)備、用具：定時(shí)器、濾膜、保鮮膜、防護(hù)眼鏡鴨嘴鑷、常規(guī)的玻璃或塑料 器皿（包括平皿、試管、燒杯、量瓶、試劑分液漏斗、避光儲(chǔ)存的 試劑應(yīng)使用棕色試劑瓶,如飽和酚、巰基乙醇等）、記號(hào)筆、各種 手套 PE、乳膠、家用、防酸的等）二、本期試驗(yàn)所用主要儀器、 設(shè)備的功能及操作1. 酚的重蒸餾裝置：空氣冷凝式玻璃蒸餾器；一般酚是無(wú)色透亮的結(jié)晶,如呈粉色或黃色,說(shuō)明其中含有酚 的氧化產(chǎn)物,如醌、二酸等,變色的酚不能用于試驗(yàn),因其中的酚氧化物可破壞核酸的磷酸二酯鍵,并引起 須在 160-180重蒸餾以去除能引起 染雜質(zhì),從而得到純潔的酚；DNA鏈的交聯(lián)；使用前必 RNA和 D

14、NA斷裂和交聯(lián)的污2. 磁力攪拌器： 81-2 型恒溫磁力攪拌器將導(dǎo)電溫度表用導(dǎo)線(xiàn)與二芯插頭連接,插入后面的溫度表孔內(nèi),當(dāng)溫度上升到預(yù)先調(diào)整好的度數(shù)時(shí)即自動(dòng)停止加熱（控溫?cái)嚢瑁恢饕糜谖镔|(zhì)的快速攪拌、溶解和混勻；如配制試劑,制備酚的水 飽和液等； 4 3. 蒸餾水器： 1810B自動(dòng)雙重純水蒸餾器,石英管加熱式,本 器的一次及二次蒸餾均有愛(ài)護(hù)裝置,使用安全牢靠,熱繼電器當(dāng)冷 卻水突然中斷或缺水的情形下,即自動(dòng)切斷電源；干簧繼電器掌握 二次蒸餾瓶?jī)?nèi)的水位,其高度應(yīng)以在水位降低時(shí)能自動(dòng)切斷電源為 準(zhǔn),從而達(dá)到自動(dòng)掌握水位的目的；該儀器主要用于制備雙蒸水和三蒸水；4. 離心機(jī)： TGL-16G臺(tái)式

15、高速離心機(jī),最大轉(zhuǎn)速 20220rpm,主 要用于核酸提取時(shí)蛋白質(zhì)的沉淀和有機(jī)相與水相的分層,PCR檢測(cè) 的瞬時(shí)離心；5. 微量取液器：主要用于精確量取微量液體體積和核酸水相的 轉(zhuǎn)移；6. 勻漿器： 5ml、10ml 玻璃勻漿器；主用于組織細(xì)胞的破裂；7. 凝膠成像分析系統(tǒng)只供學(xué)習(xí)溝通用此文檔來(lái)源于網(wǎng)絡(luò),如有侵權(quán)請(qǐng)聯(lián)系網(wǎng)站刪除主用于核酸樣品瓊脂糖凝膠和PCR電泳結(jié)果的紫外觀(guān)看和照像；8. PCR 儀：PTC-200基因擴(kuò)增儀 體外擴(kuò)增核酸的儀器 9. 蒸汽消毒鍋：用于試驗(yàn)用 試劑 、器皿、用具等的滅菌清毒 有電加熱式、電爐加熱式兩種；10. 超凈臺(tái)： JJT-1300 型干凈工作臺(tái),側(cè)流式；原理：吸進(jìn)氣經(jīng)過(guò)初、中級(jí)過(guò)濾皿（無(wú)紡布濾過(guò)）后,再通過(guò) 風(fēng)機(jī)經(jīng)高級(jí)過(guò)濾器（超細(xì)玻璃纖維濾紙制成）而形成干凈空氣；主 要是在局部空氣造成干凈空氣環(huán)境,以使工作區(qū)域中的懸浮粒子及 微生物掌握在最低限度內(nèi)；本臺(tái)操作壓為垂直層流壓,