重組乙型肝炎疫苗課件

1、重組乙型肝炎疫苗 動物細胞工程制藥 制作者：黃玉玲背景乙型肝炎是由病毒引起的，約占所有病毒性肝炎的40，它可以急性發(fā)病，也可以形成慢性肝炎，并進而引發(fā)肝硬化，肝癌，而其中很大一部分人可以是健康的病毒攜帶者，不出現(xiàn)癥狀，但表面抗原（HbsAg）陽性，或者同e抗原（HbeAg）陽性，常常是重要的傳染源。在我國，人口眾多，而這樣的慢性病毒攜帶者約有一億人，是對公共衛(wèi)生的一個重要威脅。乙肝病毒屬DNA病毒科，有三種外殼的基因編碼。乙肝病毒具有五種抗原抗體系統(tǒng)：即表面抗原抗體(HBsAg與抗-HBs)、e抗原抗體(HBeAg與抗-HBe)、核心抗原抗體(HBcAg與抗-HBc)、x抗原抗體(HBxAg與

2、抗-HBx)和HBv-DNA。有臨床意義的主要有HBsAg與抗-HBs、HBeAg與抗-HBe和抗-HBc，簡稱“兩對半”。 臨床主要表現(xiàn)為食欲減退、惡心、厭油、乏力、鞏膜黃染、黃色尿、肝臟腫大、肝區(qū)痛等。 疫苗用法(2)注射部位為上臂三角肌肌內(nèi)。 (1)本疫苗注射時要充分搖勻。 (3)新生兒第1針在出生后24小時內(nèi)注射，1個月及6個月后注射第2、3針;其他人群免疫程序為第0、1、6個月，劑量均為5ug/支。 疫苗制備取國家批準的重組酵母乙型肝炎疫苗的原始菌種，經(jīng)一代擴增，制成生產(chǎn)菌種，逐級擴增后接種于發(fā)酵罐，在適宜溫度和時間內(nèi)進行三級發(fā)酵，收集細胞，經(jīng)破碎，吸附粗提，疏水色譜法精提乙型肝炎表

3、面抗原，再經(jīng)硫氰酸鹽處理，除菌濾過，甲醛滅活，氫氧化鋁吸附等，加入硫柳汞作為防腐劑。 取國家批準的重組CHO乙型肝炎疫苗的細胞株，用靜置培養(yǎng)或旋轉(zhuǎn)法培養(yǎng)細胞，當乙型肝炎表面抗原的分泌量達到每1.0mg/L時，收獲培養(yǎng)液，經(jīng)硫酸銨鹽析，23次密度梯度離心和色譜法純化后，再經(jīng)濃縮，除菌濾過，甲醛滅活，氫氧化鋁吸附等，加硫柳汞作為防腐劑，分裝制成。 鑒別與檢查【鑒別 】 取本品，照中國生物制品規(guī)程酶聯(lián)免疫吸附法，與已知乙型肝炎表面抗體確證其為乙型肝炎表面抗原。 【檢查】照中國生物制品規(guī)程規(guī)定的方法檢查如下項目。 純度 不得低于98%。 氫氧化鋁 每1ml不得過1mg。 硫柳汞 不得過0.01%。 甲

4、醛 不得過0.01%。 異常毒性 取本品，依法檢查，應(yīng)符合規(guī)定。 熱原 取本品，依法檢查，應(yīng)符合規(guī)定。 無菌 取本品，用直接接種法檢查，應(yīng)符合規(guī)定。 【效價測定】取本品，照中國生物制品規(guī)程測定，應(yīng)符合規(guī)定。 酵母乙型肝炎疫苗的ED50不得過1.5g。體外相對效力試驗抗原含量與參比苗的抗原比值不低于0.5。 CHO乙型肝炎疫苗的ED50與參比苗的ED50比值不低于1.0。 【類別】亞單位疫苗。 【規(guī)格】酵母乙型肝炎疫苗 0.5ml:5g CHO乙型肝炎疫苗 1ml:10g 【貯藏與效期】在28的暗處保存。有效期2年。 （一）釀酒酵母 1982年Valenzuela首先在釀酒酵母中成功表達乙型肝炎

5、病毒表面抗原（HBsAg），1986年9月美國默克公司的重級酵母乙肝疫苗首次取得專利并得到美國FDA的批準。1989年7月比利時史克比成公司的另一重組酵母乙肝炎疫苗也取得專利。目前重組酵母乙肝疫苗的生產(chǎn)廠家除默克公司，史克公司外，我國北京天壇生物，深圳康泰公司也大量生產(chǎn)該種疫苗。其優(yōu)點為：酵母為低等真核微生物，易于在營養(yǎng)成份簡單的培養(yǎng)基中高密中發(fā)酵培養(yǎng)，利用工業(yè)化生產(chǎn)，表達量高，目前世界上大規(guī)模生產(chǎn)和上市的疫苗大多數(shù)由該表達系統(tǒng)制備而成。 （三） CHO疫苗本疫苗系用基因工程技術(shù)將乙型肝炎表面抗原基因片段重組到中國倉鼠卵巢細胞(CHO)內(nèi)，通過對細胞培養(yǎng)增殖，增殖分泌乙肝表面抗原(HBsAg)

6、于培養(yǎng)液中，經(jīng)純化加佐劑氫氧化鋁后制成。疫苗外觀有輕微乳白色沉淀。 免疫效果新生兒（1） 母嬰傳播阻斷保護率：應(yīng)用6批國產(chǎn)量5 g酵母疫苗對163例HbsAg，HbeAg雙陽性母親的新生兒進行母嬰傳播阻礙斷效果考核，結(jié)果保護率在81.48-92.07%之間，遠高于文獻報道的10 g（59.2%）和20 g（74.3%）血源乙肝疫苗,與30 g血源乙肝疫苗的保護率(85.1%)相當,而進口5 g M苗(46例,)10 gA苗(58例)和10 g S酵母疫苗(30例)的保護率分別為90.33%、86.59%和92.58%。表明國產(chǎn)酵母疫苗免疫效果達到國外同類產(chǎn)品和30 g國產(chǎn)血源乙肝疫苗的保護水平

7、。 2） 抗體GMT：未發(fā)現(xiàn)第一針免后3、9、12月時，HbsAg、HbeAg雙陽性孕婦所生新生兒的抗體GMT與HbsAg單陽性及健康孕婦所生新生兒抗體GMT有顯著差異。 小學生： （1） 抗體陽性率：第一針免后1年時，進口酶母疫苗，國產(chǎn)酵母疫苗和國產(chǎn)CHO疫苗抗體陽性率在第一針免疫后3、9、12月均無顯著差異。 （2） 抗體CMT比較：第一針免后一年時，進口酶母疫苗（10 g）和國產(chǎn)CHO疫苗（10 g）抗體GMT峰值較高，國產(chǎn)酵母疫苗（5 g）較低。 免疫持久性 對應(yīng)用0、1、6月程序免疫的小學生進行了隨訪觀察。隨訪年及3年時，2批國產(chǎn)酵母疫苗具有保護性抗體（10mIU/ml）的陽轉(zhuǎn)率分別

8、為81.48%；68.66%和92.11%；74.14%，而進口A和M疫苗分別為90.38%；69.56%和93.10%；78.05%。2批國產(chǎn)酵母疫苗抗體GMT分別為123.99；146.10和92.11；83.52，A和M疫苗分別為120.56；67.07和145.75；74.62。 對應(yīng)用0、1、2月程序免疫的400名小學生進行了免后4年的隨訪觀察，結(jié)果3批國產(chǎn)酵產(chǎn)疫苗陽性率分別為87.50%；77.33%；79.49%，而對照M（5 g）疫苗為91.89,抗體GMT分別為：65.57；71.40；59.20和74.84。由抗體峰值6月至4年時，3批國產(chǎn)疫苗抗體陰轉(zhuǎn)率分別為7.2；5.2

9、6和13.79%，對照M苗為5.17%。無論抗體陽性一率，抗體GMT以及4年抗體陰轉(zhuǎn)率，3批國產(chǎn)疫苗和M苗間增無顯著差異。 我們最近隨該結(jié)果表明，2批國產(chǎn)酵母乙肝疫苗免后5年時抗體陽性率已降至70%以下，而同期血源乙肝抗體陽性率在81-69%之間。 結(jié)果表明：國產(chǎn)酵母重組乙肝疫苗的近期免疫效果達到了進口酵疫苗的免疫水平，但抗體陽性率和抗體GMT下降較快，考慮當前乙肝疫苗供應(yīng)充足，酵母疫苗的加強接種應(yīng)提到議事日程。 （二）治療性疫苗 1） 現(xiàn)有疫苗增加前S基因或替換現(xiàn)有鋁佐劑 研究開發(fā)植物來源、細胞因子、人工合成和可生物降解的高分子聚合物等佐劑，目的在于提高細胞免疫效果，國外已有制品進行臨床研究。 2） DNA疫苗：可以肌肉細胞內(nèi)表達乙肝表面抗菌原，誘導細胞免疫應(yīng)答，同時具有長期表達抗原，可減少加強免疫及成本低，儲存方便的特點。 3） 增大劑量酵母疫苗（10 g/支）的生產(chǎn)： 我國現(xiàn)階段生產(chǎn)和使用的酵母乙肝疫苗均為5 g/支，由于以下原因：、實際應(yīng)用反映5 g酵母疫苗的抗體陽性率和滴度較低。、我們對接種5 g疫苗的120例成人進行檢測，發(fā)現(xiàn)免后抗體陽性率和滴度較低，第二針免后1個月時抗體陽性率為70.00%，抗體GMT為9.83；完成全程免疫后1個月時抗體陽性率為80.77%，抗體GMT為151.4