細(xì)菌形態(tài)學(xué)檢查

1、關(guān)于細(xì)菌形態(tài)學(xué)檢查第一張，PPT共二十五頁，創(chuàng)作于2022年6月兩個(gè)分隔的世界微生物人員的無奈標(biāo)本采集不合格有些病原菌難以生長(zhǎng)或生長(zhǎng)周期長(zhǎng)不是所有細(xì)菌都能做藥敏試驗(yàn)不是所有培養(yǎng)出的細(xì)菌都是致病菌沒有培養(yǎng)出細(xì)菌不代表沒有感染不是所有細(xì)菌或所有藥物都有判斷標(biāo)準(zhǔn)臨床醫(yī)生不主動(dòng)聯(lián)系試驗(yàn)室人員臨床醫(yī)生的抱怨苛養(yǎng)菌檢出率低 結(jié)果重復(fù)性差報(bào)告速度慢感染菌與污染菌不易區(qū)分藥敏結(jié)果與治療反應(yīng)存在差第二張，PPT共二十五頁，創(chuàng)作于2022年6月關(guān)注微生物報(bào)告時(shí)效性問題操作最簡(jiǎn)單費(fèi)用最低 標(biāo)本直接涂片用時(shí)最短 顯微鏡檢測(cè)結(jié)果最直觀 可在第一時(shí)間向臨床報(bào)告鏡下所見，醫(yī)生根據(jù)鏡檢結(jié)果可作初步診斷，并以此進(jìn)行針對(duì)性用藥。

2、第三張，PPT共二十五頁，創(chuàng)作于2022年6月主要內(nèi)容標(biāo)本涂片制作方法常用染色方法及技巧如何閱片第四張，PPT共二十五頁，創(chuàng)作于2022年6月標(biāo)本涂片制作方法痰液： 棉簽挑取干酪樣或膿性痰部分0.05-0.1ml，均勻涂抹成卵圓形痰 膜（約2cm長(zhǎng)），每張玻片只涂一份標(biāo)本膿液：同痰涂片大便：取粘液便或血便少量均勻涂布玻片，不可過厚無菌體液：標(biāo)本足量，1ml，離心或甩片集菌后涂片(3000r/min 15min） 標(biāo)本量少，直接涂片病灶組織或干酪塊：先用組織研磨器磨碎后再涂片，大小厚度同痰涂片， 注意絲狀真菌 第五張，PPT共二十五頁，創(chuàng)作于2022年6月質(zhì)量控制涂片的厚薄以鏡下見到單層細(xì)胞為宜

3、染色結(jié)果 細(xì)胞核、漿清晰，胞內(nèi)吞噬物清楚可見革蘭染色陰、陽性分明 涂片的制備水平及染色的質(zhì)量，直接影響到鏡檢的結(jié)果第六張，PPT共二十五頁，創(chuàng)作于2022年6月標(biāo)本染色方法及技巧根據(jù)檢測(cè)目標(biāo)的不同選擇最適合的染色方法病原體染色方法細(xì)菌、真菌革蘭染色真菌10%KOH、乳酸酚棉藍(lán)新型隱球菌墨汁染色結(jié)核分枝桿菌抗酸染色、熒光染色奴卡菌弱抗酸染色耶氏肺孢子菌六胺銀染色細(xì)胞壁缺陷菌吖啶橙染色第七張，PPT共二十五頁，創(chuàng)作于2022年6月革蘭染色涂片固定 待涂片干后加熱固定，火焰固定時(shí)菌膜朝上，以中 等速度通過火焰3此即可（溫度不宜過高，以防菌體蛋白 變性，影響染色結(jié)果），也可用乙醇或甲醇固定。染色 龍膽

4、紫 10s 水洗 甩干 碘液 10s 水洗 甩干 脫色液 10-20s 水洗 甩干 沙黃 10s 水洗 待干鏡檢 油鏡下觀察，紫色革蘭氏陽性 紅色革蘭氏陰性 第八張，PPT共二十五頁，創(chuàng)作于2022年6月革蘭染色注意事項(xiàng)注意取材部位，涂片的厚薄。染色時(shí)間應(yīng)視標(biāo)本種類、涂片厚薄調(diào)整，婦科白帶標(biāo)本染色時(shí)間應(yīng)燒延長(zhǎng)（10s）,以獲得更好的染色效果。脫色不宜過度。固定不可用酒精燈直接加熱，避免影響染色效果。染液用完后及時(shí)改上蓋子，避免揮發(fā)。被檢菌的培養(yǎng)條件、培養(yǎng)基條件、菌齡的不同影響染色效果，如培養(yǎng)時(shí)間過長(zhǎng)，革蘭陽性菌可能染成陰性。1824小時(shí)為宜。某些菌存在染色困難，不易脫色的情況，出現(xiàn)染色不均，陰

5、陽不定（某些G+b、鮑曼不動(dòng)桿菌等）。注意生物安全，自我防護(hù)。第九張，PPT共二十五頁，創(chuàng)作于2022年6月抗酸染色涂片固定 同革蘭染色染色 石碳酸復(fù)紅 10min 水洗 甩干 酸性酒精 1-2min 水洗 甩干 （必要時(shí)可重復(fù)） 亞甲基藍(lán) 30s 水洗 待干 合格的片子肉眼觀察痰膜呈亮藍(lán)色，無紅色斑塊鏡檢 抗酸菌呈紅色，背景及其他菌呈藍(lán)色第十張，PPT共二十五頁，創(chuàng)作于2022年6月第十一張，PPT共二十五頁，創(chuàng)作于2022年6月抗酸染色注意事項(xiàng)染色時(shí)避免玻片上的染液干燥直接涂抹的痰膜厚薄適宜，以透過痰膜看報(bào)紙上的5號(hào)字跡較模糊為適宜的厚度香柏油能溶解復(fù)紅染料，使萋-尼氏染色褪色，并且容易干

6、燥凝結(jié)，對(duì)油鏡頭造成傷害，故避免使用香柏油，應(yīng)使用專用油鏡油酸性酒精用盡，可自制5%的鹽酸酒精作為脫色液有時(shí)同一個(gè)抗酸菌體上，紅色的深淺亦有不同，鏡檢時(shí)注意冬季室溫過低，染色時(shí)間適當(dāng)延長(zhǎng)試劑用完后及時(shí)蓋好，避免揮發(fā)注意生物安全，自我防護(hù)第十二張，PPT共二十五頁，創(chuàng)作于2022年6月墨汁染色標(biāo)本（腦脊液）離心取沉淀涂片在標(biāo)本涂片處滴加1滴墨汁，加蓋玻片在低倍鏡下找有莢膜的菌細(xì)胞，轉(zhuǎn)高倍或油鏡確認(rèn)結(jié)果：新型隱球菌可見寬厚透亮的莢膜，細(xì)胞壁明顯，有時(shí)有出芽現(xiàn)象，背景黑色 注意事項(xiàng) 腦脊液與墨汁的最適比例，墨汁太多影響觀察 腦脊液離心后涂片，離心10-30min 痰液、支氣管灌洗液均可作為隱球菌的檢

7、測(cè)標(biāo)本，防止漏檢第十三張，PPT共二十五頁，創(chuàng)作于2022年6月乳酸酚棉藍(lán)染色在玻片上滴加1滴乳酸酚棉藍(lán)染液剪一段約1cm長(zhǎng)的透明膠帶，將一端貼在棉拭子木棒的一端，形成旗幟樣將膠帶粘性一面按在菌落表面，將菌絲粘在膠帶上并平放進(jìn)入染液，取下木棒，再膠帶表面再滴加一滴染液，蓋上蓋玻片使用顯微鏡在低倍鏡、高倍鏡或油鏡下觀察真菌形態(tài) 第十四張，PPT共二十五頁，創(chuàng)作于2022年6月科茲洛夫斯基染色涂片，可混合大腸桿菌做對(duì)比，干燥、固定滴加2%沙黃水溶液，略加熱，使之冒蒸汽，約30s1min后水洗1%孔雀綠染液復(fù)染23min，也可用堿性美藍(lán)染色12min吸水紙吸干后鏡檢結(jié)果 布氏桿菌呈淡紅色球桿菌，其它

8、菌或細(xì)胞呈綠色或藍(lán)色第十五張，PPT共二十五頁，創(chuàng)作于2022年6月六胺銀染色涂片固定染色 1%高碘酸，氧化10min，流水沖洗 2%鐵明礬 10min,流水沖洗 玻片放入60預(yù)熱20min的工作液中40min左右，每5min觀察 一次，至涂片呈淡褐色，流水沖洗 0.2%氯化金調(diào)色35min，流水沖洗 2%硫代硫酸鈉固定3min，流水沖洗 置60烤箱內(nèi)烤干，封片結(jié)果 油鏡下肺囊蟲包囊呈圓形、卵圓形或不規(guī)則形，包囊呈黑色第十六張，PPT共二十五頁，創(chuàng)作于2022年6月質(zhì)量控制每天質(zhì)控與標(biāo)本同步進(jìn)行一年一次人員比對(duì)，以當(dāng)次比對(duì)職稱最高人員結(jié)果為參考標(biāo)準(zhǔn)染色方法質(zhì)控菌株結(jié)果革蘭染色ATCC25923

9、（金黃色葡萄球菌）ATCC25922（大腸埃希菌）紫色紅色抗酸染色ATCC14468（恥垢分枝桿菌）ATCC25922（大腸埃希菌）紅色藍(lán)色第十七張，PPT共二十五頁，創(chuàng)作于2022年6月閱片第十八張，PPT共二十五頁，創(chuàng)作于2022年6月如何閱片標(biāo)本合格與否的判定感染的確認(rèn)（炎癥細(xì)胞）炎癥性質(zhì)的鑒別（單個(gè)核、分葉核或嗜酸細(xì)胞）感染性質(zhì)鑒別（細(xì)菌、真菌、螺旋體、寄生蟲等）微生態(tài)失衡與否及程度（菌群失調(diào)）可疑致病菌的確認(rèn)（根據(jù)微生物與炎性細(xì)胞的關(guān)系）第十九張，PPT共二十五頁，創(chuàng)作于2022年6月首先判斷標(biāo)本合格與否開放性標(biāo)本（痰液、尿液、傷口標(biāo)本等）肉眼觀察（痰液粘稠、膿性、血性）根據(jù)鏡下細(xì)胞

10、種類，數(shù)量及細(xì)菌種類判斷上皮細(xì)胞多，炎癥細(xì)胞少，多不合格第二十張，PPT共二十五頁，創(chuàng)作于2022年6月強(qiáng)烈提示感染的鏡下現(xiàn)象吞噬現(xiàn)象 包括中性粒細(xì)胞的非特異性吞噬和巨噬細(xì)胞的特異性吞噬，與粘附區(qū)別第二十一張，PPT共二十五頁，創(chuàng)作于2022年6月包裹現(xiàn)象 有些病原微生物自身具有抗吞噬能力（莢膜），炎性細(xì)胞不能將 其吞噬，而是包裹起來，形成膿球第二十二張，PPT共二十五頁，創(chuàng)作于2022年6月伴行現(xiàn)象 未被炎性細(xì)胞包裹的病原菌分布在炎性細(xì)胞周圍，需與污染菌鑒別 第二十三張，PPT共二十五頁，創(chuàng)作于2022年6月建議對(duì)大家公認(rèn)有臨床致病意義的細(xì)菌：結(jié)核分枝桿菌、非結(jié)核分枝桿菌、奴卡菌、白喉棒狀桿菌、隱球菌等一經(jīng)檢出應(yīng)立刻報(bào)臨床。對(duì)來自無菌部位的標(biāo)本并排除污染的鏡下細(xì)菌一經(jīng)檢出立刻報(bào)臨床。呼吸道及其他污染部位的條件致病菌（肺炎鏈球菌、嗜血桿菌、卡他莫拉菌銅綠假單胞菌、不動(dòng)桿菌等）