化藥二部品種紫杉醇注射液

1、新增紫杉醇注射液ZishanczhusheyePaaxel Injection本品為紫杉醇加適量助溶劑和穩(wěn)定劑制成的滅菌溶液。含紫杉醇（C47H51NO14）應(yīng)為標(biāo)示量的 90.0%110.0%?！拘誀睢勘酒窞闊o(wú)色或淡黃色的澄明粘稠的液體?！捐b別】 在含量測(cè)定項(xiàng)下的色譜圖中，供試品溶液主峰的保留時(shí)間應(yīng)與對(duì)照品溶液主峰的保留時(shí)間一致。【檢查】值 取本品 1ml，加生理鹽水稀釋至 20ml，依法測(cè)定（附錄 VI H），值應(yīng)為 3.05.0。有關(guān)物質(zhì) 取本品，加乙醇制成每 1ml 中約含 0.5mg 的溶液，作為供試品溶液；精密量取適量，分別加乙醇稀釋成每 1ml 中約含 2.5g、0.5g 的溶液

2、，作為對(duì)照溶液和對(duì)照溶液；另取紫杉醇、紫杉醇雜質(zhì) A(三杉尖寧堿)、紫杉醇雜質(zhì) B(7-表 10-去乙?；仙即?與紫杉醇雜質(zhì) C（7-表-紫杉醇）對(duì)照品適量，用乙醇溶解并稀釋制成每 1ml 含紫杉醇 0.5mg、紫杉醇雜質(zhì) A、紫杉醇雜質(zhì) B 各 2.5g 與紫杉醇雜質(zhì)C 為 25g 的溶液作為系統(tǒng)適用性溶液。照高效液相色譜法（附錄 V D）測(cè)定，用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑（柱長(zhǎng)為 250mm）；以乙腈-水為相進(jìn)行梯度洗脫，初始相為乙腈-水（40：60），洗脫至主峰出完（約35 分鐘），然后以每分鐘 1.6%的速度增加乙腈的比例，25 分鐘后，乙腈的比例增至 80%，再以每分鐘 4%的速

3、度降低乙腈的比例，10 分鐘后，乙腈的比例降至 40%，保持此比例 10分鐘；流速為 1.5ml/min；為 30；檢測(cè)波長(zhǎng)為 227nm。取系統(tǒng)適用性溶液和對(duì)照溶液各 10l 注入液相色譜儀，紫杉醇峰與紫杉醇雜質(zhì) B 峰之間的分離度應(yīng)大于 1.2，對(duì)照溶液信噪比應(yīng)大于 10。取對(duì)照溶液10l 注入液相色譜儀，調(diào)節(jié)檢測(cè)靈敏度，使主成分色譜峰的峰高約為滿(mǎn)量程的 10%20%，精密量取供試品溶液和對(duì)照溶液各 10l，分別注入液相色譜儀，供試品溶液色譜圖中相對(duì)保留時(shí)間 0.12 分鐘以前的色譜峰不計(jì)，保留時(shí)間在紫杉醇雜質(zhì)C 之后的色譜峰不積分，供試品溶液色譜圖中雜質(zhì)峰，紫杉醇雜質(zhì) A（校正因子為 1

4、.26）及其他單個(gè)雜質(zhì)峰面積均不得大于對(duì)照溶液的主峰面積（0.5），各雜質(zhì)的峰面積的和不得大于對(duì)照溶液的主峰面積的 4 倍（2.0%）。細(xì)菌內(nèi)毒素 取本品，以細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水至少稀釋至每 1ml 中含紫杉醇 0.15mg 的濃度后，依法檢查（附錄 XI E），每 1mg 紫杉醇中含內(nèi)毒素的量應(yīng)小于 0.4EU。其他 應(yīng)符合注射劑項(xiàng)下有關(guān)的各項(xiàng)規(guī)定（附錄 I B）?！竞繙y(cè)定】照高效液相色譜法（附錄 V D）測(cè)定色譜條件和系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 用十八烷基硅烷為填充劑；以甲醇-水-乙腈（23：41：36）為相，檢測(cè)波長(zhǎng)為 227nm。取有關(guān)物質(zhì)項(xiàng)下系統(tǒng)適用性溶液 10l 注入液相色譜儀，紫杉醇峰與紫杉

5、醇雜質(zhì)A、B 峰的分離度應(yīng)1.0。測(cè)定法 用內(nèi)容量移液管，精密量取本品 2ml，置 100ml 量瓶中，加乙醇稀釋至刻度，搖勻，精密量取 10l 注入液相色譜儀，色譜圖；另取紫杉醇對(duì)照品適量，精密稱(chēng)定，同法測(cè)定。按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算，即得?！绢?lèi)別】 同紫杉醇?！疽?guī)格】（1）5ml：30mg（2）10ml：60mg 16.7ml：100mg【貯藏】遮光，密閉，25以下保存。關(guān)于中國(guó)藥典 2010 年版紫杉醇注射液質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)修訂的說(shuō)明紫杉醇注射液為抗腫瘤藥，用于轉(zhuǎn)移性癌和。研究表明對(duì)肺癌、食管癌也有一定療效。本品為紫杉醇加適量的助溶劑和穩(wěn)定劑制成的滅菌溶液。國(guó)家局上查詢(xún)紫杉醇的生產(chǎn)企業(yè)見(jiàn)表 1。表

6、1：紫杉醇生產(chǎn)企業(yè)批準(zhǔn)文號(hào)生產(chǎn)企業(yè)國(guó)藥準(zhǔn)字H20073211國(guó)藥準(zhǔn)字H20073210國(guó)藥準(zhǔn)字H20057404山東藥業(yè)12國(guó)藥準(zhǔn)字H20067715浙江九旭藥業(yè)3國(guó)藥準(zhǔn)字H20067522國(guó)藥準(zhǔn)字H20067345國(guó)藥準(zhǔn)字H20067344哈爾濱博萊制藥4江蘇制藥5國(guó)藥準(zhǔn)字H20067186國(guó)藥準(zhǔn)字H20067037國(guó)藥準(zhǔn)字H20067039國(guó)藥準(zhǔn)字H20067038河北醫(yī)學(xué)生物醫(yī)學(xué)工程中心6藥業(yè)7國(guó)藥準(zhǔn)字H20066640雙鷺?biāo)帢I(yè)8國(guó)藥準(zhǔn)字H20066558海南豪創(chuàng)藥業(yè)9國(guó)藥準(zhǔn)字H20066442國(guó)藥準(zhǔn)字H20066089國(guó)藥準(zhǔn)字H20066090黑龍江福和華星制藥10海南新世通制藥11國(guó)

7、藥準(zhǔn)字H20065972重慶華立控股藥業(yè)華源世紀(jì)藥業(yè)12國(guó)藥準(zhǔn)字H20065513國(guó)藥準(zhǔn)字H20065071國(guó)藥準(zhǔn)字H20065072國(guó)藥準(zhǔn)字H20064300國(guó)藥準(zhǔn)字H20064299國(guó)藥準(zhǔn)字H20043121國(guó)藥準(zhǔn)字H2004312213?？谠扑?4揚(yáng)州奧賽康藥業(yè)15國(guó)藥準(zhǔn)字H20063787國(guó)藥準(zhǔn)字H20063662國(guó)藥準(zhǔn)字H10980066悅康藥業(yè)16制藥17國(guó)藥準(zhǔn)字H20063169海口奇力制藥18國(guó)藥準(zhǔn)字H20059962哈藥生物工程19國(guó)藥準(zhǔn)字H20059582世橋生物制藥20國(guó)藥準(zhǔn)字H20059513山西泰盛制藥21國(guó)藥準(zhǔn)字H20059378國(guó)藥準(zhǔn)字H20058719國(guó)藥準(zhǔn)字

8、H20053001浙江海正藥業(yè)22揚(yáng)子江藥業(yè)山西金晶藥業(yè)23國(guó)藥準(zhǔn)字H20058655國(guó)藥準(zhǔn)字H20057879國(guó)藥準(zhǔn)字H20057878國(guó)藥準(zhǔn)字H20058368國(guó)藥準(zhǔn)字H20058367哈爾濱三聯(lián)藥業(yè)24黃石藥業(yè)藥業(yè)25漢方制藥26國(guó)藥準(zhǔn)字H20057375海南中化聯(lián)合制藥工業(yè)27國(guó)藥準(zhǔn)字H20057065萬(wàn)樂(lè)藥業(yè)28國(guó)藥準(zhǔn)字H20056879黃石飛云制藥29國(guó)藥準(zhǔn)字 H20056466湘北曼制藥30國(guó)藥準(zhǔn)字 H20055932重慶萊美藥業(yè)31國(guó)藥準(zhǔn)字H20054814大東方藥業(yè)公司32國(guó)藥準(zhǔn)字H20053837國(guó)藥準(zhǔn)字H20053006國(guó)藥準(zhǔn)字H20053005國(guó)藥準(zhǔn)字H20046119

9、山西普德藥業(yè)33三精升和制藥34國(guó)藥準(zhǔn)字H20044761海王藥業(yè)35國(guó)藥準(zhǔn)字H20043045國(guó)藥準(zhǔn)字H10980170國(guó)藥準(zhǔn)字H19990269?？谑兄扑帍S36生物技術(shù)制藥公司37國(guó)藥準(zhǔn)字H10980069協(xié)和藥廠38國(guó)藥準(zhǔn)字H19994040太極太極制藥39國(guó)藥準(zhǔn)字H20020071()華聯(lián)制藥廠40一、樣品和資料收集情況：對(duì)各企業(yè)均用特快專(zhuān)遞發(fā)了文，個(gè)別企業(yè)無(wú)反饋信息，部分企業(yè)長(zhǎng)期不生產(chǎn)，無(wú)樣品。提供樣品和資料情況見(jiàn)表 2：表 2：各企業(yè)資料和樣品提供情況生產(chǎn)企業(yè)規(guī)格批號(hào)資料與樣品5ml:30mg 5ml:30mg 10ml:60mg 5ml:30mg 5ml:30mg5ml:30mg

10、0802261080227108022810604070706050801011均有2協(xié)和均有3哈藥5ml:30mg20070901均有5ml:30mg 5ml:30mg 5ml:30mg 16.7ml:100mg 16.7ml:100mg 5ml:30mg 5ml:30mg 16.7ml:100mg 16.7ml:100mg5ml:30mg200703020801010802010710010712010610010801010801080612010801244漢方均有5江蘇奧賽康均有6重慶萊美均有7?？谥扑幘?山西5ml:30mg20071201均有9河北醫(yī)學(xué)5ml:30mg05020

11、1均有10湘北曼5ml:30mg071102均有5ml:30mg5ml:30mg 5ml:30mg06120107060307060211華源均有12三升精和5ml:30mg080101均有5ml:30mg 5ml:30mg 5ml:30mg16.7ml:100mg0801050107123101080113010801250113揚(yáng)子江均有14海南新世通5ml:30mg20080301均有5ml:30mg5ml:30mg200709012008020115海王藥業(yè)均有16海南中化聯(lián)合無(wú)樣品，有資料17公允藥業(yè)無(wú)樣品，有資料18黑龍江福和華星無(wú)樣品，有資料19浙江九旭無(wú)樣品，有資料20山西泰盛

12、無(wú)樣品，有資料21江蘇有對(duì)照品和敷料,無(wú)樣品22重慶華立品種注銷(xiāo)23山東無(wú)樣品和資料24哈爾濱三聯(lián)無(wú)樣品和資料25黃石藥業(yè)無(wú)樣品和資料26萬(wàn)樂(lè)藥業(yè)無(wú)制劑,有資料,敷料,原料27悅康藥業(yè)有工藝，無(wú)樣品28哈爾濱博萊制藥5ml:30mg無(wú)樣品，有資料二、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)修訂說(shuō)明共收集到15個(gè)廠家的樣品。各企業(yè)的生產(chǎn)工藝基本相同（見(jiàn)表3），均由紫杉醇加輔料聚氧乙基蓖麻油和乙醇制成，投料比例也基本相同，其中乙醇為助溶劑，聚氧乙基蓖麻油為助溶劑和穩(wěn)定劑，部分企業(yè)還加入了枸櫞酸作為保護(hù)劑，抗氧化，或作為調(diào)節(jié)劑。值的注意的是有文獻(xiàn)1聚氧乙烯蓖麻油(Cremor EL)：無(wú)水乙醇( V V = 5050) 溶液,稀釋

13、至0.31.2 gL - 1靜脈注射，處方中的Cremor EL 會(huì)引起體內(nèi)組織胺,給藥后數(shù)分鐘,造成部分出現(xiàn)藥物性皮疹、呼吸急促、支氣管痙攣、低血壓等過(guò)敏反應(yīng)。所以同時(shí)需要注射激素類(lèi)藥物降低不良反應(yīng)。此外注射液中的Cremor EL 與聚氯乙烯管和輸液袋接觸可浸提出大量的塑化劑鄰苯二甲酸二乙基乙酯(DEHP) ,引起毒性。所以各企業(yè)對(duì)所使用的輔料聚氧乙基蓖麻油的質(zhì)量應(yīng)給予關(guān)注，建議藥典組織針對(duì)輔料聚氧乙烯蓖麻油的質(zhì)量控制問(wèn)題，制定方案。目前中國(guó)藥典2005版二部沒(méi)有收載輔料聚氧乙基蓖麻油，本擬訂標(biāo)準(zhǔn)暫不對(duì)此項(xiàng)進(jìn)行研究。本品有三種規(guī)格：30mg/5ml、100mg/16.7ml、60mg/10

14、ml。表3： 各企業(yè)工藝及產(chǎn)品規(guī)格企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)工藝規(guī)格紫杉醇：30g，聚氧乙烯蓖麻油：2457ml，無(wú)水乙5ml：30mg醇 2500ml，乳酸：43.3ml。華1WS1-(X-026)-2001Z素紫杉醇：60g，聚氧乙烯蓖麻油：4913ml，無(wú)水乙16.7ml：100mg醇 5000ml，乳酸：86.7ml。紫杉醇：30mgg，聚氧乙烯蓖麻油：2625mg，枸櫞協(xié)2WS1-(X-026)-2001Z5ml：30mg和酸：10mg；無(wú)水乙醇加至 5ml。哈藥集團(tuán)生物工程紫杉醇：60g，聚氧乙烯蓖麻油：5270g，無(wú)水乙醇3YBH408620055ml：30mg4970g，總量 10000ml。紫

15、杉醇：30g，聚氧乙烯蓖麻油：2635g，枸櫞酸：漢4WS1-(X-026)-2001Z5ml：30mg方10g，加乙醇至 5000ml。紫杉醇：30g，聚氧乙烯蓖麻油：2635g，枸櫞酸：5ml：30mg10g，無(wú)水乙醇加至 5000ml。江蘇奧賽康5WS1-(X-026)-2001Z紫杉醇：100g，聚氧乙烯蓖麻油：8800g，枸櫞酸：16.7ml：100mg33.4g，無(wú)水乙醇加至 16700ml。紫杉醇：6g，聚氧乙烯蓖麻油：500ml，枸櫞酸：重慶萊美6WS1-(X-026)-2001Z5ml：30mg2g，加無(wú)水乙醇至 1000ml。?？谥扑?WS1-(X-026)-2001Z-紫

16、杉醇：30g，聚氧乙烯蓖麻油：1.68kg，加無(wú)水山西振東8WS1-(X-026)-2001Z5ml：30mg乙醇 2.68kg，制成 5000ml。河北醫(yī)學(xué)紫杉醇：30g，聚氧乙烯蓖麻油：2485g，枸櫞酸：9WS1-(X-026)-2001Z5ml：30mg適量，無(wú)水乙醇 2485g，總量 5000ml。紫杉醇：30g，聚氧乙烯蓖麻油：2635g，枸櫞酸：湘北曼10WS1-(X-026)-2001Z5ml：30mg10g，無(wú)水乙醇加至 5000ml。紫杉醇：30g，聚氧乙烯蓖麻油：2635g，枸櫞酸：華11YBH161220065ml：30mg源10g，無(wú)水乙醇加至 5000ml。12WS

17、1-(X-026)-2001Z三精升和沒(méi)有提供紫杉醇：30g，聚氧乙烯蓖麻油：2500ml，無(wú)水乙醇 2500ml，制成 1000 支。以枸櫞酸做為調(diào)節(jié)5ml：30mg劑。揚(yáng)子江藥業(yè)13WS1-(X-026)-2001Z紫杉醇：100g，聚氧乙烯蓖麻油：8350ml，無(wú)水乙醇 8350ml，制成 1000 支。以枸櫞酸做為調(diào)節(jié)16.7ml：100mg劑。紫杉醇：30g，50%聚氧乙烯蓖麻油乙醇溶液加至5ml：30mg5000ml，制成 1000 瓶。海南新世通14YBH18182006紫杉醇：100g，50%聚氧乙烯蓖麻油乙醇溶液加至16.7ml：100mg5000ml，制成 1000 瓶。紫

18、杉醇：330g，聚氧乙烯蓖麻油：27.5L，無(wú)水乙海15WS1-(X-026)-2001Z醇:27.5L;12%鹽酸：適量；藥用炭：適量。制成5ml：30mg王55L。目前，收載紫杉醇注射液的標(biāo)準(zhǔn)有WS1-(X-026)-2001Z、USP30，各企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)基本同WS1-(X-026)-2001Z。企業(yè)反饋意見(jiàn)歸納為四點(diǎn)，按照 WS1-(X-026)-2001Z標(biāo)準(zhǔn)測(cè)定有關(guān)物質(zhì)，輔料聚氧乙基蓖麻油和枸櫞酸均會(huì)出現(xiàn)較大色譜峰，但標(biāo)準(zhǔn)沒(méi)有明確如何扣除。建議增加對(duì)已知雜質(zhì)的檢測(cè)。WS1-(X-026)-2001Z 標(biāo)準(zhǔn)中含量測(cè)定主峰保留時(shí)間較長(zhǎng)，并建議將內(nèi)標(biāo)法改為外標(biāo)法。本品用甲醇溶解易發(fā)生渾濁現(xiàn)象，

19、建議在有關(guān)物質(zhì)和含量測(cè)定中將溶劑甲醇改為乙醇。本次擬定標(biāo)準(zhǔn)以WS1-(X-026)-2001Z 為依據(jù)，參考 USP30 標(biāo)準(zhǔn)、重慶所擬訂提高標(biāo)準(zhǔn)、各企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)和企業(yè)修改建議進(jìn)行，修訂部分說(shuō)明如下：1、有關(guān)物質(zhì)WS1-(X-026)-2001Z 的有關(guān)物質(zhì)檢測(cè)方法，部分企業(yè)增加了大部分企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)同對(duì)已知雜質(zhì)的控制。注射液WS1-(X-026)-2001Z 有關(guān)物質(zhì)的檢測(cè)方法與原料的標(biāo)準(zhǔn)WS1-(X-025)-2001Z 相同。因目前紫杉醇原料擬定標(biāo)準(zhǔn)工作已完成，其有關(guān)物質(zhì)檢查方法保留了 WS1-(X-025)-2001Z 方法，因此注射液將對(duì)WS1-(X-026)-2001Z，結(jié)合重慶所標(biāo)準(zhǔn)提高擬

20、訂方法及USP30 進(jìn)行方法（見(jiàn)表 4）。表 4：WS1-(X-026)-2001Z 標(biāo)準(zhǔn)與 USP30、重慶所標(biāo)準(zhǔn)提高擬訂方法方法比較WS1-(X-026)-2001Z 標(biāo)準(zhǔn)USP30重慶所標(biāo)準(zhǔn)提高擬訂方法初始 相為乙腈-水（40： 60），出主峰后以每分鐘 10%的速度增加乙腈比例，5 分鐘后，乙腈比例增至 90%，保持 5 分鐘，再以每分鐘 10%的速度降低乙腈比例，5 分鐘后，乙腈比例降為 40%，保持此比例 10 分鐘。梯度洗脫；A 相：乙腈：水（2：3）B 相：乙腈相梯度洗脫；A 相：乙腈B 相：水時(shí)間（min）A%B%時(shí)間A%B%（min）02666670356070404080

21、40606020601001001710000830804060751000流速1.5ml/min1.2ml/min1.5ml/min227nm227nm227nm檢測(cè)波長(zhǎng)色譜柱C18C18 （1504.6mm，5m）C18甲醇乙腈乙醇樣品溶劑3035301.1、樣品溶液的溶劑的經(jīng)實(shí)驗(yàn)，有些企業(yè)的樣品，用甲醇溶解后，會(huì)出現(xiàn)渾濁現(xiàn)象，可能由于輔料聚氧乙基蓖麻油甲醇的溶解度較小所引起，改為乙醇后，溶液澄清。另重慶所標(biāo)準(zhǔn)提高擬訂方法中也已將甲醇改為乙醇。故擬訂標(biāo)準(zhǔn)采用乙醇作溶劑。系統(tǒng)適用性溶液的配制：量取揚(yáng)子江樣品適量，紫杉醇雜質(zhì)A(三杉尖寧堿)（以下簡(jiǎn)稱(chēng)雜質(zhì) A）、紫杉醇雜質(zhì) B(7-表 10-去

22、乙?；仙即? （以下簡(jiǎn)稱(chēng)雜質(zhì) B）與紫杉醇雜質(zhì) C（7-表-紫杉醇）（以下簡(jiǎn)稱(chēng)雜質(zhì) C）用乙醇溶解并稀釋制成每 1ml 含本品 0.5mg、雜質(zhì) A，雜質(zhì) B，雜質(zhì) C 分別為 2.5g 的溶液。（雜質(zhì) A、B、C 各相當(dāng)于主成分的 0.5%）作為系統(tǒng)適用性溶液。0.5自身稀釋對(duì)照：配制 0.5自身稀釋供試品對(duì)溶液作為對(duì)照溶液。1.2 有關(guān)物質(zhì)檢查結(jié)果色譜柱：Agilent Eclipse C18 ,2504.6mm,5m使用儀器：Agilent 1100 液相色譜儀采用 WS1-(X-026)-2001Z標(biāo)準(zhǔn)，用 0.5%自身稀釋對(duì)照法計(jì)算測(cè)定各企業(yè)生產(chǎn)的紫杉醇注射液有關(guān)物質(zhì)檢查結(jié)果，見(jiàn)表

23、 5表 5：采用 WS1-(X-026)-2001Z 標(biāo)準(zhǔn)測(cè)定各企業(yè)紫杉醇注射液有關(guān)物質(zhì)檢查結(jié)果企業(yè)批號(hào)單個(gè)最大雜質(zhì)含量(%)總雜質(zhì)含量(%)123456揚(yáng)子江協(xié)和三精08011301060407080101071102200712010710010.290.230.210.232.380.410.830.660.840.695.140.81湘北山西曼江蘇奧康賽78910111213哈藥工程漢方重慶萊美華源河北醫(yī)大海口制藥2007090108010106100106120105020106120308022610.120.110.210.201.250.180.22.57.170.290.38

24、1.090.293.240.550.651.180.56海南新世通海王WS1-(X-026)-2001Z分別采用標(biāo)準(zhǔn)及重慶所標(biāo)準(zhǔn)提高擬訂方法測(cè)定其中兩家企業(yè)紫杉醇注射液有關(guān)物質(zhì)，結(jié)果見(jiàn)表 6表 6：WS1-(X-026)-2001Z 標(biāo)準(zhǔn)及重慶所標(biāo)準(zhǔn)提高擬訂方法測(cè)定紫杉醇注射液有關(guān)物質(zhì)結(jié)果廠家方法最大單個(gè)雜質(zhì)峰面積最大單個(gè)雜質(zhì)含量（%）總雜質(zhì)含量（%）14.6870.230.62協(xié)和重慶所擬訂方法WS1-(X-026)-2001Z14.7140.230.66三精重慶所擬訂方法15.2500.240.84WS1-(X-026)-2001Z13.8230.210.84用重慶所擬訂方法與用WS1-(

25、X-026)-2001Z 測(cè)定的有關(guān)物質(zhì)結(jié)果基本一致，重慶所認(rèn)為主峰出來(lái)后梯度變化過(guò)于劇烈，影響雜質(zhì)的檢出，在主峰出來(lái)后，為使梯度變緩，以每分鐘 1%的速度增加乙腈至 80%，WS1-(X-026)-2001Z 標(biāo)準(zhǔn)則是在主峰出來(lái)之后，以每分鐘 1.6%的速度增加乙腈至 80%，經(jīng)比較，WS1-(X-026)-2001Z 方法基線變化不影響雜質(zhì)的慶所擬訂方法短 10 分鐘，故采用 WS1-(X-026)-2001Z 方法較為適宜。檢出，且檢出時(shí)間分別采用 WS1-(X-026)-2001Z 標(biāo)準(zhǔn)及 USP30 紫杉醇注射液的方法測(cè)定紫杉醇注射液有關(guān)物質(zhì)，結(jié)果見(jiàn)表 7表 7 測(cè)定結(jié)果最大單個(gè)雜質(zhì)

26、含量（%）總雜質(zhì)含量（%）USP30 方法0.290.89揚(yáng)子江藥業(yè) 0.29WS1-(X-026)-2001Z0.83兩個(gè)方法檢測(cè)結(jié)果基本一致。綜合上述色譜條件的比較，本擬訂標(biāo)準(zhǔn)中采用 WS1-(X-026)-2001Z 的有關(guān)物質(zhì)檢查色譜條件測(cè)定。1.3 雜質(zhì)及限度各標(biāo)準(zhǔn)對(duì)雜質(zhì)的規(guī)定a國(guó)內(nèi)標(biāo)準(zhǔn) WS1-(X-026)-2001Z未已知雜質(zhì)，采用 1.0%的自身稀釋對(duì)照法計(jì)算雜質(zhì)，規(guī)定單個(gè)未知雜質(zhì)的限度為不得過(guò) 1.0%，總雜質(zhì)不得過(guò) 2.5%。b USP30 采用以配制一定濃度的雜質(zhì) B 溶液為對(duì)照溶液，加校正因子方法計(jì)算其他已知和未知雜質(zhì)的含量。對(duì)已知雜質(zhì)的規(guī)定如下：表 8：USP30

27、雜質(zhì)的規(guī)定校正因子F限度（%）相對(duì)保留時(shí)間雜質(zhì)0.191.29BaccatiI0.80.211.00Ethyl ester side chain0.40.501.0010-Deacetylpaaxel0.80.951.0010-Deacetyl-7-paaxel(paaxel related compound B)0.51.401.007-paaxel0.6其他單個(gè)雜質(zhì)不得過(guò) 0.1%，總雜質(zhì)不得過(guò) 2.0%。c 部分企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)增加了分離度的，對(duì)單個(gè)已知雜質(zhì)和未知雜質(zhì)的控制。主要控制的雜質(zhì)為雜質(zhì) A、雜質(zhì) B、雜質(zhì) C、BaccatiI。小結(jié)：從企業(yè)的有關(guān)物質(zhì)檢查結(jié)果來(lái)看（見(jiàn)表 5），大部分企業(yè)

28、（共 13 家）的有關(guān)物質(zhì)檢查結(jié)果單個(gè)雜質(zhì)含量均低于 0.5%，有三個(gè)企業(yè)樣品的最大單個(gè)雜質(zhì)超過(guò)了 0.5%，其中海南新世通提供的穩(wěn)定性數(shù)據(jù)表明最大單個(gè)雜質(zhì)含量均低于 0.5%，河北醫(yī)大提供的為申報(bào)時(shí)的留樣，樣品沒(méi)有外包裝，保存不好，雜質(zhì)有可能增加了，USP30 中分別規(guī)定了已知雜質(zhì)和未知雜質(zhì)的限度（如表 8），因色譜條件為梯度洗脫基線容易波動(dòng)，色譜峰的保留時(shí)間也易發(fā)生變化，所以不采用相對(duì)保留時(shí)間確定已知雜質(zhì)的方法，經(jīng)與廠家聯(lián)系，無(wú)法得到除雜質(zhì) B 和雜質(zhì) C 以外的另三個(gè)已知雜質(zhì)，且實(shí)際測(cè)定中，樣品中有些未知雜質(zhì)高于 USP30規(guī)定的單個(gè)未知雜質(zhì)限度 0.1%，故在本擬訂標(biāo)準(zhǔn)中單個(gè)雜質(zhì)（包括

29、已知和未知）的限度規(guī)定為不得過(guò) 0.5，其中雜質(zhì) A 的校正因子為 1.26（USP30 規(guī)定），測(cè)得的各企業(yè)樣品的總雜質(zhì)基本在 1.2之內(nèi)，本擬訂方定總雜質(zhì)限度和 USP30 一致，為不得過(guò) 2.0。1.4 有關(guān)物質(zhì)檢查方法學(xué)系統(tǒng)適用性的在分離度色譜圖中（見(jiàn)圖 1），雜質(zhì) B 和紫杉醇主峰相鄰，需要兩者之間的分離度，USP30 規(guī)定為不得小于 1.2，經(jīng)實(shí)驗(yàn)，大部分色譜柱能夠達(dá)到 1.5 的分離，但是有些色譜柱分離度只能達(dá)到 1.2，考慮到當(dāng)紫杉醇雜質(zhì) B 和紫杉醇主峰在大于 1.2 時(shí)，已基本能保證分離，故將兩者分離度規(guī)定為不得小于 1.2。雜質(zhì) A 的校正因子為 1.2，因此在系統(tǒng)適用性

30、溶液中加入雜質(zhì) A，起到定位的作用。此外，輔料聚氧乙烯蓖麻油及枸櫞酸對(duì)測(cè)定有干擾，在梯度洗脫時(shí)候會(huì)出現(xiàn)較大的干擾峰，參照USP30 及各企業(yè)樣品色譜圖，雜質(zhì) C 為保留時(shí)間最長(zhǎng)的雜質(zhì)，在雜質(zhì) C 后出的色譜峰基本為聚氧乙烯蓖麻油的色譜峰，故擬訂雜質(zhì) C 后出現(xiàn)的色譜峰不積分，所以擬訂后標(biāo)準(zhǔn)中的，系統(tǒng)適用性溶液的為用乙醇溶解并稀釋制成每1ml 含本品 0.5mg、雜質(zhì)A、雜質(zhì) B 和雜質(zhì) C 分別為 2.5g 的溶液。圖 1：有關(guān)物質(zhì)檢查分離度圖譜色譜柱適用性的a 采用其他廠家的色譜柱采用色譜柱為 Thermo ODS HypersilC18(250mm 4.6mm,5m), 其他條件同WS1-

31、(X-026)-2001Z 標(biāo)準(zhǔn)，測(cè)定紫杉醇注射液有關(guān)物質(zhì)檢查結(jié)果如表 10：表 10：測(cè)定結(jié)果最大單個(gè)雜質(zhì)最大單個(gè)雜質(zhì)總雜質(zhì)含色譜柱峰面積含量（%）量（%）Thermo ODS Hypersil C18 ,2504.6mm,5m42.4530.240.67協(xié)和Agilent Eclipse C18 ,2504.6mm,5m46.6160.230.66Thermo ODS Hypersil C18 ,2504.6mm,5m22.1200.460.96江蘇奧康賽Agilent Eclipse C18 ,2504.6mm,5m31.8600.410.81b 采用 150mm 柱長(zhǎng)的色譜柱采用色譜柱

32、為 SHIMADZUC18 (150mm4.6mm,5m),其他條件同 WS1-(X-026)-2001Z標(biāo)準(zhǔn)，測(cè)定紫杉醇注射液有關(guān)物質(zhì)檢查結(jié)果如表 11：表 11：測(cè)定結(jié)果最大單個(gè)雜最大單個(gè)雜總雜質(zhì)含量色譜柱質(zhì)峰面積質(zhì)含量（%）（%）SHIMADZU C18 ,2504.6mm,5m4.3740.261.00三精 Agilent Eclipse C18 ,2504.6mm,5m5.7810.230.88采用不同廠家的色譜柱，有關(guān)物質(zhì)檢查結(jié)果基本一致，但 250mm 的色譜柱較長(zhǎng)，梯度變化時(shí)基線較為平穩(wěn)，用 250mm 的色譜柱。線性對(duì)照溶液的濃度為相當(dāng)于有關(guān)物質(zhì)檢查主峰濃度的 0.5%，因此

33、，精密稱(chēng)取紫杉醇13.02mg，配制了相當(dāng)于有關(guān)物質(zhì)檢查主峰濃度的 0.1%、0.2%、0.5%、0.8%、1.0%的溶液，有關(guān)物質(zhì)檢查的線性，結(jié)果如下：表 12：線性結(jié)果百分含量0.1%0.2%0.5%0.8%1.0%濃度(mg/ml) 0.00050.00100.00260.00420.0052峰面積6.208013.337032.700054.798069.1020線性方程為 y = 13383.1259 x - 1.0146，r= 0.9997，線性關(guān)系良好。檢出限和定量限的A80.000070.0000y = 13383.1259 x - 1.0146260.0000R = 0.99

34、9450.000040.000030.000020.000010.00000.00000.0000 0.0010 0.0020 0.0030 0.0040 0.0050 0.0060濃度0.1%供試品自身稀釋溶液的的信噪比大于 10，做為定量限溶液。0.05%的供試品自身稀釋溶液的信噪比大于 3，做為檢出限溶液。輔料峰的扣除各企業(yè)的生產(chǎn)工藝中用到的輔料均含有乙醇和聚氧乙烯蓖麻油，部分生產(chǎn)企業(yè)使用了枸櫞酸。紫杉醇在水中難溶，在乙醇、甲醇、氯仿、乙醚中溶解，其中乙醇為溶劑，聚氧乙烯蓖麻油為增溶劑及穩(wěn)定劑，枸櫞酸為抗氧化劑。在有關(guān)物質(zhì)檢查中，能看到明顯的輔料峰，按照工藝的比例，配制了相當(dāng)于有關(guān)物質(zhì)檢

35、查濃度的枸櫞酸和聚氧乙烯蓖麻油供試品溶液，空白溶液（乙醇）的色譜峰如圖 2，枸櫞酸在相對(duì)保留時(shí)間 0.12 前出峰，如圖 3 所示，聚氧乙烯蓖麻油的圖譜如圖 4 所示，各廠家提供的聚氧乙烯蓖麻油的圖譜基本一致，在雜質(zhì) C之前有兩個(gè)色譜峰，其中一個(gè)和主峰，最大的峰面積不超過(guò)紫杉醇主峰面積 0.3%，因此可以忽略不計(jì)，但考慮到聚氧乙烯蓖麻油雜質(zhì) C 之后出面積很大，干擾較大，且雜質(zhì) C 為 USP30 中控制的保留時(shí)間最晚的一個(gè)已知雜質(zhì)，經(jīng)實(shí)驗(yàn)表明，在雜質(zhì) C 后面一般沒(méi)有雜質(zhì)出現(xiàn)了，故擬訂標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定，在紫杉醇有關(guān)物質(zhì)中，保留時(shí)間在紫杉醇雜質(zhì) C后的色譜峰不積分。圖 3：枸櫞酸的色譜圖差異，檢查時(shí)

36、供試品需稀釋多少倍合適，因不同儀器而異，所有對(duì)稀釋倍數(shù)未作明確規(guī)定，試驗(yàn)將按照附錄進(jìn)行操作，酌情處理。在本操作時(shí)，取本品 3 瓶（注：規(guī)格為：30mg/5ml，當(dāng)規(guī)格為 100mg/16.7ml 樣品取 1 瓶即可），將內(nèi)容物傾入取樣杯內(nèi)，加入微粒檢查用水 60ml（共 75ml），攪拌后，超聲處理 30 秒后脫氣，測(cè)定 3 次，每次抽取 5ml，棄去第一次數(shù)據(jù)，求出后 2 次測(cè)定的平均值。例：取揚(yáng)子江的樣品（規(guī)格為：30mg/5ml），照擬訂后方法測(cè)定，結(jié)果為每瓶供試品中含 10m 以上的微粒為 718 粒（不得過(guò) 6000 粒），含 25m 以上的微粒為 60 粒（不得過(guò) 600粒）。3

37、含量測(cè)定USP30 中含量測(cè)定的方法見(jiàn)表 14 ，考慮到此方法使用較為特殊的五氟苯基色譜柱，故USP30 的含量測(cè)定方法，WS1-(X-026)-2001Z 標(biāo)準(zhǔn)使用的在擬訂方法中沒(méi)有相為甲醇-水-乙腈（20：50：30），計(jì)算方法為內(nèi)標(biāo)法，各企業(yè)基本采用此方法，部分企業(yè)對(duì)相比例進(jìn)行了調(diào)整，或把內(nèi)標(biāo)法改成了外標(biāo)法。重慶所標(biāo)準(zhǔn)提高方法，采用了梯度洗脫的方法（見(jiàn)表 14）：表 14：WS1-(X-026)-2001Z 標(biāo)準(zhǔn)與 USP30、重慶所標(biāo)準(zhǔn)提高擬訂方法對(duì)比WS1-(X-026)-2001Z 標(biāo)準(zhǔn)USP30重慶所標(biāo)準(zhǔn)提高擬訂方法初始相為乙腈-水（40：60），出主峰后以每分鐘 10%的速度增

38、加乙腈比例，5 分鐘后，乙腈比例增至 90%，保持 5 分鐘，再以每分鐘 10%的速度降低乙腈比例，5 分鐘后，乙腈比例降為 40%，保持此比例 10 分鐘。相甲醇-水-乙腈（20：50：30）水：乙腈（11：9）流速1.0ml/min1.0ml/min1.5ml/min檢測(cè)波長(zhǎng)227nm227nm227nm色譜柱C18五氟苯基C18甲醇甲醇：冰醋酸=200：1乙醇樣品溶劑供試品0.5mg/ml0.6mg/ml0.5mg/ml溶液濃度取炔諾酮適量，加甲醇溶解制成內(nèi)標(biāo)溶液無(wú)無(wú)每 1ml 中約含 0.5mg 的溶液。3.1 樣品的取本品，加乙醇溶解制成 0.12mg/ml 的溶液，作為供試品溶液。

39、供試品溶液的系統(tǒng)適用性溶液的取紫杉醇有關(guān)物質(zhì)檢查項(xiàng)下 1.4（1）配制系統(tǒng)適用性溶液進(jìn)樣，各成分之間的分離度符合規(guī)定（見(jiàn)圖 5）。因雜質(zhì) C 與主峰和雜質(zhì) A、B 保留時(shí)間相差較大，故擬訂后標(biāo)準(zhǔn)系統(tǒng)適用性溶液不加入雜質(zhì) C。考慮到該色譜條件下雜質(zhì) B 與紫杉醇色譜峰比較接近，故將系統(tǒng)適用性溶液的分離度規(guī)定為1.0。3.2 液相色譜條件的：考慮到采用重慶所擬訂的和有關(guān)物質(zhì)類(lèi)似的梯度洗脫的色譜條件，出峰時(shí)間較長(zhǎng)，故采用等度洗脫條件，企業(yè)反映采用 WS1-(X-026)-2001Z 標(biāo)準(zhǔn)即相為甲醇-水-乙腈（20：50：30），出峰時(shí)間較晚，參照原料藥紫杉醇擬訂后的含量測(cè)定方法，本品擬訂后的相為甲醇

40、-水-乙腈（23：41：36），主峰的出峰時(shí)間在 20 分鐘內(nèi)。取適量系統(tǒng)適用性溶液，分離度均符合規(guī)定。圖 5：含量測(cè)定分離度圖譜（使用色譜柱：Agilent Eclipse C18 ,2504.6mm,5m）3.3 供試品溶液配制濃度的：WS1-(X-026)-2001Z 標(biāo)準(zhǔn)、重慶所標(biāo)準(zhǔn)提高擬訂方法及部分企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)中供試品的濃度均為含紫杉醇 0.5mg/ml，即吸取本品 2ml，用溶劑稀釋至 25ml。經(jīng)實(shí)驗(yàn)表明，本品的輔料中的蓖麻油和枸櫞酸出峰，對(duì)基線有干擾，其中枸櫞酸在 3 分鐘之前出峰，而蓖麻油則會(huì)在主供試品溶液稀釋至 0.12mg/ml，則蓖峰后面出峰，為了減少測(cè)定時(shí)間及輔料的干擾，

41、麻油濃度變稀后不出峰，測(cè)定時(shí)間縮短。3.4 測(cè)定結(jié)果各企業(yè)含量測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表 15表 15：各企業(yè)含量測(cè)定結(jié)果企業(yè)批號(hào)含量（%）1234567891011121314協(xié)和漢方重慶萊美06040706100108010108022610710010711022007090108011301061203050201200712010612010801012008020198.3498.70100.6597.3496.6991.0297.24101.9497.64100.3391.35100.5498.6599.49江蘇奧賽康曼哈藥生物工程揚(yáng)子江?？谥扑幒颖贬t(yī)大山西華源三精海王15海南新世通20080

42、301102.23WS1-(X-026)-2001Z 標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定： 本品含紫杉醇（ C47H51NO14 ） 應(yīng)為標(biāo)示量的90.0%110.0%。各企業(yè)含量測(cè)定結(jié)果均符合規(guī)定，本擬訂標(biāo)準(zhǔn)未對(duì)此限度進(jìn)行修訂。4、細(xì)菌內(nèi)毒素細(xì)菌內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)為：“取本品，以細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水稀釋 40 倍后，依法檢查，本品每 1ml 中含內(nèi)毒素量應(yīng)小于 2.4EU。”如此表達(dá)容易產(chǎn)生歧義，可理解為原液中內(nèi)毒素含量應(yīng)小于 2.4EU/ml，也可理解為稀釋 40 倍后的溶液內(nèi)毒素含量應(yīng)小于 2.4EU/ml。由于內(nèi)毒素限值的計(jì)算公式為 L=K/M（K 為按規(guī)定的給藥途徑，人用每公斤體重每小時(shí)最大可接受的內(nèi)毒素劑量，注射劑 K=5 EU/kg/h；M 為人用每公斤體重每小時(shí)最大劑量）。根據(jù)紫杉醇注射液的說(shuō)明書(shū)，其使用最大劑量為“250