復(fù)方中草藥提取物對鯉魚非特異性免疫及生長性能的影響

1、復(fù)方中草藥提取物對鯉魚非特異性免疫及生長性能的影響復(fù)方中草藥提取物對鯉魚非特異性免疫及生長性能的影響近20年來，人們逐漸發(fā)現(xiàn)抗生素和激素這些添加劑的應(yīng)用對水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)開展起一定的促進(jìn)作用，但同時也帶來了不可防止的負(fù)面效應(yīng)。抗生素的大量使用和濫用破壞了動物體內(nèi)微生態(tài)的平衡，導(dǎo)致耐藥菌株的產(chǎn)生，使動物免疫力下降1。因此，世界上許多國家先后作出限用或禁用抗生素作飼料添加劑的決定，特別是歐盟已法定從2000年開場所有成員國全面制止使用抗生素作飼料添加劑。2022年，因濫用抗生素引起的多寶魚事件給我國大菱鲆主要養(yǎng)殖區(qū)山東、河北造成了宏大的經(jīng)濟(jì)損失，嚴(yán)重影響了大菱鲆養(yǎng)殖業(yè)的安康快速開展。激素類的大量使用使動

2、物體內(nèi)的非特異性免疫才能下降2，所以天然的中草藥添加劑引起了國內(nèi)外的重視。中草藥飼料添加劑是以自然界中動物、植物等為原料加工而成的飼料添加劑，具有高效、低毒、低殘留等優(yōu)點(diǎn)3。但是，傳統(tǒng)的中草藥添加劑往往是將中草藥粉碎后直接添加到飼料中進(jìn)展投喂的，存在藥效慢、添加量大、適口性差、本錢高等缺點(diǎn)。為了保證中草藥添加劑的效果，本試驗采用高濃度中草藥和純中草藥提取物進(jìn)展研究。1材料與方法1.1材料1.1.1試驗用魚試驗魚為天津市換新水產(chǎn)良種場培育的安康鯉魚，規(guī)格約150g/尾。鯉魚采購后，先用5%食鹽水浸泡20in消毒，然后放入暫養(yǎng)池內(nèi)馴化本文由論文聯(lián)盟.Ll.搜集整理2周。暫養(yǎng)期間，投喂飼料為根底飼料

3、，以鯉魚出現(xiàn)有規(guī)律攝食為馴化指標(biāo)。1.1.2試驗藥品試驗藥品成分為黃芪多糖、人參莖葉總皂苷、綠原酸、生物堿和黃酮，均購自河北征宇制藥。1.2方法1.2.1試驗設(shè)計與管理將各試驗藥品根據(jù)中草藥藥理及互相配伍原那么配制，分別以0對照、0.1%B1、0.2%B2、0.3%B3的比例參加到根底飼料中，每組3個平行，每個平行放置25尾試驗魚，分別隨機(jī)放入12個網(wǎng)箱內(nèi)。每天08：00、12：00和16：00定時投喂，每天的投喂量約為體質(zhì)量的3%，隔天09：00清池?fù)Q水1/4，全天充氧，水溫控制在25左右。1.2.2生長指標(biāo)的測定喂養(yǎng)42d后，每組撈取25尾魚稱重，計算各組魚的相對增重率和成活率。每天檢查草

4、魚的發(fā)病或死亡情況，做好記錄，最后統(tǒng)計各組的成活率。飼料系數(shù)F=飼料消耗量/增加的質(zhì)量；相對增重率=末尾平均體質(zhì)量-初尾平均體質(zhì)量/初尾平均體質(zhì)量100%；成活率=試驗?zāi)~總數(shù)/試驗初魚總數(shù)100%。1.2.3生化指標(biāo)的測定1.2.3.1血清的采集及制備分別在試驗后14、28、42d時，從每個試驗處理組隨機(jī)取2尾魚，用盛有肝素鈉的一次性注射器采血2L，立即輕輕搖勻，使血液抗凝，置于4冰箱內(nèi)保存。1.2.3.2超氧化物歧化酶SD活性的測定采用南京建成生物工程研究中心消費(fèi)的SD試劑盒測定。原理：SD活性采用黃嘌呤氧化酶法測定，通過黃嘌呤及其氧化酶反響系統(tǒng)產(chǎn)生超氧陰離子自由基，后者氧化羥胺形成亞硝酸

5、鹽，在顯色劑的作用下呈紫紅色，用可見光分光光度計測定其吸光度；當(dāng)樣品中含有SD時，那么因?qū)Τ蹶庪x子自由基專一性的抑制作用使形成的亞硝酸鹽減少，比色時測定管的吸光度低于對照管。定義：1L反響液中SD抑制率到達(dá)50%時所對應(yīng)的SD量為1個活性單位U。1.2.3.3溶菌酶LSZ活性的測定采用南京建成生物工程研究中心消費(fèi)的溶菌酶試劑盒測定。原理：在一定濃度的混濁菌液中，由于溶菌酶能水解細(xì)菌細(xì)胞壁上肽聚糖而使細(xì)菌裂解濃度降低，透光度增強(qiáng)，因此根據(jù)透光度變化來推測溶菌酶的活性。定義：在溫度為37、波長為530n下，1in內(nèi)引起吸光度下降0.001為1個活性單位。1.2.3.4過氧化氫酶AT活性的測定采用

6、南京建成生物工程研究中心消費(fèi)的過氧化氫酶試劑盒測定。原理：AT分解H22的反響可通過鉬酸銨而迅速中止，剩余的H22與鉬酸銨作用產(chǎn)生一種淡黃色的絡(luò)合物，通過測定其生成量可計算出AT的活性。定義：1L血清或血漿1s分解1l的H22的量為1個活力單位U。1.2.3.5酸性磷酸酶AP和堿性磷酸酶AKP活性的測定采用南京建成生物工程研究中心消費(fèi)的酸性磷酸酶和堿性磷酸酶試劑盒測定。原理：酸性磷酸酶或者堿性磷酸酶在分解產(chǎn)生磷酸苯二鈉的同時產(chǎn)生游離酚和磷酸，酚在堿性溶液中與4-氨基安替吡啉作用經(jīng)鐵氰化鉀氧化生成紅色醌衍生物，根據(jù)紅色深淺可以測定AP、AKP的活性。AP活性單位的定義：100L血清在37與基質(zhì)作

7、用30in時產(chǎn)生1g酚為1個金式單位。AKP活性單位的定義：100L血清在37與基質(zhì)作用15in時產(chǎn)生1g酚為1個金氏單位。1.2.3.6谷草轉(zhuǎn)氨酶GT活性的測定采用南京建成生物工程研究中心消費(fèi)的GT試劑盒測定。GT能使-酮戊二酸和天門冬氨酸轉(zhuǎn)移置換氨基和丙酮，生成谷氨酸和草酰乙酸。草酰乙酸在反響過程中自行脫羧成丙酮酸。丙酮酸與2，4-二硝基苯肼作用產(chǎn)生2，4-二硝基苯腙，在堿性環(huán)境中顯棕色，比色后可得出其活性。定義：1L血清，反響液總?cè)萘?L，340n波長，1光徑，25，1in內(nèi)所生成的丙酮酸，將NaH氧化成Na+而引起吸光度每下降0.001為1個卡門氏單位。1.3數(shù)據(jù)處理用SPSS19.0

8、進(jìn)展數(shù)據(jù)處理，采用一般線性模型進(jìn)展比擬以及單因素方差分析，顯著程度為0.05。2結(jié)果與分析2.1復(fù)方中草藥添加劑對鯉魚生長性能的影響由表1可知，6周后添加復(fù)方中草藥的飼料能使鯉魚的生長性能有所增強(qiáng)。但是，B1組的增重效果與B3組差異不顯著；B2組的增重率顯著高于其他3組P0.05，但其飼料系數(shù)顯著低于其他3組P0.05。3結(jié)論與討論3.1復(fù)方中草藥添加劑對鯉魚生長性能的影響本試驗是按照醫(yī)學(xué)配伍的原那么將黃芪多糖、人參莖葉總皂苷、綠原酸、生物堿和黃酮等5種中草藥提取物按照一定比例配制的。結(jié)果說明，復(fù)方中草藥添加劑可以進(jìn)步試驗組鯉魚增重率，降低飼料系數(shù)，其中B2組效果較明顯，這一結(jié)果和許多學(xué)者的試

9、驗結(jié)果一致。例如，齊遵利等發(fā)現(xiàn)，在飼料中添加黃芪、黃芩、大黃、大蒜能促進(jìn)草魚的生長，降低飼料系數(shù)4；阮國良等發(fā)現(xiàn)，五加皮、黃芪、茯苓及這3種中藥的混合物均對黃鱔的增重有顯著的促進(jìn)作用，且五加皮對黃鱔的增重最明顯5；童圣英等發(fā)現(xiàn)，山奈沙姜、山辣中含有大量的有機(jī)酸，對皺紋盤鮑具有明顯的誘食作用6；曾虹等在鯉魚餌料中添加11g/kg大蒜素，結(jié)果發(fā)現(xiàn)其可顯著進(jìn)步鯉魚成活率2.6%、增重率14.3%，同時還能進(jìn)步飼料轉(zhuǎn)化率11%7。3.2復(fù)方中草藥添加劑對鯉魚非特異性免疫的影響本試驗發(fā)現(xiàn)，在根底飼料中添加不同劑量的復(fù)方中草藥提取物能進(jìn)步草魚的免疫力和抗病力，表現(xiàn)為血清中AT、LSZ、SD活性均顯著高于對

10、照組。各組的輔助免疫指標(biāo)AP、AKP、GT活性差異不大，說明試驗采樣的動物根本生理指標(biāo)差異不大，沒有在得病時被隨機(jī)取樣。蔡中華等用中藥大黃、黃連、花粉、無花果4種中草藥喂養(yǎng)鯉魚，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，魚體免疫器官質(zhì)量增加，溶菌物質(zhì)的溶菌活性及吞噬才能增強(qiáng)，魚體特異性免疫才能顯著進(jìn)步8。崔青曼等用海藻多糖、大黃、黃芪、連翹等喂養(yǎng)河蟹，通過檢測河蟹的血細(xì)胞吞噬活性、血清凝集效價及血清殺菌活性等免疫學(xué)指標(biāo)后證實，該添加劑可顯著進(jìn)步河蟹機(jī)體的免疫功能9。Sun等研究了黃芪多糖對仿刺參免疫的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，黃芪多糖能促進(jìn)仿刺參體腔細(xì)胞的吞噬才能10。Ying等確認(rèn)了黃芪和靈芝能進(jìn)步鯉魚白細(xì)胞吞噬活性和血清溶菌活性11。李超等將黃芪、大蒜、菊花、山楂和板藍(lán)根5味中