反相高效液相色譜法測定連翹中烏索酸和齊墩果酸的含量

1、反相高效液相色譜法測定連翹中烏索酸和齊墩果酸的含量【關(guān)鍵詞】連翹；,烏索酸；,齊墩果酸；,高效液相色譜摘要：目的建立同時(shí)測定連翹中烏索酸和齊墩果酸含量的測定方法。方法采用高效液相色譜HPL法測定其含量。色譜柱為NvaPak18(3.9300，4)，流動相為甲醇水(8812)，流速0.8l/in，檢測波長210n，柱溫25。結(jié)果烏索酸和齊墩果酸分別在0.9124.560gr=0.9998和0.3121.560gr=0.9996范圍內(nèi)峰面積與進(jìn)樣量呈良好的線性關(guān)系；烏索酸和齊墩果酸的平均回收率分別為98.2%(RSD=1.1%)和97.8%(RSD=1.4%)。結(jié)論此法簡單、方便、快速、準(zhǔn)確，可為

2、中藥連翹質(zhì)量評價(jià)和控制提供科學(xué)根據(jù)。關(guān)鍵詞：連翹；烏索酸；齊墩果酸；高效液相色譜HPLDeterinatinfthententsfUrsliAidandleanliAidinFrsthiasuspense(Thunb.)VahlAbstrat：bjetiveTdevelpaethdfrthequantitativeanalysisfursliaidandleanliaidinFrsythiasuspensesiultaneusly.ethdsHPLasarriedutntheNvaPak18lun(3.9300,4)at25usingeHH2(8812)asbilephaseithaflrat

3、ef0.8landdetetinavelengthassetat210n.ResultsThereasgdlinearrelatinshipbeteenthepeakareaandthesaplententinjetedattherangesf0.9124.560gr=0.9998and0.3121.560gr=0.9996frursliaidandleanliaidrespetively.Theaveragereveryratefursliaidandleanliaidere98.2%(RSD1.1%)and97.8%(RSD1.4%),respetively.nlusinItsasiple

4、,nvenient,quikandaurateethd,andanalsbeusedsientifiallyinthequalityestiatinandntrlfhinesetraditinalediineFrsythiaSuspense.Keyrds：Frsythiasuspense(Thunb.)Vahl;Ursliaid;leanliaid;HPL連翹FrutusFrsythiae為木犀科連翹屬植物連翹Frsythiasuspense(Thunb.)Vahl的枯燥果實(shí),別名旱連子、大翹子、空殼、連召、落翹。始載于?神農(nóng)本草經(jīng)?，性平氣微香味微苦，具有清熱解毒，疏散風(fēng)熱，消癰散結(jié)、強(qiáng)心利

5、尿和降血壓之成效，為瘡家圣藥。主產(chǎn)于我國東北、華北、長江流域至云南等地，其中以山西晉南，河南豫西所產(chǎn)不但色澤鮮亮且質(zhì)量佳，為道地藥材。連翹是我國常用的大宗藥材，主要含有連翹酚(frsythl)、連翹苷(Phillyrin)、連翹苷元(phillygenin)；齊墩果酸(leanliaid，LA)、白樺脂酸(betuliniaid)、烏索酸(ursliaid，UA)、松脂素(pinresinl)、甾醇化合物、馬苔樹脂醇苷atairesinside和多種烴類、醛酮類、醇酯醚類揮發(fā)性成分13?，F(xiàn)代藥理研究說明，連翹具有廣譜抗菌、抗病毒等作用，對丹毒、頸淋巴結(jié)結(jié)核、尿路感染、扁桃體炎、腎炎雙球菌等均有

6、抑制作用46，常用于急性胃炎，呼吸道感染等病癥。本實(shí)驗(yàn)采用乙醇超聲提取，建立HPL法同時(shí)測定了連翹中烏索酸和齊墩果酸的含量，該法簡單快速，靈敏準(zhǔn)確，重現(xiàn)性好，為控制連翹的內(nèi)在質(zhì)量提供了科學(xué)根據(jù)。1儀器、材料與試劑1.1儀器aters515雙泵型高效液相色譜儀，2996光電二極管矩陣檢測器，色譜柱NvaPak18柱(3.9300，4)，7725I進(jìn)樣閥，Eper中文色譜工作站，RB10D高純水機(jī)杭州永潔達(dá)膜別離設(shè)備廠，F(xiàn)204分析天平上海天平分析儀器廠，F(xiàn)100型高速萬能粉碎機(jī)天津市泰斯特儀器，20226A型數(shù)顯電熱恒溫枯燥箱上海陽光實(shí)驗(yàn)儀器，KS1500超聲提取儀器寧波科盛儀器廠。2方法與結(jié)果

7、2.1色譜條件色譜柱為NvaPak183.9300，4)；流動相為甲醇水8812，V/V；流速為0.8l/in；檢測波長為210n；柱溫為25，進(jìn)樣量15l。烏索酸和齊墩果酸理論塔板數(shù)均大于9000，對照品混合溶液及連翹樣品溶液的HPL色譜圖見圖1。2.2溶液的制備2.2.1混合對照品溶液的配制精細(xì)稱取枯燥至恒重的烏索酸和齊墩果酸對照品22.8g和7.8g，混合至10l容量瓶中，溶解定容。精細(xì)量取1l置于10l容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，作為烏索酸、齊墩果酸對照品混合溶液。圖1對照品和連翹樣品的HPL色譜圖略2.2.2樣品溶液的制備取連翹樣品于80恒溫枯燥10h，粉碎，精細(xì)稱取約4g，參

8、加95%乙醇溶液40l，超聲提取120in，冷卻至室溫，濾過，濾渣用乙醇超聲洗滌2次，合并過濾液于50l容量瓶，乙醇定容，搖勻，經(jīng)0.45微孔濾膜過濾，得樣品溶液。2.3線性關(guān)系實(shí)驗(yàn)精細(xì)汲取對照品混合溶液4，8，12，16，20l，按2.1色譜條件進(jìn)樣并測定峰面積。以峰面積對進(jìn)樣量進(jìn)展線性回歸，烏索酸和齊墩果酸的回歸方程分別為：YUA=5.78105X+1.35103，r=0.9998，YLA=6.32105X-5.90103，r=0.9996。說明烏索酸進(jìn)樣量在0.9124.560g，齊墩果酸進(jìn)樣量在0.3121.560g時(shí)，線性關(guān)系良好。轉(zhuǎn)貼于論文聯(lián)盟.ll.2.4色譜進(jìn)樣精細(xì)度實(shí)驗(yàn)精細(xì)汲

9、取烏索酸和齊墩果酸對照品混合溶液15l進(jìn)樣，重復(fù)5次，測得烏索酸峰面積相對標(biāo)準(zhǔn)偏向RSD為0.6%n=5，齊墩果酸的峰面積相對標(biāo)準(zhǔn)偏向?yàn)?.9%n=5，說明儀器精細(xì)度良好。2.5方法重現(xiàn)性實(shí)驗(yàn)精細(xì)稱取連翹樣品5份，按2.2.2項(xiàng)制備樣品溶液，在2.1色譜條件下，精細(xì)汲取15l進(jìn)樣分析，測烏索酸峰面積的相對標(biāo)準(zhǔn)偏向?yàn)?.1%n=5，齊墩果酸峰面積的相對標(biāo)準(zhǔn)偏向?yàn)?.9%(n=5)，方法重現(xiàn)性好。2.6加樣回收率實(shí)驗(yàn)精細(xì)稱取烏索酸和齊墩果酸含量并枯燥至恒重的藥材5份，分別參加適量的烏索酸和齊墩果酸對照品，按2.2.2項(xiàng)制備樣品溶液，進(jìn)樣分析，烏索酸和齊墩果酸平均回收率結(jié)果見表12。表1烏索酸加樣回

10、收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果略2.7樣品中烏索酸和齊墩果酸含量測定結(jié)果精細(xì)稱取連翹樣品約4g，制備樣品溶液。精細(xì)汲取樣品溶液10l，分別進(jìn)樣，平行實(shí)驗(yàn)5次，測定烏索酸和齊墩果酸峰面積，外標(biāo)法計(jì)算含量。結(jié)果見表3。表2齊墩果酸加樣回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果略表3樣品中烏索酸和齊墩果酸的測定結(jié)果略3討論3.1樣品提取方法的選擇原藥中烏索酸和齊墩果酸的提取多采用乙醇回流法、索氏提取法，提取時(shí)間長，原料和試劑的使用量大，本錢高，且溶劑易揮發(fā)污染環(huán)境。本實(shí)驗(yàn)嘗試采用超聲提取法，實(shí)驗(yàn)結(jié)果說明該法樣品處理過程簡單，提取率高，與傳統(tǒng)的樣品預(yù)處理方法相比，具有快速、環(huán)保、高效等優(yōu)點(diǎn)。3.2檢測波長確實(shí)定取烏索酸和齊墩果酸對照品混合溶液進(jìn)樣

11、，在190500n波長范圍進(jìn)展光譜掃描，其最大吸收波長均為202.2n(圖2)，但由于流動相在短波長處有末端吸收，為了減少干擾，進(jìn)步信噪比，提取不同波長的色譜圖進(jìn)展比擬，選擇210n為檢測波長信噪比高，峰形好，干擾校圖2烏索酸和齊墩果酸對照品的紫外吸收光譜略3.3不同采收期連翹中UA和LA的含量對不同采收期連翹中烏索酸和齊墩果酸的含量檢測分析說明，老翹中兩組分的含量明顯高于青翹和熟翹，采收期對中藥連翹中烏索酸和齊墩果酸的含量影響較大。連翹中烏索酸和齊墩果酸的含量均較高，是連翹的主要活性成分，為保證藥材的質(zhì)量，應(yīng)在連翹完全成熟后采收老翹為最正確。3.4含量測定方法的建立采用HPL法，以外標(biāo)法同時(shí)測定連翹中烏索酸和齊墩果酸的含量，方法準(zhǔn)確，快速，靈敏，重現(xiàn)性好，可用于連翹的質(zhì)量評價(jià)和控制。參考文獻(xiàn)：1李英霞，孟慶梅連翹的本草考證J.中藥材，2002，25(6)：435.2張海燕連翹化學(xué)成分及藥理活性的研究進(jìn)展J.中藥材，2000，23(10):657.3陳玉俊，項(xiàng)進(jìn)，許美娟，等連翹化學(xué)成分的研究J.中國中藥雜志，1999，24(5):296.4田麗婷，馬龍，堵年生齊墩果酸的藥理作用研究概