大葉蛇葡萄化學(xué)成分研究

1、大葉蛇葡萄化學(xué)成分研究【摘要】目的別離和鑒定大葉蛇葡萄的化學(xué)成分。方法利用硅膠柱色譜、SephadexLH-20柱色譜等方法進(jìn)展別離純化，根據(jù)理化性質(zhì)和波譜數(shù)據(jù)進(jìn)展構(gòu)造鑒定。結(jié)果得到7個(gè)化合物，分別鑒定為蛇葡萄素()、楊梅素()、花旗松素()、槲皮素()、槲皮素-3-L-鼠李糖苷()、楊梅苷()、-谷甾醇()。結(jié)論化合物均為首次從該種植物中別離并鑒定?！娟P(guān)鍵詞】大葉蛇葡萄;化學(xué)成分;別離;鑒定大葉蛇葡萄A.egalphyllaDielset.Gilg為葡萄科蛇葡萄屬植物,味酸澀,性平,具有清熱利濕、活血化瘀的功能，用于治療高血壓并痢疾、泄瀉、小便淋痛、頭昏目脹等1，在我國(guó)主要分布于湖北、陜西、

2、甘肅、福建、四川、貴州、云南等地2。目前，國(guó)內(nèi)外關(guān)于該種植物的研究較少3。為了更好地開發(fā)大葉蛇葡萄這味傳統(tǒng)藥材，本課題組前期已進(jìn)展了一系列的研究工作，包括生藥學(xué)研究4、抗高血壓有效部位挑選實(shí)驗(yàn)研究5及HPL指紋圖譜研究6。筆者對(duì)湖北恩施采集的大葉蛇葡萄進(jìn)展了化學(xué)成分研究，利用硅膠柱色譜、SephadexLH-20柱色譜等方法進(jìn)展別離純化，得到7個(gè)化合物，通過理化性質(zhì)和波譜數(shù)據(jù)鑒定了它們的構(gòu)造?；衔锞鶠槭状螐脑撝参镏蟹值谩?儀器與材料VarianINVA-600型核磁共振儀(內(nèi)標(biāo)為TS，美國(guó)Varian公司)，F(xiàn)innigan-TRAES型質(zhì)譜儀，可見-紫外分光分光光度儀(SHIADZU，UV

3、-2401)，顯微熔點(diǎn)測(cè)定儀(北京西城光學(xué)儀器廠)。SephadexLH-20(美國(guó)Pharaia公司)，硅膠柱用硅膠(100200目，試劑級(jí)，青島海洋化工)。實(shí)驗(yàn)所用試劑均為分析純，水為重蒸水。大葉蛇葡萄采于湖北省恩施地區(qū)，經(jīng)湖北中醫(yī)學(xué)院生藥學(xué)教研室張秀橋副教授鑒定為葡萄科蛇葡萄屬植物大葉蛇葡萄A.egalphyllaDielset.Gilg，取其莖葉為實(shí)驗(yàn)材料。2方法與結(jié)果2.1提取與別離將8.5kg大葉蛇葡萄藥材粉碎后，分別以10倍量95%，75%乙醇滲漉提取1次(浸泡24h，流速10l/in)，合并提取液，減壓回收乙醇并濃縮至小體積(5.5L)。將浸膏加適量水分散，依次用石油醚、醋酸乙

4、酯萃齲取醋酸乙酯萃取部位干浸膏200g拌樣后上正相硅膠柱，以石油醚-丙酮梯度洗脫，得到各組分再反復(fù)經(jīng)硅膠柱色譜、制備薄層色譜、SephadexLH-20柱色譜得到化合物(55g)，(19g)，(20g)，(5g)，(7g)，(50g)，(10g)。2.2構(gòu)造鑒定2.2.1化合物無色針狀結(jié)晶，p：244245。鹽酸-鎂粉反響和三氯化鐵反響均為陽性，lish試驗(yàn)為陰性。FAB-S/z(%)：321(+1,12)、304(3)、277(13)、241(3)、186(7)、185(100)、167(4)、149(4)。1H-NR(D3D3，600Hz)：4.56(1H，d，J=11.4Hz，H-3)，

5、4.94(1H,d,J=11.4Hz,H-2)，5.98(1H,d,1.8Hz,H-8)，5.94(1H,d,1.8Hz,H-6)，6.62(2H,s,H-2,6)，11.72(1H,s,5-H)。13-NR(D3D3,150Hz)：198.0(-4)，167.8(-7)，164.9(-9)，164.0(-5)，146.2(-3、-5)，134.1(-4)，128.9(-1)，107.9(-2、-6)，101.4(-10)，96.9(-6)，95.9(-8)，84.6(-2)，73.1(-3)。以上理化常數(shù)和波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)7報(bào)道一致，確定化合物為蛇葡萄素(apelpsin)。2.2.2化合物黃

6、色針狀結(jié)晶，p：324325。鹽酸-鎂粉反響和三氯化鐵反響均為陽性，lish試驗(yàn)為陰性。S/z(%)：320(+2)、319(+1)、318(+,100)、317(+-1,10)、303、302、301、290(6)、289(+-H,9)、286、273(3)、245(5)、216(+-8H6,2)、153(-8H64-H,3)、136(1)、108(2)、51(2)。1H-NR(D3D3,600Hz)：7.42(2H,s,H-2,6)，6.51(1H,d,J=1.8Hz,H-8)，6.26(1H,d,J=1.8Hz,H-6)，12.16(1H,s,5-H)。以上理化常數(shù)和波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)8報(bào)道

7、一致，確定化合物為楊梅素(yrietin)。2.2.3化合物白色針狀結(jié)晶，p：220221。鹽酸-鎂粉反響和三氯化鐵反響均為陽性，lish試驗(yàn)為陰性。1H-NR(D3D3，600Hz)：4.60(1H,d,J=11.4Hz,H-3)，5.02(1H,d,J=11.4Hz,H-2)，5.94(1H,d,1.2Hz,H-6)，5.98(1H,d,1.2Hz,H-8)，6.86(1H,d,8.4Hz,H-5)，6.91(1H,dd,J=8.4Hz,1.8Hz,H-6)，7.06(1H，d，J=1.8Hz，H-2)。13-NR(D3D3,150Hz)：198.1(-4)，167.7(-7)，164.9

8、(-5)，164.1(-9)，146.4(-4)，145.6(-3)，129.7(-1)，120.7(-6)，115.7(-2)，115.6(-5)，101.4(-10)，96.9(-6)，95.9(-8)，84.4(-2)，73.0(-3)。以上理化常數(shù)和波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)9報(bào)道一致，確定化合物為花旗松素(Taxiflin)。2.2.4化合物淡黃色粉末，p：308310。鹽酸-鎂粉反響和三氯化鐵反響均為陽性，lish試驗(yàn)為陰性。1H-NR(D3D3,600Hz)：6.26(1H,d,J=1.8Hz,H-6)，6.52(1H,d,J=1.8Hz,H-8),6.99(1H,d,J=8.4Hz,H-5

9、),7.69(1H,dd,J1=8.4Hz,1.8Hz,H-6),7.82(1H,d,J=1.8Hz,H-2)，12.17(1H,s,5-H)。13-NR(D3D3,150Hz)：176.4(-4)，164.9(-7)，162.3(-9)，157.7(-5)，148.2(-3)，146.9(-2)，145.7(-4)，136.7(-1)，123.7(-3)，121.4(-6)，116.1(-2)，115.6(-5)，104.0(-10)，99.0(-6)，94.4(-8)。以上理化常數(shù)和波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)10報(bào)道一致，確定化合物為槲皮素(Queretin)。轉(zhuǎn)貼于論文聯(lián)盟.ll.2.2.5化合物黃

10、色粉末，p：176179。鹽酸-鎂粉反響和三氯化鐵反響均為陽性。lish反響顯陽性，化合物經(jīng)酸水解后，與標(biāo)準(zhǔn)糖進(jìn)展薄層層析，鑒定為-L-鼠李糖。ESI-S在/z447處可見-H+離子峰，說明該化合物的分子量為448。1H-NR(D3D3,600Hz)：7.49(1H,d,J=1.8Hz,H-2)，6.99(1H,d,J=8.4Hz,H-5)，7.39(1H,dd,J1=8.4,J2=1.8Hz，H-6)，6.47(1H,d,J=2.0Hz,H-8)，6.26(1H,d,J=2.0Hz,H-6)，12.73(1H,s,5-H)，5.51(1H,d,J=1.8Hz,Rha-H-1)，3.324.2

11、1(4H,Rha-H-2Rha-H-5)，0.91(3H,d,J=6.0Hz,Rha-H-6)。13-NR(D3D3,150Hz)：164.9(-7)，163.0(-5)，158.3(-2)，157.9(-9)，148.9(-4)，145.8(-3)，135.8(-3)，122.8(-1)，122.5(-6)，116.6(-2)，116.0(-5)，105.7(-10)，99.4(-6)，94.4(-8)，102.7(Rha-1)、72.9(Rha-4)、72.0(Rha-3)、71.4(Rha-2)、71.2(Rha-5)、17.7(Rha-6)。由HQ譜和HB譜可以得到每個(gè)和其直接相關(guān)及遠(yuǎn)

12、程相關(guān)的H的信息，能準(zhǔn)確的歸屬每個(gè)、H信號(hào)。由HQ譜得到了2、6、5、6、8和鼠李糖端基的、H信號(hào)。由HB譜可以判斷出糖的連接位置是135.8(-3)，同時(shí)也驗(yàn)證了各取代基團(tuán)的位置。根據(jù)以上理化常數(shù)和波譜數(shù)據(jù)，確定化合物為槲皮素-3-L-鼠李糖苷(Quereetin-3-L-rhanside)。2.2.6化合物淺黃色粉末狀結(jié)晶，p：177178。鹽酸-鎂粉反響和三氯化鐵反響均為陽性。lish反響顯陽性，化合物經(jīng)酸水解后，得到沉淀和水液兩局部，沉淀經(jīng)TL鑒定為楊梅素，水液局部經(jīng)TL鑒定為鼠李糖。以上信息提示糖基可能連在-3位上。S/z(%)：320(5)、319(19)、318(+-6H104，

13、100)、302(69)、286(5)、261(3)、245(6)、229(3)、153(-6H104-8H64-H，10)、128(4)、85(17)、57(3)。1H-NR(D3D,600Hz)：6.94(2H,s,H-2,6)，6.19(1H,d,J=1.8Hz,H-6)，6.35(1H,d,J=1.8Hz,H-8)，5.31(1H,d,J=1.8Hz,Rha-H-1),3.304.21(4H,Rha-H-2Rha-H-5),0.96(3H,d,J=6.0Hz,Rha-H-6)。以上理化常數(shù)和波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)7報(bào)道的楊梅苷相符合，確定該化合物為楊梅苷(yrietrin)。2.2.7化合物無

14、色針晶，p：137138。IR(KBr)-1：3429、1059(-H)、2936、1463、1379;1H-NR(DI3,600Hz)：5.348(1H,s,-H)、5.057(1H,H-6)、3.529(1H,H-3)。與對(duì)照品-谷甾醇共薄層，經(jīng)石油醚-丙酮(體積比5:1)、石油醚-醋酸乙酯(體積比41)、環(huán)己烷-丙酮(體積比41)3種溶劑系統(tǒng)展開，Rf值均一致，且與-谷甾醇對(duì)照品混合熔點(diǎn)不下降，故鑒定化合物為-谷甾醇。3討論本課題組在進(jìn)展大葉蛇葡萄化學(xué)成分后續(xù)研究，以期能挑選得到專屬性或特征性有效成分，為該藥材的品質(zhì)評(píng)價(jià)和新藥開發(fā)提供科學(xué)根據(jù)。【參考文獻(xiàn)】1中國(guó)藥材公司.中國(guó)中藥資源志要.北京:科學(xué)出版社，1994：722.2湖北省衛(wèi)生局.湖北中草藥志，第2冊(cè).武漢:湖北人民出版社，1982：1078.3沈偉，陳樹和，張秀橋，等.蛇葡萄屬藥用植物研究概況J.湖北中醫(yī)雜志,2022,28(9):55.4張秀橋，程蓮銀，張琦，等.霉茶的性狀和顯微特征J.中藥材，2022，27(5):330.5孫曉杰，沈偉,張秀橋，等.大葉蛇葡萄抗高血壓有效部位挑選實(shí)驗(yàn)研究J.齊魯藥事,2022,27(12):747.6沈偉，陳樹和，張秀橋，等.大葉蛇葡萄有效部位HPL指紋圖譜研究J.時(shí)珍國(guó)