浙江省年高中生物疑難問題解決專題培訓(xùn)資料：植物組織培

1、植物組織培養(yǎng)技術(shù)主要內(nèi)容植物組織的基本概念植物組織培養(yǎng)的過程植物組織培養(yǎng)影響因素植物組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室的設(shè)置植物組織培養(yǎng)的基本概念 (1) 植物組織培養(yǎng): 在無菌培養(yǎng)的條件下，將離體的植物器官（根，莖，葉，花，果實(shí)等）、組織（形成層，花藥組織等）、細(xì)胞（體細(xì)胞，生殖細(xì)胞等）以及原生質(zhì)體等培養(yǎng)在人工配制的培養(yǎng)基上，并給予適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)條件，使其長成完整植株的過程。 (2) 外植體： 從活體植株上切下的，用于組織培養(yǎng)的細(xì)胞、組織和器官。一般包括莖尖、根、莖、葉、花、種子等器官以及他們形成的體細(xì)胞胚等材料。 (3) 脫分化： 已經(jīng)高度分化的植物器官、組織或細(xì)胞，在切割損傷和培養(yǎng)物內(nèi)外因素的共同作用下，逐漸喪

2、失原來的分化結(jié)構(gòu)和功能，最后形成無組織的細(xì)胞團(tuán)或愈傷組織的過程。(4)愈傷組織： 在人工培養(yǎng)基上由外植體脫分化形成的一團(tuán)無序生長的薄壁細(xì)胞。（具有細(xì)胞分裂能力）(5) 胚狀體： 在離體植物細(xì)胞、組織或器官培養(yǎng)過程中，由一個或一些體細(xì)胞，經(jīng)過胚胎發(fā)生和發(fā)育過程，形成的與合子胚相類似的結(jié)構(gòu)。(6)再分化： 已經(jīng)脫分化的細(xì)胞在一定條件下，又可經(jīng)過愈傷組織或胚狀體，再分化出根和芽，形成完整植株 ，這一過程叫作再分化。 (7) 不定芽： 凡從葉、根、或莖節(jié)間等通常不形成芽的部位生出的芽，則統(tǒng)稱為不定芽 (8) 植物組織器官發(fā)生途徑（見下圖）植物組織培養(yǎng)過程培養(yǎng)基的配置無菌接種操作培養(yǎng)MS培養(yǎng)基的配制操作

3、步驟（1）MS培養(yǎng)基母液的配制: MS培養(yǎng)基含有十幾多種化合物，配制不方便也難稱量準(zhǔn)確，可將培養(yǎng)基中的各種成分?jǐn)U大一定倍數(shù)分別稱量，配成濃縮液，這種濃縮液叫做培養(yǎng)基母液。(母液配制見下表) （ 2）MS培養(yǎng)基的配制: 按比例分別取適量各種成分的母液，加入燒杯，稱取蔗糖30g，瓊脂7g，加水并加熱使瓊脂溶解，按照需要的濃度分別加入激素，用1mol/L NaOH和1mol/L HCl溶液調(diào)節(jié)pH至5.86.0。將配好的培養(yǎng)基迅速分裝至150ml組培瓶中，擰上蓋子，放入滅菌鍋121，滅菌20min。植物組培具體操作步驟（1）取材： 取菊花生長旺盛的嫩枝(外植體不能太小，否則會影響愈傷組織的形成)。（

4、2）消毒： 流水沖洗后,加少許洗衣粉刷洗,流水沖20分鐘; 放入75酒精中搖動23次,持續(xù)30秒,無菌水沖洗23次，用無菌吸水紙吸干; 在210%的次氯酸鈉溶液中消毒810分鐘,無菌水沖洗23次，無菌吸水紙吸干。（3）接種：常用滅菌劑使用濃度及效果比較表 植物組織培養(yǎng)消毒與接種示意圖無菌苗培養(yǎng)（1） 愈傷組織與不定芽的誘導(dǎo)培養(yǎng) 選用合適的培養(yǎng)基分別對植物材料進(jìn)行愈傷組織和不定芽的誘導(dǎo)。（2） 生根培養(yǎng) 選用生根培養(yǎng)基對無菌苗進(jìn)行生根培養(yǎng)。（3）材料的移栽及溫室培養(yǎng)： 煉苗：先在外界環(huán)境閉瓶鍛煉3天，再開瓶鍛煉3天（以培養(yǎng)基上開始長出菌為宜）。 移栽：去凈培養(yǎng)基，可先在滅過菌的珍珠巖或蛭石上培養(yǎng)使根系發(fā)達(dá)再轉(zhuǎn)移到土壤中。第五章 影響植物組織培養(yǎng)的影響因素及注意事項(xiàng)影響植物組織培養(yǎng)的幾個因素植物的材料