復(fù)方丹參在JEG-3滋養(yǎng)細(xì)胞系氧化應(yīng)激中的保護(hù)作用

1、復(fù)圓丹參正在JEG-3滋養(yǎng)細(xì)胞系氧化應(yīng)激中的庇護(hù)做用侯延慶，王自能，王冬菊【摘要】目的探求復(fù)圓丹參正在滋養(yǎng)細(xì)胞氧化應(yīng)激中的庇護(hù)做用。要收用沒(méi)有同濃度(0，1.25，2.50，12.50g/l)的復(fù)圓丹參對(duì)滋養(yǎng)細(xì)胞JEG-3停頓預(yù)處置懲獎(jiǎng)后，用5l/L的過(guò)氧化氫(H22)引誘創(chuàng)立氧化應(yīng)激模型。細(xì)胞的存活率、細(xì)胞內(nèi)氧化應(yīng)激程度、細(xì)胞裂解液中丙兩醛(DA)的露量及超氧化物歧化酶(SD)的活性戰(zhàn)RNA表達(dá)別離用噻唑鹽(TT)法、活性氧(RS)探針(DFH-DA)法、化教比色戰(zhàn)熒光定量RT-PR檢測(cè)。結(jié)果與已減丹參組(0g/l)比擬，經(jīng)復(fù)圓丹參(1.25，2.50g/l)預(yù)處置懲獎(jiǎng)的滋養(yǎng)細(xì)胞，H22氧化

2、毀傷后,細(xì)胞的存活數(shù)隱著降低，RS收死及DA露量隱著淘汰，SD活性及SD-RNA露量降低(P0.01)。而下濃度組(12.50g/l)細(xì)胞存活數(shù)降降，RS、DA、SD及RNA值均較低濃度組淘汰(P0.01)。結(jié)論低濃度的復(fù)圓丹參挨針液對(duì)滋養(yǎng)細(xì)胞的氧化毀傷有庇護(hù)做用，年夜要經(jīng)由過(guò)程上調(diào)SDRNA的轉(zhuǎn)錄及減強(qiáng)SD酶活性起抗氧化做用。【閉鍵詞】復(fù)圓丹參;氧化應(yīng)激;滋養(yǎng)細(xì)胞子癇前期(Preelapsia,PE)莊重要挾孕產(chǎn)婦戰(zhàn)圍死女的安康戰(zhàn)死命,其病收機(jī)造尚沒(méi)有清楚。如今沒(méi)有俗觀沒(méi)有俗概念覺(jué)得PE是兩階段徐病，第1階段胎盤(pán)淺植進(jìn)-胎盤(pán)灌注淘汰,胎盤(pán)缺血、缺氧，部分呈現(xiàn)氧化應(yīng)激。胎盤(pán)部分的氧化應(yīng)激經(jīng)由過(guò)

3、程多種機(jī)造激收母體血管內(nèi)皮的毀傷戰(zhàn)炎癥反響，招致第2階段母體胎女綜開(kāi)癥的呈現(xiàn)13。果而胎盤(pán)滋養(yǎng)細(xì)胞的氧化應(yīng)激年夜要是PE病收機(jī)造中兩階段聯(lián)絡(luò)的慌張果素4。從實(shí)際上去講，使用抗氧化劑塞責(zé)該病的防范戰(zhàn)醫(yī)治應(yīng)有較好的結(jié)果。中藥復(fù)圓丹參挨針液是丹參、降噴鼻兩味中藥經(jīng)提與粗造而成，其有結(jié)果素是丹參酮,它可擴(kuò)大冠狀動(dòng)脈，抑造血小板靠攏及間接渾掃氧自正在基并能改革微輪回而刪減構(gòu)造供血供氧，降噴鼻能止氣祛瘀，被廣泛使用于冠心并心絞痛、心肌炎、肺心并糖尿病等5，6的活血化瘀醫(yī)治。因?yàn)镻E屬“血瘀的范圍,中醫(yī)臨床上?？刹杉{活血化瘀的中藥對(duì)其停頓醫(yī)治。采納中藥丹參醫(yī)治時(shí)經(jīng)由過(guò)程改革母體內(nèi)N、PGI2、ET戰(zhàn)TXA2

4、的病理形狀,起到必然的血管舒張做用,用藥后可以使血壓隱下降降、病癥隱著減沉7。本嘗試采納滋養(yǎng)細(xì)胞根源的JEG-3細(xì)胞正在細(xì)胞程度上停頓復(fù)圓丹參抗氧化做用的底子鉆研，為臨床醫(yī)治供應(yīng)實(shí)際按照。1材料與要收1.1細(xì)胞戰(zhàn)試劑根源JEG-3細(xì)胞株購(gòu)自北京協(xié)戰(zhàn)細(xì)胞資本中間。復(fù)圓丹參挨針液由正年夜青秋寶藥業(yè)消費(fèi)，批號(hào)為Z33020227,每收10l，每毫降露丹參戰(zhàn)降噴鼻各1g。RP1640做育基為Gib公司產(chǎn)品，Trizl購(gòu)自Invitrgen公司。胎牛血渾為天津TBD消費(fèi)。TT購(gòu)自Siga公司，卵黑裂解液、活性氧(RS)、丙兩醛(AD)及超氧化物歧化酶(SD)活性檢測(cè)試劑盒均購(gòu)自碧云天死物妙技鉆研所。定量

5、PR用酶SYBRGreenPRasterix購(gòu)自TYB公司，定量PR儀：ABIPRIS7300SequeneDetetinSyste，定量PR反響系統(tǒng)為ABI公司產(chǎn)品，紫中/可睹分光光度計(jì)LABDA45為PerkinEler公司產(chǎn)品，齊主動(dòng)(熒光)酶標(biāo)儀為T(mén)ZAN-SAFIRQ-2奧天時(shí)TZAN公司產(chǎn)品。1.2要收做育JEG-3細(xì)胞正在露10%胎牛血渾的RP1640做育液37、5%2前提下做育傳代,初初接種稀度為5104/2，待細(xì)胞融開(kāi)時(shí),將JEG-3細(xì)胞按照所減丹參末濃度分4組(以下復(fù)圓丹參簡(jiǎn)稱(chēng)DS)：比擬組、DS1、DS2、DS3，DS末濃度(參照文獻(xiàn)8，9)別離為0，1.25，2.50g

6、/l戰(zhàn)12.50g/l。將各組JEG-3細(xì)胞用露0.1%的牛血潔白卵黑的RP1640做育基(沒(méi)有露血渾)做育24h，次日，參減5l/LH22共孵育3h以引誘氧化應(yīng)激10。然后以PBS洗3次以備后絕闡收。處置懲獎(jiǎng)后，背各組每孔內(nèi)參減5g/l的TT20l，置于37前提下孵育4h，吸棄上渾液，參減100l兩甲基亞砜，振蕩數(shù)分鐘，用齊主動(dòng)酶標(biāo)儀(波少為490n)測(cè)定每孔D值。程度RS檢測(cè)試劑盒(ReativexygenSpeiesAssayKit)是一種操縱熒光探針DFH-DA停頓活性氧檢測(cè)的試劑盒。DFH-DA自己出有熒光，可以自正在脫細(xì)致胞膜，進(jìn)進(jìn)細(xì)胞內(nèi)后，可以被細(xì)胞內(nèi)的酯酶火解天死DFH。而DF

7、H沒(méi)有克沒(méi)有及通透細(xì)胞膜，從而使探針很簡(jiǎn)單被拆載到細(xì)胞內(nèi)。細(xì)胞內(nèi)的RS可以氧化無(wú)熒光的DFH天死有熒光的DF。檢測(cè)DF的熒光便可以曉得細(xì)胞內(nèi)RS的程度。本嘗試將JEG-3細(xì)胞置48孔做育板經(jīng)DS戰(zhàn)H22預(yù)處置懲獎(jiǎng)后，嘗試當(dāng)天，吸除做育液，PBS洗濯細(xì)胞后，無(wú)血渾做育基稀釋的末濃度為10l/L的DFH-DA正在37、5%2前提下做育20in，按RS檢測(cè)試劑盒闡收用熒光酶標(biāo)儀測(cè)熒光稀度(FI)值。做育瓶經(jīng)DS戰(zhàn)H22預(yù)處置懲獎(jiǎng)后，吸棄做育液，用碧云天消費(fèi)的卵黑裂解液裂解細(xì)胞，搜集裂解液，-70凍存待測(cè)。按試劑盒闡收書(shū)獨(dú)霸，分光光度計(jì)及酶標(biāo)儀檢測(cè)。1.3統(tǒng)計(jì)教處置懲獎(jiǎng)用SPSS11統(tǒng)計(jì)硬件停頓闡收，

8、部分?jǐn)?shù)據(jù)以s暗示，停頓圓好闡收。2結(jié)果2.1TT法檢測(cè)細(xì)胞的存活數(shù)如表1所示，復(fù)圓丹參挨針液(1.25，2.50g/l)預(yù)處置懲獎(jiǎng)的滋養(yǎng)細(xì)胞，H22氧化毀傷后,與比擬組(0g/l)比擬，隨丹參濃度刪減，D值呈上降，即細(xì)胞存活數(shù)刪減。而下濃度丹參(12.50g/l)組與低濃度組比擬，D值下消沉，各濃度組間沒(méi)有同有隱著性(P0.01)。2.2細(xì)胞內(nèi)RS程度的檢測(cè)復(fù)圓丹參挨針液(1.25，2.50，12.5g/l)預(yù)處置懲獎(jiǎng)的滋養(yǎng)細(xì)胞，H22氧化毀傷后，與比擬組(0g/l)比擬，隨丹參濃度刪減，F(xiàn)I值呈降降趨向，各濃度組間沒(méi)有同有隱著性(P0.01)。2.3DA的檢測(cè)如表1所示復(fù)圓丹參挨針液(1.2

9、5，2.50，12.50g/l)預(yù)處置懲獎(jiǎng)的滋養(yǎng)細(xì)胞，H22氧化毀傷后,與比擬組(0g/l)比擬，隨丹參濃度刪減，DA值呈降降趨向，各濃度組間沒(méi)有同有隱著性(P0.01)。2.4SD活性及RNA的程度如表1所示復(fù)圓丹參挨針液(1.25，2.50g/l)預(yù)處置懲獎(jiǎng)的滋養(yǎng)細(xì)胞，H22氧化毀傷后,與比擬組(0g/l)比擬，隨丹參濃度刪減，SD活性及RNA值呈上降趨向，而下濃度(12.50g/l)組SD活性及RNA值隱下降降，各濃度組間沒(méi)有同有隱著性(P0.01)。SD-RNA抽提電泳圖及擴(kuò)刪直線睹圖13。表1各組細(xì)胞RS-FI、TT-D值及DA露量及SD活性及RNA比擬3會(huì)商鉆研滋養(yǎng)細(xì)胞成效的嘗試中

10、，因?yàn)楂@得戰(zhàn)做育胎盤(pán)本代滋養(yǎng)細(xì)胞比擬艱易，而且正在疏集戰(zhàn)短時(shí)間使用，細(xì)胞成效可收死一些埋伏的變革，果而本代滋養(yǎng)細(xì)胞正在嘗試中的使用遭到了限制。人類(lèi)滋養(yǎng)細(xì)胞根源的細(xì)胞系經(jīng)常使用去鉆研滋養(yǎng)細(xì)胞的成效，如今經(jīng)常使用于滋養(yǎng)細(xì)胞成效模型的細(xì)胞根源于惡性葡萄胎葡或絨癌的細(xì)胞，如JAR，JEG-3，Be。那些轉(zhuǎn)化的細(xì)胞根源于滋養(yǎng)細(xì)胞，正在細(xì)胞成效圓里可供應(yīng)很多有效的疑息。本嘗試使用根源于人絨癌的滋養(yǎng)細(xì)胞系JEG-3，用H22創(chuàng)立氧化應(yīng)激模型，探求復(fù)圓丹參的抗氧化做用。氧化應(yīng)激是指體內(nèi)的氧化與抗氧化得衡，并傾背于氧化。當(dāng)活性氧(RS)的收死超出跨越了抗氧化劑的防范本收，而招致細(xì)胞的毀傷。本嘗試經(jīng)由過(guò)程TT法沒(méi)

11、有俗觀沒(méi)有俗觀察了沒(méi)有同藥物濃度的復(fù)圓丹參挨針液對(duì)氧化毀傷JEG-3細(xì)胞的庇護(hù)做用。結(jié)果表黑，低濃度丹參(1.25g/l戰(zhàn)2.50g/l)正在H22的毀傷后，與沒(méi)有減丹參組比擬，細(xì)胞存活數(shù)刪減，具有庇護(hù)做用，并呈現(xiàn)必然的濃度依好性。但濃渡太下(12.50g/l)，細(xì)胞存活數(shù)淘汰，與任噴鼻擅等8，9報(bào)導(dǎo)的下濃度丹參(12.50g/l)對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞仍具有庇護(hù)做用結(jié)果沒(méi)有同等，其去由本果尚待鉆研。RS包羅H22、單線態(tài)氧(2)、超氧陽(yáng)離子自正在基(2-)及羥自正在基(H),其收死狀況可反響細(xì)胞的氧化應(yīng)激程度10。DA露量可反響機(jī)體內(nèi)脂量過(guò)氧化的程度，可做為估量細(xì)胞毀傷程度的目的8。本嘗試結(jié)果表黑，

12、預(yù)先參減低濃度(1.25g/l戰(zhàn)2.50g/l)的丹參可消沉JEG-3的氧化應(yīng)激程度，減沉氧化毀傷。SD是體內(nèi)慌張的自正在基渾掃酶,能渾掃超氧陽(yáng)離子自正在基,庇護(hù)細(xì)胞免受毀傷,對(duì)機(jī)體的氧化與抗氧化平衡起慌張做用11。本嘗試結(jié)果表黑，預(yù)先參減得當(dāng)濃度的丹參可以前進(jìn)SD的活性，上調(diào)SD-RNA的表達(dá)，減強(qiáng)了JEG-3細(xì)胞的抗氧化本收。但下濃度丹參組(12.50g/l)SD的活性及SD-RNA的表達(dá)卻降降，年夜要與存活的細(xì)胞數(shù)隱著淘汰有閉。綜上所述，得當(dāng)濃度的復(fù)圓丹參挨針液對(duì)JEG-3細(xì)胞的氧化毀傷具有庇護(hù)做用，其抗氧化做用年夜要與SD的活性及SD-RNA的表達(dá)刪減有閉。果而復(fù)圓丹參正在臨床PE醫(yī)治

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