主動(dòng)載藥法制備苦參堿脂質(zhì)體的研究

1、主動(dòng)載藥法制備苦參堿脂質(zhì)體的研究【摘要】目的考察脂質(zhì)體不同制備方法對(duì)包封率的影響。方法采用被動(dòng)載藥和主動(dòng)載藥制備脂質(zhì)體，用微柱離心-紫外分光光度法測(cè)定脂質(zhì)體包封率。結(jié)果被動(dòng)載藥法制備脂質(zhì)體包封率較低，主動(dòng)載藥制備脂質(zhì)體包封率為84.38%。結(jié)論采用硫酸銨梯度法可制得包封率較高的苦參堿脂質(zhì)體。【關(guān)鍵詞】苦參堿；脂質(zhì)體；主動(dòng)載藥；被動(dòng)載藥Abstrat：bjetiveTstudytheinfluenefdifferentpreparatinethdsntheentrapenteffiieny.ethdsTprepareatrinelipsesbypassiveladingethdandavtive

2、ladingethd,theentrapenteffiienieseredeterinedbyinilunentrifuge-UVethd.ResultsTheentrapenteffiienyithpassiveladingethdasl,hileupt84.38%ithativeladingethd.nlusinTheatrinelipsesithhighentrappingeffiienyanbepreparedbyaniusulphategradienethd.Keyrds：atrine;Lipses;Ativelading;Passivelading苦參堿是豆科屬植物苦參、苦豆子、廣

3、豆根等中草藥的活性成分，具有抗腫瘤、抗病毒、抗心律失常、抗炎等多種藥理作用，尤其抗肝癌活性廣泛應(yīng)用于臨床1。但如今臨床應(yīng)用的苦參堿制劑存在體內(nèi)吸收分布廣泛、半衰期短、治療部位藥物濃度低、有一定副作用的缺點(diǎn)。將苦參堿制為脂質(zhì)體，可進(jìn)步藥物的肝靶向性，延長(zhǎng)作用時(shí)間。脂質(zhì)體制備很多，可分為被動(dòng)載藥和主動(dòng)載藥兩大類。本文優(yōu)選微柱離心法測(cè)定脂質(zhì)體包封率，比擬了不同制備方法對(duì)其包封率的影響。1儀器和試藥2方法與結(jié)果2.1被動(dòng)載藥和主動(dòng)載藥制備脂質(zhì)體以下制備方法中，磷脂與膽固醇配比為31，藥物最終濃度為2g/l，磷酸鹽緩沖液pH6.8。2.1.1被動(dòng)載藥乙醚注入法：將磷脂和膽固醇溶于適量乙醚中，電磁攪拌下，

4、用注射針頭注入溶有苦參堿的磷酸鹽緩沖液中，繼續(xù)攪拌至揮盡有機(jī)溶劑，即得。薄膜分散法：將磷脂和膽固醇溶于適量氯仿中，30減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，除去氯仿成膜，參加溶有苦參堿的磷酸鹽緩沖液，恒溫?fù)u床振搖20in，攪拌，即得。逆相蒸發(fā)法：將磷脂和膽固醇溶于氯仿中，參加溶有苦參堿的磷酸鹽緩沖液，油水兩相旋搖后置于超聲儀中超聲10in，直至形成穩(wěn)定的/型乳劑，所得乳劑在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀48上減壓除去氯仿，再加適量磷酸鹽緩沖液繼續(xù)減壓除去剩余氯仿，并洗下壁上的凝膠。水浴，使磷脂充分水合，再進(jìn)展短時(shí)超聲，即得。凍融法：結(jié)合其它方法，將制得脂質(zhì)體放冰箱中冷凍，再在室溫中融化，如此反復(fù)幾次。2.1.2主動(dòng)載藥硫酸銨梯度法2，3

5、：將磷脂和膽固醇溶于氯仿中，減壓蒸發(fā)，制備磷脂膜，參加200l/L的硫酸銨溶液預(yù)熱至50，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，至50水浴中水化1h，超聲10in，得空白脂質(zhì)體。將空白脂質(zhì)體依次通過(guò)0.8，0.65，0.45和0.22的微孔濾膜，進(jìn)展整粒。整粒后脂質(zhì)體裝入透析袋中，置于100倍體積的0.9%Nal溶液中透析24h，每隔一定時(shí)間更換透析液，共3次。取此空白脂質(zhì)體，參加溶有苦參堿的磷酸鹽緩沖液，40水浴孵化5in。2.2包封率測(cè)定方法建立2.2.1脂質(zhì)體中藥物含量的測(cè)定取苦參堿標(biāo)準(zhǔn)品適量，用磷酸鹽緩沖液溶解，稀釋至一定濃度1g/l，與溴代麝香草酚蘭絡(luò)和顯色，于413n處測(cè)定氯仿層吸光度A為0.327。另取磷酸

6、鹽緩沖液5份，用Hl調(diào)pH分別為7.0，6.0，5.0，3.0，1.0。用上述5種溶液分別配制1g/l的苦參堿溶液，將每種溶液分成兩份，其中一份參加適量氯仿，搖勻，3000r/in離心10in，取上清液調(diào)pH值至7.0并定容，與溴代麝香草酚蘭絡(luò)和顯色4，于413n處測(cè)定氯仿層吸光度A1；另一份中參加空白脂質(zhì)體適量，同法測(cè)吸光度值A(chǔ)2，結(jié)果見表1和圖1?？梢?，溶液pH值對(duì)氯仿萃取回收率影響顯著，當(dāng)pH到達(dá)1.0時(shí)，回收率接近100%，因此，實(shí)驗(yàn)采用先調(diào)低pH值，再進(jìn)展氯仿萃取的方法，可有效別離主藥與脂質(zhì)體膜材，為紫外分光光度法測(cè)定苦參堿脂質(zhì)體中苦參堿含量奠定了基矗表1不同pH值苦參堿回收率比擬略

7、2.2.2透析法測(cè)包封率5透析時(shí)間確實(shí)定：精細(xì)汲取苦參堿磷酸鹽緩沖液2l入透析袋中，扎緊上口，至磷酸鹽緩沖液20l中，置于恒溫水浴中振蕩，每隔1h取樣5l并補(bǔ)充等體積磷酸鹽緩沖液，樣液以磷酸鹽緩沖液為空白，測(cè)定吸收度，由結(jié)果知9h可到達(dá)透析平衡，透析袋內(nèi)外苦參堿濃度相等。精細(xì)汲取空白脂質(zhì)體2l入透析袋中，置磷酸鹽緩沖液中透析，每1h更換透析液，測(cè)吸光度，結(jié)果空白脂質(zhì)體在12h后開場(chǎng)在透析外液中被檢出。故確定透析時(shí)間為9h。苦參堿脂質(zhì)體包封率測(cè)定：精細(xì)汲取苦參堿脂質(zhì)體2l入透析袋中，扎緊上口，至磷酸鹽緩沖液20l中透析，每隔1h取樣5l并補(bǔ)充等體積磷酸鹽緩沖液，共搜集9h透析液，定容，作為供試樣

8、品透析液。精細(xì)汲取空白脂質(zhì)體同法操作，以空白脂質(zhì)體的透析液為參比，測(cè)樣品透析液的吸光度A外，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算透過(guò)藥量外。轉(zhuǎn)貼于論文聯(lián)盟.ll.另精細(xì)汲取苦參堿脂質(zhì)體2l，照苦參堿脂質(zhì)體含量測(cè)定方法，測(cè)定脂質(zhì)體中苦參堿總藥量總。包封率總外總2.2.3微柱離心法測(cè)包封率6凝膠柱的處理：稱取適量SephadexG-50，加水，在近沸水浴中將濕凝膠逐漸升溫溶脹，大約需要5h，放冷備用?？瞻字|(zhì)體與游離藥物的柱別離：微型柱的制備：5l塑料注射器，底部有一塑料板和玻璃棉，先用蒸餾水洗注射器，再用磷酸鹽緩沖液洗。取充分溶脹的SephadexG-50適量，裝入其中(約5)。將注射器針筒放入一干凈的離心管中離心

9、5in(2000r/in)，去水備用。精細(xì)汲取空白脂質(zhì)體、游離藥物各0.5l，分別上樣，于離心機(jī)中離心3in(1500r/in)，用0.5l磷酸鹽緩沖液洗脫，離心3in(1500r/in)，搜集洗脫液，再用0.5l磷酸鹽緩沖液洗脫，重復(fù)上述操作假設(shè)干次，將每次搜集的洗脫液稀釋至5l，測(cè)定吸光度A，以A對(duì)洗脫液的累積體積V作圖，見圖2。由別離曲線可知，經(jīng)磷酸鹽緩沖液洗脫兩次后空白脂質(zhì)體幾乎全部被洗脫下來(lái)，因此只搜集前兩次的洗脫液，合并，測(cè)定包封率?？鄥A脂質(zhì)體包封率測(cè)定：精細(xì)汲取苦參堿脂質(zhì)體0.5l參加微型柱上照2.2.3項(xiàng)下離心，參加0.5l磷酸鹽緩沖液洗脫，離心；再參加0.5l磷酸鹽緩沖液，

10、離心，搜集洗脫液，測(cè)定吸光度，計(jì)算游離藥物量游。另精細(xì)汲取苦參堿脂質(zhì)體0.5l，照苦參堿脂質(zhì)體含量測(cè)定方法，測(cè)定脂質(zhì)體中苦參堿的總藥量總。包封率總游總上述包封率測(cè)定中所用脂質(zhì)體均為硫酸銨梯度法制備，透析法測(cè)得包封率為58.69%，微柱離心法測(cè)得包封率為85.47%。故采用微柱離心法測(cè)包封率較好。用微柱離心法分別測(cè)定被動(dòng)載藥和主動(dòng)載藥法制備的脂質(zhì)體包封率，結(jié)果見表2。表2不同制備方法包封率比擬略由結(jié)果可知，主動(dòng)載藥硫酸銨梯度法制得的脂質(zhì)體包封率最高。3討論3.1在酸性染料比色法測(cè)定苦參堿含量時(shí)，脂質(zhì)體膜材在413n處也有吸收，對(duì)主藥測(cè)定有干擾，必須進(jìn)展預(yù)處理消除膜材的干擾，再測(cè)主藥含量。曾用Tr

11、itnX100破乳，但破乳劑對(duì)測(cè)定有干擾；此外還用甲醇溶解脂質(zhì)體后離心，無(wú)法消除膜材對(duì)測(cè)定的干擾。實(shí)驗(yàn)采用先調(diào)低pH再進(jìn)展氯仿萃取的方法，有效的實(shí)現(xiàn)了主藥與膜材的別離。從試驗(yàn)數(shù)據(jù)看出磷脂作為外表活性劑能增加苦參堿在氯仿中的分配，隨著溶液pH值的降低，藥物在水相中分配比例不斷增大，當(dāng)pH到達(dá)1.0時(shí)，回收率接近100%，可作為測(cè)定脂質(zhì)體中藥物含量前處理的方法。3.2脂質(zhì)體包封率測(cè)定的方法有超濾法、透析法、柱層析法、微柱離心法等。超濾法對(duì)實(shí)驗(yàn)設(shè)備要求較高，故未采用；柱層析法那么由于大量洗脫液的稀釋，藥物含量很低，造成含量測(cè)定的困難，且大量稀釋也引起脂質(zhì)體中藥物滲漏；從所得試驗(yàn)數(shù)據(jù)可知透析法包封率較

12、低，可能是稀釋后引起脂質(zhì)體的破裂，且透析所需時(shí)間長(zhǎng)，故不適用；用微柱離心法進(jìn)展包封率測(cè)定，耗時(shí)短，脂質(zhì)體溶液稀釋倍數(shù)小，且不需要昂貴的儀器設(shè)備。3.3被動(dòng)載藥幾種制備方法制備的脂質(zhì)體包封率較低，而采用主動(dòng)載藥法制得的脂質(zhì)體包封率可到達(dá)80%以上。硫酸銨梯度法是利用硫酸銨溶液作為水相，首先制備內(nèi)外均含有硫酸銨的脂質(zhì)體，然后通過(guò)除去脂質(zhì)體外水溶液中的硫酸銨,使得脂質(zhì)體內(nèi)的硫酸銨濃度與外水相的硫酸銨形成濃度梯度,內(nèi)水相的NH4+分解成NH3和H+，導(dǎo)致脂質(zhì)體內(nèi)外的H+離子濃度差，即pH梯度，使得外水相中分子態(tài)的苦參堿進(jìn)入內(nèi)水相后遇酸性環(huán)境變成離子態(tài)，無(wú)法通過(guò)脂質(zhì)雙層回到外水相，從而使得脂質(zhì)體不易泄漏,更加穩(wěn)定?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】1蔡寶仁，湯蘇陽(yáng).苦參類生物堿的研究進(jìn)展和臨床應(yīng)用J.醫(yī)學(xué)信息(西安)，2001，14(4)：236.2鄧意輝,王紹寧.主動(dòng)載藥法制備鹽酸小檗堿脂質(zhì)體J.中南藥學(xué)雜志，2022,39(1)：40.3鄧意輝,李煥秋,王紹寧，等.主動(dòng)載藥與被動(dòng)載藥制備左氧氟沙星脂質(zhì)體J.中國(guó)抗生素雜志，2001